一种获得高效表达脂肪酶菌株的方法技术

本发明专利技术申请针对现有技术中的不足之处，提供一种获得合成脂肪酶能力强的青霉基因工程菌的方法。具体来说，所述的方法先获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒，然后分别扩增青霉的脂肪酶基因PEL、构巢曲霉的强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子TtrpC，得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒，再将该PEL基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得了含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体，最后将含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体转化工程农杆菌，利用农杆菌介导转化法将PEL基因表达盒转化到青霉菌株中，获得高表达脂肪酶的青霉基因工程菌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术申请涉及一种提高青霉菌株产脂肪酶能力的方法，具体是一种利用构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子(gpdA)驱动扩展青霉菌内源性脂肪酶基因高效表达的方法，属于基因工程

技术介绍
近年来脂肪酶(Lipase EC)在工业应用方面取得了很大进展，碱性脂肪酶具有对底物水解效率高、反应温和、无毒、能在一定条件下水解脂肪作用等优点，已经在洗涤剂、造纸、制革、食品、纺织及轻工业等领域得到广泛的应用，并已经成为全世界酶制剂市场上重要的品种。通过对大量的微生物菌种进行选育，现在已经获得了一种产碱性脂肪酶能力较强的扩展青霉(P. expansium)菌株，并经过多年的诱变育种和发酵工艺改进，其产脂肪酶的能力已经得到大幅度的提高。但是，传统的菌株育种方法主要依靠随机的理化诱变，目标不明确，费时费力而且收效不明显，目前通过采用这些方法来提高该菌株产脂肪酶的能力已经非常有限，潜力小。
技术实现思路
本专利技术申请即是针对现有技术中的不足之处，提供一种获得合成脂肪酶能力强的青霉基因工程菌的方法。具体来说，本专利技术申请所述的，其特征在于 所述的方法包括如下的步骤1、获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种获得高效表达脂肪酶菌株的方法，其特征在于：所述的方法包括如下的步骤：（１）获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒；（２）分别扩增青霉的脂肪酶基因ＰＥＬ、构巢曲霉的强启动子３－磷酸甘油醛脱氢酶启动子ＰｇｐｄＡ和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子ＴｔｒｐＣ，得到有强启动子驱动的ＰＥＬ基因表达盒；（３）将该ＰＥＬ基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得了含潮霉素筛选标记的ＰＥＬ基因超表达载体；（４）将含潮霉素筛选标记的ＰＥＬ基因超表达载体转化工程农杆菌，利用农杆菌介导转化法将ＰＥＬ基因表达盒转化到青霉菌株中，获得高表达脂肪酶的青霉基因工程菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王剑英，唐可轩，张田，林智，王节亮，
申请(专利权)人：深圳市绿微康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：94