The invention belongs to the technical field of biology, in particular to a human molecular chaperone like protein and its expression and purification, crystal structure and application. The human molecular chaperone like protein Archease of the present invention is composed of 179 amino acids, and the molecular weight is 20.7kDa; the soluble protein is expressed in Escherichia coli strain Bl21 (DE3) plus and the expression is high. The dynamic light scattering showed that the particle size of Archease was larger and the function of GTP was closely related to the binding of RNA shear ligase cofactor. The crystal structure of Archease to 1.96 a resolution. The structure consists of 7 beta folds and 4 alpha helices. Archease in the same operon proteins such as RNA ligase, shear methyltransferase play a role play an important regulatory role is essential for catalysis, mature process of endoplasmic reticulum stress protein XBP1 mRNA in. The analysis of the three-dimensional crystal structure of Archease is helpful to clarify the mechanism of action, so as to better play and broaden its scope of action.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
,具体涉及一种人源分子伴侣样蛋白Archease及其表达纯化、晶体结构、动态光散射结果及其在辅助多种蛋白发挥作用方面的重要作用。
技术介绍
Archease从古生物到人都高度保守,具体作用底物仍未被发现,人源Archease能够催化RNA剪切连接酶RTCB发挥作用,在果蝇中缺失Archease会阻碍视神经轴突的再生,嗜热古菌Archease能催化甲基转移酶发挥作用。在Archease存在的情况下可以明显加速RNA剪切连接酶及甲基转移酶发挥作用。根据已有的报道Archease对与其同一操纵子的蛋白起到了催化剂的作用,而与Archease处于同一操纵子的许多蛋白对于生化反应的进行具有重要的调控作用,内质网应激蛋白XBP1mRNA的成熟加工过程中Archease的辅助作用是必需的。Archease辅助蛋白均在免疫过程中发挥了重要作用。因此通过结构生物学方法获得Archease的晶体结构及利用动态光散射结果表明在结合辅因子后粒径的变化对于找到其作用底物,阐明其作用机理从而进一步拓宽其应用具有重要的指导作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出人源分子伴侣样蛋白Archease及其表达纯化、晶体结构、动态光散射结果及其在辅助多种蛋白发挥作用方面的应用。本专利技术涉及对人源Archease进行密码子优化,以获得在大肠杆菌中以可溶性形式表达的重组蛋白;对重组蛋白进行纯化、结晶;获得人源Archease第20位到第179位氨基酸的三维晶体结构,及其应用。本专利技术首先对人源Archease进行了密码子优化,得到密码子优化的人源Archease。 ...
【技术保护点】
一种人源分子伴侣样蛋白Archease,其特征在于,Archease的密码子进行了优化,即将其全长基因克隆在pet28b+表达载体上,选用Nco1及Xho1 酶切位点,在起始密码子ATG后添加以鸟嘌呤开头的丙氨酸,其他氨基酸顺序依次顺延,同时保留载体上C‑端的6XHis;所述人源Archease, 含179个氨基酸,分子量为20.7kDa,其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1 所示。
【技术特征摘要】
1.一种人源分子伴侣样蛋白Archease,其特征在于,Archease的密码子进行了优化,即将其全长基因克隆在pet28b+表达载体上,选用Nco1及Xho1酶切位点,在起始密码子ATG后添加以鸟嘌呤开头的丙氨酸,其他氨基酸顺序依次顺延,同时保留载体上C-端的6XHis;所述人源Archease,含179个氨基酸,分子量为20.7kDa,其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。2.如权利要求1所述的人源分子伴侣样蛋白Archease的表达和纯化方法,其特征在于,包括:构建人源Archease重组载体,用该载体转化大肠杆菌,从而表达带有标签的重组蛋白Archease,将上述获得的蛋白通过特异性的与所述特异标签识别的方法,分离出目的蛋白,经凝胶过滤层析,得到高纯度的重组蛋白Archease;其中,表达质粒为pET28b(+),转化方法为CaCl2转化法,克隆菌株为大肠杆菌Top10,表达菌株为大肠杆菌BL21(DE3)plus。3.如权利要求1所述的人源分子伴侣样蛋白Archease的结晶方法,其特征在于,包括:将人源Archease浓缩至10-30mg/ml,在4-30°C下用气相扩散法筛选晶体生长条件。4.如权利要求1所述的人源分子伴侣样蛋白Archease的晶体三维结构,其特征在于,晶体三维结构中的原子具有表1中所列的至少40%的原子坐标,或者至少40%氨基酸的主链碳骨架的原子...
【专利技术属性】
技术研发人员:李继喜,段树燕,纪锐,陈子珺,
申请(专利权)人:复旦大学,
类型:发明
国别省市:上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。