一种具有抗癌活性的OPB寡肽及其表达载体和应用，它涉及一种具有抗癌活性的寡肽及其表达载体和应用。本发明专利技术的序列为Gly-Asn-Lys-Lys-Trp-Glu-Gln-Lys-Gln-Val-Gln-Ile-Lys-Thr-Leu-Glu-Gly-Glu-Phe-Ser-Val-Thr-Met-Trp-Ser-Ser。它用于制备抗癌药物。本发明专利技术构建了pMBP-2xOPB表达载体。本发明专利技术利用OPB序列合成出的肽段具有抑制肿瘤细胞生长增殖的效果，表明基于OPB的肽段及其衍生物是一种潜在的治疗癌症的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有抗癌活性的寡肽及其表达载体和应用。
技术介绍
YinYang1(YY1)是一个多功能蛋白，具有促进肿瘤细胞生长的活性。YY1带有一个OPB(OncoproteinBinding)区域(如图1所示)，可以结合多个促进癌症产生及发展的蛋白(癌蛋白)，包括AKT,Mdm2,E1A和Ezh2。癌症的发生与发展过程中伴随着遗传和表观遗传的改变。表观遗传是指那些在细胞分裂时不涉及DNA序列变化的可遗传性状。表观遗传可以协调遗传学信息在分化与发育进程中的作用。这些调节的缺陷会导致人类的各种疾病，包括癌症。YY1参与许多肿瘤形成过程中的表观遗传学调控机制。迄今为止，大多数的研究表明，YY1的生物学功能是刺激细胞增殖和癌症的发生和发展。YY1最早是由Shi等人做为一个含有414个氨基酸的DNA结合蛋白而被发现的。做为一个转录因子，YY1具有“阴阳(YinYang)”的特性，即可以抑制或激活靶基因的表达。YY1在DNA上的共有结合元件(consensusbindingelement)存在于脊椎动物的7％基因中，这意味着YY1在调节生物个体基因表达上的重要性。很多研究表明，YY1所调节的基因具有多种生物学功能，包括细胞生长，分化以及胚胎的发育。YY1可以结合多个参与表观遗传学的重要蛋白因子，包括调节组蛋白乙酰化的p300/CBP、PCAF、HDACs，组蛋白甲基化的Ezh2、Ezh1、PRMT4，DNA甲基化的DNMTs。因此，YY1是一个重要的表观遗传学调节因子。在早期的研究中，人们对于YY1在癌症发生中的作用一直不够明确。直到2004年，我们发现了YY1可以负调节抑癌基因p53，其促癌或刺激细胞生长的功能才被意识到。随后的多篇报道都证实了YY1抑制p53的功能，因而，YY1对p53的负调控成为认知YY1做为原癌基因的关键转折。值得注意的是，YY1的这一功能并不依赖于其调节转录的活性，这也就扩展了YY1的功能或调节范围。YY1做为转录因子促进原癌基因c-Myc和ERBB2/HER2的表达，YY1对原癌基因Ezh2功能的促进作用，多种生长因子刺激YY1基因表达的现象，以及YY1的启动子带有原癌基因标志性结构G-quadruplex等，被陆续发现。这些进一步牢固了YY1的原癌基因地位和增强了其做为癌症治疗中靶基因的可能性。现有技术存在的问题：(1)细菌系统表达产物，可能会含有内毒素，但这个缺点可以通过使用针对去除内毒素的方法来解决。(2)基于DNA质粒的表达系统很难合成太小的多肽分子，因为难以进行分离纯化。但合成2×OPB分子也有利于活性多肽的稳定性。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种抗癌(尤其是乳腺癌)的物质，即提供一种具有抗癌活性的OPB寡肽及其表达载体和应用。本专利技术的一种具有抗癌活性的OPB寡肽，其序列为Gly-Asn-Lys-Lys-Trp-Glu-Gln-Lys-Gln-Val-Gln-Ile-Lys-Thr-Leu-Glu-Gly-Glu-Phe-Ser-Val-Thr-Met-Trp-Ser-Ser。本专利技术的一种具有抗癌活性的OPB寡肽，我们以乳腺癌为例，展示了该寡肽或其任意一部分寡肽可以用于制备治疗癌症的药物。本专利技术的一种具有抗癌活性的OPB寡肽的pMBP-2xOPB表达载体的构建，它是按照以下步骤构建的：一、将2xOPBDNA连接到pUC56载体上，构建得到pUC56-2xOPB载体；二、将构建的pUC56-2xOPB用限制性内切酶BglII和XbaI在37℃酶切3小时：三、将步骤二酶切得到的2xOPB片段用1％琼脂糖电泳胶回收；四、将步骤三回收的DNA片段用连接到用限制性内切酶BglII和XbaI酶切后的pMBP载体，得到pMBP-2xOPB表达载体；五、将步骤四构建的pMBP-2xOPB表达载体转入大肠杆菌DH5α中，培养后，采用限制性内切酶BglII和XbaI进行验证，并进行DNA序列分析验证，对验证成功的pMBP-2xOPB表达载体转入到大肠杆菌BL21中，即完成所述的具有抗癌活性的OPB寡肽的pMBP-2xOPB表达载体的构建。本专利技术构建的载体说明如下：包含有以下原件：(1)MBP(Maltosebindingprotein),可以结合淀粉树脂(amyloseresin)以便进行蛋白分离。(2)PCS序列：是PreScission蛋白酶(PSP)的酶切位点,在得到MBP-2xOPB后，可以用PSP将2xOPB从融合蛋白上切下。(3)TAT：可以帮助2xOPB穿过细胞膜进入细胞的信号肽段。(4)HA：用于HA-抗体识别的序列。(5)OPB：OncoproteinBinding,即我们预测的具有抗癌作用的多肽序列。或者，这一段为Cont：OPB的乱序序列，用来做为对照。(6)终止密码子(STOP)。本专利技术的OPB寡肽来源于YY1的氨基酸201-226区域，包括Mdm2,Ezh2,E1A和AKT，本申请将从该区域获得肽段命名为原癌基因蛋白结合(oncogeneproteinbinding；或OPB)区域。本专利技术构建了在原核细胞大肠杆菌中表达的pMBP-2xOPB表达载体(如图2所示)。这一载体可以表达出带有MBP和2个OPB肽段的融合蛋白MBP-2xOPB，然后通过后期纯化和酶切处理，得到纯化的2xOPB肽段。在进行这一研究时，我们也构建了一个用于对照的表达质粒pMBP-2xCont，它可以用来合成设计成一个混乱序列的2xCont多肽。本专利技术包含以下有益效果：本专利技术通过15年有关YY1的研究，第一次报道了YY1促进Mdm2介导的p53泛素化降解；并报道了YY1的SUMO化(Sumoylation)对其转录活性的调节，YY1对雄激素受体(androgenreceptor)功能的促进，尤其是YY1在乳腺癌细胞和组织中的高表达以及对乳腺细胞的增殖作用和其高表达对肿瘤形成的必要性，YY1启动子区域含有癌基因特有的标志性结构G-quadruplex。本专利技术依据前期的研究结果，发现YY1中含有氨基酸201-226的区域可以结合多个原癌基因，包括Mdm2,Ezh2,E1A,AKT，因此，我们命名这一区域为OPB(OncogeneProteinBinding)。例如，YY1通过其OPB区域与促生长蛋白AKT结合，并刺激AKT在S473位点的磷酸化而进行激活。YY1介导的AKT激活不依赖于传统的由PI3K-PIP3介导的AKT激活信号通路。更进一步，利用OPB序列合成出的肽段具有抑制肿瘤细胞生长增殖的效果，表明基于本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗癌活性的OPB寡肽，其序列为Gly‑Asn‑Lys‑Lys‑Trp‑Glu‑Gln‑Lys‑Gln‑Val‑Gln‑Ile‑Lys‑Thr‑Leu‑Glu‑Gly‑Glu‑Phe‑Ser‑Val‑Thr‑Met‑Trp‑Ser‑Ser。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗癌活性的OPB寡肽，其序列为Gly-Asn-Lys-Lys-Trp-Glu-Gln-Lys-Gln-
Val-Gln-Ile-Lys-Thr-Leu-Glu-Gly-Glu-Phe-Ser-Val-Thr-Met-Trp-Ser-Ser。
2.一种具有抗癌活性的OPB寡肽的应用，其特征在于如权利要求1所述的寡肽或一部分
寡肽用于制备治疗癌症的药物。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗癌活性的OPB寡肽的应用，其特征在于所述的寡肽
或一部分寡肽用于制备治疗癌症的药物。
4.一种具有抗癌活性的OPB寡肽的pMBP-2xOPB表达载体的构建，其特征在于它是按照
以下步骤构建的：
一、将2xOPBDNA连接到pUC56载体上，构建得到pUC56-2xOPB载体；
二、将构建的pUC56-2xOPB用限制性内切酶BglII和XbaI在37℃酶切3小时：
三、将步骤二酶切得到的2xOPB片段用1％琼脂糖电泳胶回收；
四、将步骤三回收的DNA片段用连接到用限制性内切酶BglII和XbaI酶切后的pMBP载
体，得到pMBP-2xOPB表达载体；
五、将步骤四构建的pMBP-2xOPB表达载体转入大肠杆菌DH5α中，培养后，采用限制性内
切酶BglII和XbaI进行验证，并进行DNA序列分析验证，对验证成功的pMBP-2xOPB表达载体
转入到大肠...
【专利技术属性】
技术研发人员：隋广超，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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