【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种共表达伴侣蛋白提高β‑甘露聚糖酶基因表达水平的方法,其特征在于,其步骤如下:(1)黑曲霉β‑甘露聚糖酶基因编码区的克隆及其在毕赤酵母中的表达提取黑曲霉总RNA,将其反转录成cDNA;根据已知的丝状真菌β‑甘露聚糖酶基因编码区序列,设计一对简并引物,设计的引物为:上游引物MAN‑F:5’‑ATGAAG(T/C)T(C/T)TCCA(G/A)C(T/G)CCCTC‑3’,下游引物MAN‑R:5’‑TTA(G/A)GC(G/A)CTA(T/C)(G/C)AATA(T/G)CAGCAAG‑3’;PCR反应体系为50μL:ddH2O19μL,10μM上下游引物各1μL,模板cDNA4μL,2×Taq PCR MasterMix25μL;PCR反应条件均为95℃预变性3min,然后进行95℃30s,52℃30s,72℃90s,共35个循环,最后再72℃延伸7min;切胶回收PCR产物并将其克隆至T载体上;对所获得的β‑甘露聚糖酶进行信号肽分析,将β‑甘露聚糖酶成熟肽编码序列克隆至毕赤酵母表达质粒pPIC9K上,构建成pPIC9K‑MAN质粒并实现其在毕赤酵母中的表达,并筛选一株能高表达β‑甘露 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:陈小玲,黄志清,周波,徐孟,
申请(专利权)人:四川农业大学,
类型:发明
国别省市:四川;51
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