本发明专利技术公开了一种分子伴侣TSPcpn47和编码该分子伴侣的多核苷酸，该分子伴侣TSPcpn47来源于高温栖热菌的噬菌体TSP4，能起到稳定蛋白质结构的作用并防止蛋白质凝聚、变性，提高蛋白质的稳定性，其核苷酸序列可用于构建生产此分子伴侣的基因工程菌株。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种分子伴侣TSPcpn47和编码该分子伴侣的多核苷酸，该分子伴侣TSPcpn47来源于高温栖热菌的噬菌体TSP4，能起到稳定蛋白质结构的作用并防止蛋白质凝聚、变性，提高蛋白质的稳定性，其核苷酸序列可用于构建生产此分子伴侣的基因工程菌株。【专利说明】—种分子伴侣TSPcpn47和编码此分子伴侣的多核苷酸
本专利技术涉及一种分子伴侣TSPcpn47和编码此分子伴侣的多核苷酸，分子伴侣在生物体内起着稳定新生蛋白、辅助其他蛋白质正确折叠，提高蛋白质的稳定性，属于生物
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技术介绍
分子伴侣是一类在进化上非常保守的蛋白质家族，它能非特异性结合不同结构、大小和功能的蛋白质并催化介导这些蛋白质形成特定的构象，在生物体内起着稳定新生蛋白、辅助其他蛋白质正确折叠、组装、转运甚至降解的作用，在胁迫条件下，分子伴侣起到稳定蛋白质结构的作用并防止蛋白质凝聚、变性，还具有修复变性蛋白的功能，对蛋白质功能的发挥具有重要意义。第一个分子伴侣----核质蛋白(nucleoplasmin)是Laskey等人于1978年在非洲爪蟾卵的浸出液中发现的，他们通过研究组蛋白与DNA结合形成核小体的过程中，必须依靠一种酸性核蛋白(nucleoplasmin)的参与才能完成它们的装配。体外试验也表明，只有将组蛋白与过量的酸性核蛋白混合，才能令其与后加入的DNA组装最终形成核小体结构，但形成的核小体中并没有酸性核蛋白。当仅有DNA与组蛋白存在时，并不能自我组装成核小体结构，而是形成沉淀。迄今为止发现的大多数的分子伴侣都属于热休克蛋白(heat shock protein, HSP)的范畴,大致可主要分为伴侣素家族(chaperonin, Cpn )、热休克蛋白7 O家族(HSP 70 family)、热休克蛋白9 O家族(HSP 90 family)以及热休克 蛋白100家族等保守的蛋白家族，目前还没有来源于栖热菌噬菌体的分子伴侣的报道，分子伴侣因其可以提高蛋白质(酶)的稳定性而使其在工业上具有应用价值。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种分子伴侣TSPcpn47，该分子伴侣TSPcpn47来源于高温栖热菌的噬菌体TSP4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术的另一个目的是提供一种编码分子伴侣TSPcpn47的多核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本专利技术的有益效果: 本专利技术获得的栖热菌噬菌体TSP4的分子伴侣TSPcpn47，能够单独的行使分子伴侣功能，即帮助变性的蛋白复性，并且防止其它蛋白在高温、酸性等条件下变性，可利用于在高温等环境下协助功能蛋白保持其活性，减少蛋白变性，对保护功能蛋白的生理活性具有重要作用，其核苷酸序列可以用于构建能催化形成以上产物的基因工程菌株。【专利附图】【附图说明】图1是本专利技术分子伴侣TSPcpn47基因的克隆片段电泳示意图； 图2是本专利技术分子伴侣TSPcpn47基因保守结构域分析示意图； 图3是本专利技术分子伴侣TSPcpn47基因、pET_28a(+)的酶切示意图，其中泳道I为分子伴侣TSPcpn47基因的酶切胶回收产物，泳道2为pET_28a(+)，泳道3为Marker ； 图4是本专利技术分子伴侣TSPcpn47基因表达蛋白的SDS-PAGE分析检测电泳图，其大小为为29000道尔顿，其中泳道I为Protein Marker ;泳道2为Ro_pET28a破碎后的上清；泳道3Ro-pET28a-7S/7/7破碎后的上清；泳道4为Ro_pET28a破碎后的沉淀；泳道5为Ro-m2Sa-TSPcpn47破碎后的沉淀。图5是本专利技术分子伴侣TSPcpn47纯化SDS-PAGE分析检测电泳图，其中泳道I 为 Protein Marker ;泳道 2 为 vEYI&ArTSPcpM/ Rosetta 破碎后的上清；泳道 3 为X>E\2Sa-TSPcpn47/ Rosetta破碎后的上清过His_trap柱；泳道4为IOmM咪唑洗脱液；泳道5为150mM咪唑洗脱液；泳道6为500mM咪唑洗脱液；泳道7为500mM咪唑洗脱液； 图6是本专利技术蛋白含量标准曲线示意图； 图7是本专利技术磷酸盐浓度标准曲线示意图； 图8是本专利技术温度对分子伴侣TSPcpn47活性的影响； 图9是本专利技术分子伴侣TSPcpn47对GFP荧光强度恢复的帮组作用； 图10是本专利技术分子伴侣TSPcpn47对GFP热稳定性的影响。【具体实施方式】下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术的内容并不局限于此，本实施例中方法如无特殊说明的均按常规方法操作，所用试剂如无特殊说明的采用常规试剂或按常规方法配置的试剂。实施例1:分子伴侣TSPcpn47基因的扩增(以栖热菌噬菌体TSP4基因组DNA为模 板) (1)TSP4噬菌体分子伴侣TSPcpn47基因扩增所用引物序列如下: 正向引物:5’ - CGGAATTCATGGCACTCTTATCTAAC -3’ 反向引物:5’ - ACATCTCGAGCCATGAGGCCACCTCCT -3’ (2)扩增体系如下: 表1:扩增反应体系组分【权利要求】1.一种分子伴侣TSPcpn47，其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示。2.编码权利要求1所述分子伴侣TSPcpn47的多核苷酸，其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所 示。【文档编号】C07K14/005GK103435689SQ201310364132【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月20日 优先权日:2013年8月20日【专利技术者】林连兵, 巴顿, 薛寒, 魏云林, 季秀玲, 张琦 申请人:昆明理工大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分子伴侣TSPcpn47，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林连兵，巴顿，薛寒，魏云林，季秀玲，张琦，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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