一种α－葡萄糖苷酶基因工程菌及其应用制造技术

技术编号：5351221 阅读：247 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种α－葡萄糖苷酶基因工程菌及其应用，属于酶工程技术领域。该基因工程菌是携带一种重组质粒的毕赤酵母ＰｉｃｈａｐａｓｔｏｒｉｓＧＳ１１５，重组质粒为含有黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒα－葡萄糖苷酶ｃＤＮＡ的质粒ｐＰＩＣ９Ｋ－ａｇｌｕ，利用Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓＧＳ１１５表达Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的α－葡萄糖苷酶。用所构建的重组Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓＧＳ１１５／ｐＰＩＣ９Ｋ－ａｇｌｕ作为生产菌种，溶氧反馈调控补料流加策略高密度培养Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ生产重组α－葡萄糖苷酶，通过在发酵１８～２０ｈ后连续补加甘油实现Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ的高密度培养，发酵２４～２６ｈ后连续补加甲醇控制一定残余甲醇浓度，发酵培养１２０ｈ后，重组α－葡萄糖苷酶的酶活达到３．５Ｕ／ｍＬ以上。本发明专利技术采用价格低廉的无机盐和甘油为原料进行生产，发酵工艺简单易行，适于大规模生产。