本发明专利技术疫苗以Ｈ５Ｎ１、Ｈ１、Ｈ３和流感病毒其它亚型为靶标并设计旨在激发中和抗体及细胞免疫。本发明专利技术ＤＮＡ疫苗表达来自流感病毒的蛋白质－血凝素（ＨＡ）蛋白或核蛋白（ＮＰ），其中所述的蛋白质经过密码子优化和／或含有对ＨＡ的蛋白酶切割位点的修饰，其中所述的修饰影响蛋白质的正常功能。表达相同插入物的腺病毒构建体已经设计用于初次免疫／加强免疫策略。已经开发了以源于昆虫细胞或哺乳动物细胞的蛋白质产生为基础的基于蛋白质的疫苗，使用含有或不含切割位点的折叠子三聚化稳定结构域以辅助此类蛋白质的纯化。本发明专利技术的另一个实施方案是以ＨＡ假型慢病毒载体所做的工作，其中所述的慢病毒载体将用来在患者中筛选中和抗体并用来筛选诊断性和治疗性抗病毒剂如单克隆抗体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及分子生物学领域。本专利技术公开了流感病毒蛋白质、相关核苷酸 序列和用于通过基于基因的疫苗及重组蛋白而免疫的用途。 相关技术的描述曱型流感病毒和乙型流感病毒感染的重要公共健康影响因新出现的病毒 毒斗朱威胁而加重。忧虑在于东南亚家禽中地方 流行性禽流感病毒(H5N1 )可 能引发人类中的大流行， 一旦该病毒进化至人-与-人传播。目前注册的流感病 毒疫苗包括灭活流感病毒疫苗，其中所述的流感病毒在胚化的鸡卵中增殖(即 Fluzone⑧.赛诺菲巴斯德(Sanofi Pasteur, Inc.);弗韦灵(Fluvirin ),奇诺公 司(Chiron Corporation); Flaurix ,葛兰素史克制药公司(GlaxoSmithKIine )， Inc.)， 和鼻内送递的冷适应性减毒活流感病毒疫苗(Flumist ， MedimmuneVaccines， Inc.)。尽管这些疫苗高度有效，然而它们依赖于耗费劳 动的方法和受限的制造能力。Sanofi Pasteur, Inc.和Chiron Corporation均正在 生产H5N1禽流感病毒的灭活疫苗。Sanofi Pasteur, Inc.产品已经在300位志 愿者中证明是良好耐受的(Sanofi—Pasteur , 在互联网上在 anofipasteur.com/sanofi-pasteur/front/templates/vaccinatl'ons-travel-health-vaccine-aventis-pasteur.jsp &lang=￡N&codeRubrique=l3&codePage=CP—1 5—12—2005 ,(2005年12月14日引用))。然而，令人严重忧虑的是当前可利用的生产方 法学不能满足世界范围的公共健康需求。几种新技术已经在临床研究中数百位研究名受试者内接受评估，包括针对 曱型流感病毒和禽流感病毒H5N1抹的蛋白质亚单位疫苗(蛋白科学公司(Protein Sciences Corporation),在互耳关网上的proteinsciences.com/aboutus/pdf/PhaseII-niresults-June2005-2.pdf., 2005年6月14日引用)、病毒颗粒(virosome ) 或脂质抗原呈递系统(苏威制药公司(Solvay Pharmaceuticals )) (deBruijn, LA.等2005疫苗(Vaccine) 23(Suppl l):S39-49 )、腺病毒作载体的疫苗 (Vaxin(VanKampen， K.R.等2005 Vaccine 23:1029-1036))和在金珠上涂布并 由装PowderJect置送递的表皮DNA疫苗(Drape, RJ.等2005 Vaccine 24:4475-4481 2005)。其它技术(包括含有装配成病毒样颗粒的流感病毒蛋白 质的重组颗粒疫苗)处于临床前期评估中(Girard, M.P.等2005 Vaccine 23:5708-5724)。世界卫生组织会议2004年2月的报告强调需要能够诱导长效免疫应答的 新型广谱流感病毒疫苗(Cassetti， M.C.等2005 Vaccine 23:1529-1533 )。与会 者提出应当评估作为传统流感防治策略替代的基于质粒DNA的技术，其中所 述的技术具有已证实的临床前期效力和快速及相对容易的制造工艺(Cassetti, M.C.等2005 Vaccine 23:1529-1533)。目标将是开发会保护对抗多种流感病毒毒^M々适用性更广阔的通用疫苗。 专利技术简述本专利技术描述开发用于预防流感的质粒DNA疫苗和质粒DNA初次免疫 (prime) /蛋白质加强免疫策略。这些疫苗以H5N1、 Hl、 H3和流感病毒其它亚型为靶标并设计旨在激发 中和抗体及细胞免疫。所述DNA疫苗表达来自流感病毒的蛋白质-血凝素 (HA)蛋白或核蛋白(NP),其中所述的蛋白质经过密码子优化和/或含有对 HA的蛋白酶切割位点的修饰，其中所述的修饰影响蛋白质的正常功能。它们 已经在不同的CMV/R或CMV/R 8KB表达主链中构建。表达相同插入物的腺 病毒构建体已经设计用于初次免疫/加强免疫策略。已经开发了以源于昆虫细胞或哺乳动物细胞的蛋白质产生为基础的基于 蛋白质的疫苗，使用含有或不含切割位点的折叠子(foldon)三聚化稳定结构 域(stabilization domain)以辅助此类蛋白质的纯化。本专利技术提供用于控制流感病毒流行的疫苗策略，其中所述的流感病毒包括 禽流感(一旦它跨越传播至人)、流感1918毒抹和季节性流感毒抹。此外，本 专利技术设计旨在产生Jf关合疫苗以提供广泛保护的疫苗。本专利技术的另一个实施方案是以HA假型慢病毒载体(HA pseudotyped lentiviral vector)所估丈的工作，其中所述的慢病毒载体将用来在患者中筛选中 和抗体并用来筛选诊断性和治疗性抗病毒剂如单克隆抗体。 附图说明图1图1. VRC9123的示意图及核St宇列； 图2. VRC7702的示意图及核酸序列； 图3. VRC7703的示意图及核酸序列； 图4. VRC7704的示意图及核酸序列； 图5. VRC7705的示意图及核酸序列； 图6. VRC7706的示意图及核酸序列； 图7. VRC7707的示意图及核酸序列； 图8. VRC7708的示意图及核酸序列； 图9. VRC7712的示意图及核酸序列； 图10. VRC7713的示意图及核酸序列； 图11. VRC7714的示意图及核酸序列； 图12. VRC7715的示意图及核酸序列； 图13. VRC7716的示意图及核酸序列； 图14. VRC7717的示意图及核酸序列； 图15. VRC7718的示意图及核酸序列； 图16. VRC7719的示意图及核酸序列； 图17. 53349的示意图及核酸序列； 图18. 53350的示意图及核酉^f列； 图19. 53352的示意图及核酉拼列； 图20. 53353的示意图及核S齡列； 图21.53355的示意图及核酸序列； 图22. 53356的示意图及核S拼列； 图23. 53358的示意图及核S^列； 图24. 53359的示意图及核S^f列； 图25.53361的示意图及核S吏序列；图26. 53362的示意图及核Slf列 图27. 53364的示意图及核酸字列 图28.53365的示意图及核晚字列 图29. 53367的示意图及核SLf列 图30. 53320的示意图及核酸序列 图31. 53322的示意图及核酸序歹'J 图32. 53325的示意图及核酸序列 图33. 53326的示意图及核酰字列 图34. 53328的示意图及核酉拼列 图35.53331的示意图及核酸序列 图36. 53332的示意图及核S拼列 图37. 53334的示意图及核酸序列 图38. 53335的示意图及核酸序列 图39. 53336的示意图及核酸序列 图40. 53337的示意图及核酸序列 图41.53338的示意图及核酸序列 图42.53340的示意图及核S交序列 图43本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种核酸分子，其包含编码选自由血凝素Ａ（ＨＡ），神经氨酸酶（ＮＡ），Ｍ２蛋白及核蛋白（ＮＰ）所组成的组中的流感病毒蛋白质的多核苷酸，其中，所述的多核苷酸包含 （ａ）取自表１的质粒（或其插入物），或 （ｂ）与其具有至少９５％同一性 的所述质粒或插入物的类似物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：加里J纳贝尔，江永佩，杨志勇，泰伦斯塔姆佩，
申请(专利权)人：美国国有健康与人类服务部马里兰州，美国国有健康与人类服务部佐治亚州，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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