一种寨卡病毒E抗原及其在检测抗寨卡病毒抗体中的应用制造技术

本发明专利技术属于抗寨卡病毒抗体的免疫检测领域，具体涉及一种寨卡病毒E抗原及其在检测抗寨卡病毒抗体中的应用。本发明专利技术对Zika病毒基因组及其表达蛋白进行分析，找到了能够特异性检测抗ZIKV抗体的E抗原，基于所发现的E抗原可以实现特异性检测人血中抗ZIKV抗体，可以制备检测抗ZIKV抗体的试剂盒。本发明专利技术检测抗ZIKV抗体的方法有效地避免了在检测过程中使用具有强传染能力的zika病毒，降低了整个实验的危险性。本发明专利技术的技术方案还具有简单、易操作、重复性好等特点，容易得到推广和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种寨卡病毒E抗原及其在检测抗寨卡病毒抗体中的应用
本专利技术属于抗寨卡病毒抗体的免疫检测领域，具体涉及一种寨卡病毒E抗原及其在检测抗寨卡病毒抗体中的应用。
技术介绍
Zika病毒(Zikavirus，ZIKV)是伊蚊传播的虫媒病毒，于1947年首次分离自乌干达Zika森林中的恒河猴。2005年以前在非洲和东南亚区域有散发的Zika病毒人感染病例。2007年在西太平洋密克罗尼西亚联邦雅浦岛(YapIsland)首次暴发人感染Zika病毒疫情，随着Zika病毒在世界范围内的传播扩散及疫情加重，世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)和各国均发布了Zika病毒病预防控制方案，我国也及时发布了2016年Zika病毒病诊疗方案，指导临床病例的诊断和治疗。Zika病毒感染者中有1/4-1/5的感染者会发病，且患者临床症状轻微，多为流感样表现，持续数天到一周则会痊愈，但是也有部分患者出现格林-巴利综合征(Guillain-Barresyndrome)，孕妇感染Zika病毒与新生儿小头畸形存在关联，并可通过性途径传播。因此，Zika病毒病的防控不容忽视。Zika病毒属于黄病毒科黄病毒属，为单股正链RNA病毒，基因组长度为10794bp，由5’端非编码区(non-codingregion，NCR)、单个开放读码框架(openreadingframe，ORF)和3’端非编码区组成。编译的病毒多肽经蛋白酶水解后形成3个病毒结构蛋白：衣壳(capsid，C)、前膜(pre-membrane，preM)和包膜(envelope，E)和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。E蛋白(约53kDa)是病毒粒子主要的表面蛋白，参与病毒的生活周期，介导病毒的连接和膜融合。对于寨卡病毒感染，现阶段尚缺乏有效的治疗方法和预防性疫苗，这给疫情防控带来了不小的阻碍。同时，寨卡病毒的感染症状轻微，甚至约80％的寨卡病毒感染者不会出现任何症状，也给临床诊断造成很大干扰。Zika病毒感染的实验室诊断方法包括血清或血浆分离病毒、检测病毒核酸或病毒特异性IgM抗体及中和抗体。病毒学检测方法能够检测样本中的寨卡病毒RNA，从而确定患者是否被感染。然而，感染者体内寨卡病毒载量的动态发展情况尚不清楚。目前的研究表明，寨卡病毒的潜伏期可能为3～12d，在感染症状出现前2d和出现后11d内均可在感染者血清中检测出病毒，病毒载量可达每毫升血清中存在8.1×106个病毒核酸拷贝数。然而大多数研究表明，在病毒感染症状出现后1周左右的时间里才能在感染者血清中稳定地检测出较高水平的病毒。一直以来，传统的血清学检测方法都是寨卡病毒检测的主要方法。研究表明，在感染症状出现约3d后的感染者血清中即可检测出寨卡病毒特异性免疫球蛋白M(immunoglobulinM，IgM)以及中和抗体，而恢复期的感染者血清样本中可以检测到特异性IgM、免疫球蛋白G(immunoglobulinG，IgG)以及中和抗体。根据WHO和美国CDC的诊断建议，应选择感染症状出现4d以及2周后的血清样本，应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)检测寨卡病毒特异性IgM抗体和中和抗体。我国疾病控制预防中心以及一些企业已经研制出了寨卡病毒核酸类诊断试剂，尚缺乏免疫检测试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提出一种寨卡病毒E抗原及在检测抗寨卡病毒抗体中的应用，具体技术方案如下：一种寨卡病毒E抗原的氨基酸序列为以下任一种：1)序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列；2)与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列具有80％以上相似性的序列。所述与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列具有80％以上相似性的序列是SEQIDNo.1所示的氨基酸序列通过氨基酸替换、缺失或者增加得到的。所述的寨卡病毒E抗原在检测抗寨卡病毒抗体中的应用。所述应用的方法为利用所述寨卡病毒E抗原通过免疫检测方法检测抗寨卡病毒抗体。所述的应用中的免疫检测方法为酶联免疫法、化学发光法、胶体金法、乳胶法、放射免疫法和荧光免疫法。所述酶联免疫法为酶联免疫吸附测定法；所述荧光免疫法为时间分辨荧光免疫法。一种检测抗寨卡病毒抗体的试剂盒，包括所述的寨卡病毒E抗原。所述的试剂盒，还包括免疫诊断试剂，所述免疫诊断试剂是检测人IgG、IgM或IgA的试剂。所述检测人IgG的试剂包括碳酸盐缓冲液、PBST洗涤缓冲液、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、酶标二抗。所述酶标二抗为羊抗人抗体IgG上标记HPR酶；碳酸盐缓冲液：碳酸氢钠2.93g，碳酸钠1.59g，加水定容至1000ml，pH9.6；PBST洗涤缓冲液：80mmol/L的Na2HPO4、20mmol/L的KH2PO4、100mmol/L的KCl、1400mmol/L的NaCl、体积分数为0.5％的Tween-20，pH7.4；封闭液：1％BSA、0.01MPH7.4的PBS；样品稀释液：1％BSA-PBST缓冲液；终止液：2MH2SO4；显色剂A液：柠檬酸3.2g，醋酸钠27.2g，30％的双氧水0.3ml，加纯化水至1000mL；显色剂B液：柠檬酸1.9g，乙二胺四乙酸二钠0.4g，TMB0.30g，加纯化水至1000mL。本专利技术的有益效果为：本专利技术对Zika病毒基因组及其表达蛋白进行分析，找到了能够特异性检测抗ZIKV抗体的E抗原，基于所发现的E抗原可以实现特异性检测人血中抗ZIKV抗体。本专利技术检测抗ZIKV抗体的方法有效地避免了在检测过程中使用具有强传染能力的zika病毒，降低了整个实验的危险性。本专利技术的技术方案还具有简单、易操作、重复性好等特点，容易得到推广和应用。附图说明图1为zika病毒E序列抗原性分析图。图2为实施例2中zika病毒E抗原纯化后的SDS-PAGE图。具体实施方式首先本专利技术人对E蛋白的抗原表位进行了生物信息学研究，找到了一段可能的高抗原性的抗原片段，即SEQIDNo.1所示的氨基酸序列，对该段E抗原进行了克隆表达，并且基于间接酶联免疫技术使用zika患者血清对纯化后的抗原片段的抗原特异性和灵敏度进行检验，结果发现此抗原能特异性地检测感染zika病毒后人体内的抗ziak抗体。本领域众所周知，与某一个抗原片段具有一定相似性的另一个氨基酸序列片段会具有相同或相似的免疫反应，因此通常认为，通过替换、添加或者缺失某些氨基酸而与本专利技术E抗原片段具有大于80％、大于81％、大于82％、大于83％、大于84％、大于85％、大于86％、大于87％、大于88％、大于89％、大于90％、大于91％、大于92％、大于93％、大于94％、大于95％、大于96％、大于97％、大于98％、大于99％相似性的序列具有与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列相似的免疫反应，因而这些序列片段可以用于实施本专利技术的方案中。本领域亦众所周知，包含SEQIDNo.1所示的氨基酸序列的序列，或者包含与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列具有大于80％、大于81％、大于82％、大于83％、大于84％、大于85％、大于86％、大于87％、大于88％、大于89％、大于90％、大于91％、大于92％、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寨卡病毒E抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列为以下任一种：1)序列表中SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；2)与SEQ ID No.1所示的氨基酸序列具有80％以上相似性的序列。

【技术特征摘要】
1.一种寨卡病毒E抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列为以下任一种：1)序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列；2)与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列具有80％以上相似性的序列。2.根据权利要求1所述的寨卡病毒E抗原，其特征在于，所述与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列具有80％以上相似性的序列是SEQIDNo.1所示的氨基酸序列通过氨基酸替换、缺失或者增加得到的。3.权利要求1或2所述的寨卡病毒E抗原在检测抗寨卡病毒抗体中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为利用所述寨卡病毒E抗原通过免疫检测方法检测抗寨卡病毒抗体。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述免疫检测方法为酶联免疫法、化学发光法、胶体金法、乳胶法、放射免疫法和荧光免疫法。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述酶联免疫法为酶联免疫吸附测定法；所述荧光免疫法为时间分辨荧光免疫法。7.一种检测抗寨卡病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的寨卡病毒E抗原。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨锡琴，冯晓燕，张贺秋，修冰水，刘志强，张旭辉，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11