呋喃西林代谢物ＥＬＩＳＡ检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测动物源性食品中呋喃西林代谢物的ＥＬＩＳＡ检测试剂盒。该试剂盒组成包括：９６孔酶标板、酶标二抗、呋喃西林代谢物抗体工作液、呋喃西林代谢物标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、２－硝基苯甲醛、高浓度标准品、盖板膜、自封袋、说明书和质检报告。采用间接竞争ＥＬＩＳＡ方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的呋喃西林代谢物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物抗体，加入酶标二抗后，用ＴＭＢ底物显色，样本吸光度值与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃西林代谢物的残留量。与仪器分析技术相比，具有操作简便、费用低廉、灵敏度高等特点。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及动物源性食品中药物残留量的检测试剂盒，特别是检测动物源性食品中呋喃西林代谢物残留量的试剂盒。 ( 二 )
技术介绍
硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。 由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃唑酮代谢产物AOZ ;呋喃它酮代谢产物AMOZ ;硝基呋喃托英代谢产物AHD ;硝基糠腙(呋喃西林)代谢产物SEM。 用来检测呋喃西林代谢物的最常用方法是LC-UV， LC-MS和LC_MS/MS，但其检测样本的操作步骤麻烦，检测时间长， 一次性检测样本少。(三)
技术实现思路
本技术所要解决的问题是提供一种小巧轻便的呋喃西林代谢物残留检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中呋喃西林代谢物含量的测定，减少了检验样本所需要的时间。 本技术的技术方案是检测动物源性食品中呋喃西林代谢物残留量的酶联免疫试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、15瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告。采用96孔聚苯乙烯酶标板作为固相载体，酶标板由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，在试剂盒酶标板微孔条上预包被呋喃西林代谢物偶联抗原制成检测板，放入真空铝箔袋中，盒体为硬纸盒，以塑料硬膜为盖板膜，将6瓶lml梯度浓度的标准品溶液、lml高浓度标准品溶液、12ml酶标二抗、7ml呋喃西林代谢物抗体工作液、7ml显色液A液、7ml显色液B液、7ml终止液、40ml浓縮洗涤液、50ml浓縮复溶液及15. lmg 2-硝基苯甲醛，试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在泡沫塑料模具中与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质检报告一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定(包括标准分析孔)，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的残留的呋喃西林代谢物将和酶标板微孔条上预包被的偶联呋喃西林代谢物抗原竞争抗呋喃西林代谢物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中所含有呋喃西林代谢物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃西林代谢物的残留量，其操作简便易行。 经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度肌肉/肝脏样品的最低检测限为0. lii g/kg、虾/鱼等水产组织(因存在一定的干扰)检测下限为O. 3ii g/kg ;水产、肌肉、肝脏组织的回收率为75% ±15%，同其他呋喃西林代谢物类药物的交叉反应率为< 0. 01%。相对于其他呋喃西林代谢物残留检测方法，本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、匀质器、振荡机、微量加样器、涡旋仪等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。 本技术的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于动物源性食品中呋喃西林代谢物残留的检测。(四) 附图说明 图1为本技术酶联板的侧面纵剖面图(长为8. 55cm); 图2为本技术酶联板的侧面横剖面图(长为12. 8cm); 图3为本技术酶联板的俯视图； 图4为本技术盖板膜平面图； 图5为本技术试剂瓶纵剖面平面图； 图6为本技术固定泡沫模具的俯视图； 图7为本技术盒体与固定泡沫模具的侧视图。 参见附图酶标反应微孔条(2)预包被呋喃西林代谢物偶联抗原(3)固定于酶标板的外框支撑架(1)上，酶标反应微孔条(2)可随要求拆卸；盖板膜(4)用于酶标板置恒温箱内反应时封盖酶标反应微孔条(2)，盖板膜的大小与试剂板横切面的大小一致；透明帽的半透明塑料试剂瓶(5)用于封装40ml浓縮洗涤液；蓝色帽的半透明塑料试剂瓶(5)用于封装50ml浓縮复溶液；白色帽(6)的白色塑料试剂瓶(7)用于封装7ml显色液A液，红色帽(6)的黑色塑料试剂瓶(7)用于封装7ml显色液B液，黄色帽(6)的白色塑料试剂瓶(7)用于封装7ml终止液，红色帽的白色塑料试剂瓶(8)用于封装12ml酶标二抗，绿色帽的白色塑料试剂瓶(8)用于封装7ml呋喃西林代谢物抗体工作液，黑色帽的棕色玻璃试剂瓶(9)用于封装15. lmg 2-硝基苯甲醛，白色帽的棕色玻璃试剂瓶(9)用于封装lml/瓶的标准品溶液及lml高浓度标准品溶液；泡沫塑料模具(10)有15个瓶位，放置位置依次为40ml浓縮洗涤液瓶位(18) ， 50ml浓縮复溶液(11) ， 7ml显色液A液瓶位(14) ， 7ml显色液B液瓶位(13) ， 7ml终止液瓶位(12) ， 7ml呋喃西林代谢物抗体工作液瓶位(16) ， 12ml酶标二抗瓶位(15) ，6种lml/瓶各种浓度的标准品溶液及1瓶lml高浓度标准品溶液瓶位(17) ， 15. lmg2-硝基苯甲醛的瓶位(17)，盒体(19)是硬纸盒。具体实施方式 —、样本的前处理 1.配液 配液l:衍生化试剂 向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml (浓度为10mM)。 配液2 :0. 1M磷酸氢二钾溶液 称取22. 8g三水合磷酸氢二钾加去离子水定容至1L。 配液3:1M盐酸溶液 量取8. 3ml浓盐酸加去离子水定容至100ml 。 配液4:1M氢氧化钠 称取4. 0g氢氧化钠加去离子水定容至100ml 。 配液5 :甲醇_水溶液4 量取甲醇90ml加去离子水10ml混匀。 配液6:复溶工作液 用去离子水将2X浓縮复溶液按1 : 1体积比进行稀释(1份2X浓縮复溶液+1份去离子水)用于提取样本的复溶，复溶工作液在4t:环境可保存一个月。 配液7:洗涤工作液 用去离子水将20X浓縮洗涤液按1 : 19体积比进行稀释(1份20X浓縮洗涤液+19份去离子水)用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4t:环境可保存一个月。 2.肌肉、肝脏、水产(鱼虾等)组织前处理方法 用均质器均质样本；取1. 0±0. 05g的均质物，加入5ml甲醇-水溶液，用振荡器振荡5min，3000g以上离心10min，去除全部上清液；加入4ml的去离子水，用涡旋仪涡动溶解，加入0. 5ml 1M盐酸溶液和100 iU衍生化试剂，用振荡器充分振荡；在37t:过夜孵育(大约16h);分别加入5ml 0. 1M磷酸氢二钾溶液、0. 4ml 1M氢氧化钠溶液和10ml的乙酸乙酯，用振荡器剧烈振荡30s ;3000g以上，室温(20-25°C /68_77° F)离心10min ;取5ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃试管中，于50 6(TC氮气流下吹干；用lml的正己烷(或正庚烷)用涡旋仪涡动30s，再加入0. 5ml复溶工作液，用涡旋仪涡动lmin充分混匀(鱼类样本加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测动物源性食品中呋喃西林代谢物的ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块９６孔的酶标板、一张盖板膜、１５瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于：酶标板是采用９６孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被呋喃西林代谢物偶联抗原制成的检测板，１５瓶试剂分别为６瓶标准品溶液、１瓶高浓度标准品溶液、酶标二抗、呋喃西林代谢物抗体工作液、显色液Ａ液、显色液Ｂ液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、２－硝基苯甲醛，下凹瓶位共１５个。

【技术特征摘要】
一种检测动物源性食品中呋喃西林代谢物的ELISA检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、15瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被呋喃西林代谢物偶联抗原制成的检测板，15瓶试剂分别为6瓶标准品溶液、1瓶高浓度标准品溶液、酶标二抗、呋喃西林代谢物抗体工作液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、2-硝基苯甲醛，下凹瓶位共15个。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于盒体是硬纸盒；96孔的聚苯乙烯酶标 板，放于真空铝箔袋内；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液和高浓度标准品溶液均用白色帽 的棕色玻璃瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，呋喃西林代谢物抗体工作液用绿色帽 的白色PE塑料瓶，显色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，显色液B液用红色帽的黑色PE 塑料瓶，终止液用黄色帽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，冯才伟，冯才茂，赵正苗，汪善良，罗晓琴，刘玉梅，李勇，余厚美，蒲晓容，
申请(专利权)人：北京望尔康泰生物技术有限公司，北京望尔生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：11[中国|北京]