高通量检测自身免疫抗体的试剂盒制造技术

一种高通量检测自身免疫抗体的试剂盒，其主要包括一种膜，在此膜上以自行确定的顺序、将多种抗原以直接接触的物理吸附方式进行点印，该膜可以不受限制的吸附所需的多种抗原，配以试剂盒其它组分，可高通量的同时检测多种自身抗体。并且，本发明专利技术的试剂盒生产方法简单、快速、生产成本较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体检测，尤其涉及自身免疫抗体的高通量检测。
技术介绍
自身免疫性疾病临床表现复杂多样，对实验室检查依赖性强。目前国内外临床上 常用的诊断技术包括间接免疫荧光染色、免疫印迹分析、酶联免疫试验、乳胶流动快速检 测，以及Hep2细胞作抗核抗体检测。间接免疫荧光染色检测方法为通过预先固定，并用于 孵化与测试血清，抗体阳性的血清与被预先固定的抗原相结合，结果在核或胞浆染色，由于 不同的抗原或不同的自身免疫疾病可能产生较类似的染色，因而通常需要进一步鉴定，以 便确定自身抗体以及诊断相关的自身免疫疾病。免疫印迹分析检测方法为细胞核或细胞 质的蛋白提取物通过SDS凝胶分离和转移膜用于测试血清，自身抗体在膜上与相应蛋白相 结合产生免疫印迹反应，根据免疫印迹的蛋白质大小确定自身抗原的蛋白质，进而诊断其 自身免疫性疾病。虽然间接免疫荧光染色，免疫印迹分析这两种方法都有助于诊断疾病，但 是程序较为繁琐和费时，它们很难同时分析多个样品。乳胶流动快速检测是一种快速，简便 的检测。自身免疫性疾病往往依赖于测试多种蛋白质，但目前胶乳流量快速检测只能检测 一个蛋白，最多也只能检测四种蛋白质，因而有其局限性。酶联免疫吸附试验是一种高通量 检测，可以分析96个样品，但它只能检测单一蛋白质。现有的自身免疫抗体的高通量检测，通常是采用LIA(线性免疫测定)法。线性免 疫分析是通过一带状膜，上面预先印制多个蛋白质(目前可达到十几种蛋白)，用于监测多 种自身抗体。产品的关键部分是印有多种蛋白质的带状膜，它的制造不是太简单有效，该膜 是将线喷印在膜上，印的蛋白质数量非常有限，印制蛋白多了的话会产生交叉反应从而显 著降低检测的分辨率。因此该方法检测容量较低，其较低的检测容量无法满足检测自身免 疫性疾病更多抗体的需要。并且，用LIA方法一次印一个蛋白质，操作复杂，生产成本高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于克服上述现有技术的不足，而提出一种可高通量的 同时检测多种自身抗体，该试剂盒生产方法简单、快速、生产成本较低。本专利技术解决上述技术问题采用的技术方案是，设计制造一种高通量检测自身免疫 抗体的试剂盒，包括印制有多种抗原的膜、抗人IgG-酶结合物、指示染料以及质控物，该 膜上有多个抗原印迹点，这些印迹点分别以物理接触的方式点印上一种所述的抗原。该每个印迹点上点印一种所述的抗原的溶液，该溶液包括需印制的抗原、缓冲液 和短暂性染料，该溶液是将需印制的抗原用缓冲液稀释到合适浓度后加入该短暂性染料。该抗原的溶液在每个抗原印迹点上的点样量彡lul，形成的斑点直径彡2mm。该膜为0. Imm厚、孔径0.45um的硝酸纤维素膜。该膜可以单独使用，也可以覆在 玻璃上使用。该短暂性染料包括溴酚蓝。该膜上残余未吸附抗原的部位用含有惰性蛋白的缓冲液进行吸附。在该抗人IgG-酶结合物中，抗人IgG抗体是单抗或者多抗，标记的酶为辣根酶或 碱性磷酸酶。该指示染料为持久性染料，用以指示免疫反应的存在，是酶结合物中酶的底物。该指示染料是单组分，或者是双组分。该质控物为正常人血清，HBsAg阴性，抗HCV抗体阴性，抗HIV抗体阴性，或为含有 抗人-IgG抗体的溶液。同现有技术相比，本专利技术的高通量检测自身免疫抗体的试剂盒，通过在膜上以自 行确定的顺序、将多种抗原以直接接触的物理吸附方式进行点印，该膜可以不受限制的吸 附所需的抗原，配以试剂盒其它组分，可高通量的同时检测多种自身抗体，并且，该试剂盒 生产方法简单、快速、生产成本较低。附图说明图1为本专利技术的高通量检测自身免疫抗体的试剂盒中的膜的结构示意图。图2为采用本专利技术的试剂盒中的膜的进行检测后的结果1示意图。图3为采用本专利技术的试剂盒中的膜的进行检测后的结果2示意图。图4为采用本专利技术的试剂盒中的膜的进行检测后的结果3示意图。具体实施例方式以下结合各附图所示之最佳实施例作进一步详述。本专利技术的高通量检测自身免疫抗体的试剂盒实施例，包括1、印制有多种抗原的 膜；2、抗人IgG-酶结合物；3、指示染料，以及4、质控物。其中，1、膜的印制1. 1、膜为0. Imm厚、孔径0.45um的硝酸纤维素膜，该膜可以单独使用，也可以是覆 载在玻璃基体上，还可以是覆载在其它的惰性材质的基体上。1.2、需印制的抗原用缓冲液稀释到合适浓度后加入一种短暂性染料，用于监测印 制过程中有否漏加，该短暂性染料包含溴酚蓝。1.3、制作工具是用毛细管、加样器头、针头等有多孔道的点样装置将1、2、中的自 身抗原以物理接触的方式点印在膜上。1. 4、印制抗原在每个斑点部位的点样量彡Iul，斑点直径彡2mm。1.5、残余未吸附抗原的部位用含有惰性蛋白的缓冲液进行吸附，该惰性蛋白是指 与试剂盒中各组分不发生非特异反应的蛋白。1. 6、膜在室温下干燥后置于4度保存。2、抗人IgG-酶结合物2. 1、抗人IgG抗体可以是单抗或者多抗，标记的酶为辣根酶或碱性磷酸酶。2. 2、将抗人IgG-酶结合物稀释至合适浓度。3、指示染料3. 1、该指示染料为持久性染料，可指示免疫反应的存在，是酶结合物中酶的底物。3. 2、该指示染料可以是单组分，也可以是双组分。4、质控物4. 1、质控物为正常人血清，HBsAg阴性，抗HCV抗体阴性，抗HIV抗体阴性，或为含 有抗人-IgG抗体的溶液。参见图1，膜1上印制有多个抗原的斑点10，并设有阴性质控点11、阳性质控点 12。斑点10处可以不受限制的吸附所需的所有抗原，比如CENP抗原101、PO抗原102以 及SS-B抗原103。参见图2，为CENP抗原101阳性血清分析结果。参见图3，为PO抗原102阳性血清分析结果。参见图4，为SS-B抗原103阳性血清分析结果。采用本专利技术的高通量检测自身免疫抗体的试剂盒实施例进行检测的过程，大致包 括以下步骤1、每份样品取一张印有抗原的膜，每张膜放入比印迹膜四周大2mm的容器内2、加入1 100稀释的待检血清或质控物anl，室温1小时，吸出。3、加入洗液anl，浸泡1分钟，吸出，如此洗5遍。4、加入酶结合物anl，室温1小时，吸出。5、洗涤同上述步骤3。6、加入指示染料anl，室温20分钟，吸出。7、加入终止反应的溶液，观察结果。明显呈色斑点为阳性，未呈色斑点为阴性。综上，采用本专利技术的高通量检测自身免疫抗体的试剂盒，比现有的LIA法有更高 的检测容量，从而完美地满足了诊断自身免疫性疾病中多种检测的现实需要，极大地缩短 了生产流程，提高了生产效率，降低了生产成本。这种高通量的检测方法，可以根据需要对 检测容量加以扩展。以上，仅为本专利技术之较佳实施例，意在进一步说明本专利技术，而非对其进行限定。凡 根据上述之文字和附图所公开的内容进行的简单的替换，都在本专利的权利要求保护范围 之内。权利要求1.一种高通量检测自身免疫抗体的试剂盒，其特征在于，包括印制有多种抗原的膜、 抗人IgG-酶结合物、指示染料以及质控物，该膜上每个抗原印迹点上分别以物理接触的方 式点印上测定自身抗体对应的抗原。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该每个抗原印迹点上点印一种所述的抗 原的溶液，该溶液包括需印制的抗原、缓冲液和短暂性染料，该溶液是将需印制的抗原用 缓冲液稀释到合适浓度后加入该短暂性染料。3.如权利要求2所述的试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高通量检测自身免疫抗体的试剂盒，其特征在于，包括：印制有多种抗原的膜、抗人ＩｇＧ－酶结合物、指示染料以及质控物，该膜上每个抗原印迹点上分别以物理接触的方式点印上测定自身抗体对应的抗原。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李先强，姜昕，
申请(专利权)人：深圳市宏信生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]