用人源化抗CD16A抗体治疗自身免疫疾病的方法技术

本发明专利技术描述了可用于减少有害免疫应答的ＣＤ１６Ａ结合蛋白。在一个方面，用任选缺乏效应子功能的人源化抗ＣＤ１６Ａ抗体治疗免疫疾病如特发性血小板减少性紫癜和自身免疫性溶血性贫血。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明用人源化抗CD16A抗体治疗自身免疫疾病的方法 本申请要求2005年7月11日提交的美国临时申请第60/698,623号的权利，该申请通过引用整体结合到本文中。专利
本专利技术涉及CD16A结合蛋白和治疗免疫疾病的方法。本专利技术适用于生物医学和免疫学领域。
技术介绍
Fcγ受体(FcγR)是结合免疫球蛋白G(IgG)分子的Fc区的细胞表面受体。这些受体的各种功能中有一个是使抗体-抗原复合物的形成与效应细胞反应相偶联。例如，免疫复合物对激活性Fcγ受体的交联可导致对病原体的吞噬、通过直接细胞毒性杀死外来细胞和转化细胞、对毒性物质的清除和对炎性反应的引发。值得注意的是，Fcγ受体在自身免疫性中起到关键的作用。结合激活性Fc受体的自身抗体能引发自身免疫疾病的继发症(pathogenic sequelae)，如特发性血小板减少性紫癜、关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血及其它疾病。 在人类和啮齿动物中有三类Fcγ受体，称为FcγRI、FcγRII和FcγRIII(参见Ravetch和Bolland，2001 Annual Rev.Immunol.19275-90；Ravetch和Kinet，1991，Annual Rev.Immunol.9457-92)。FcγRI位点通常被单体IgG占据，而RII和RIII受体则通常不被占据，可供与免疫复合物发生相互作用。FcγRI也称CD64，能以高亲和力结合单体IgG，存在于单核细胞和巨噬细胞上。FcγRII也称CD32，能以中等亲和力结合多聚IgG(免疫复合物或聚合IgG)，存在于多种细胞类型上，包括B细胞、血小板、嗜中性白细胞、巨噬细胞和单核细胞。FcγRIII也称CD16，能以中等亲和力结合多聚IgG，是髓样细胞上的主要激活性FcγR。FcγRIII以两者形式存在。FcγRIIIA(CD16A)为跨膜信号转导形式(50-65 kDa)，由NK细胞、单核细胞、巨噬细胞和某些T细胞表达。FcγRIIIB(CD16B)为糖基磷脂酰肌醇锚定形式(48kDa)，由人嗜中性白细胞表达。参见例如Scallon等，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.865079-83和Ravetch等，1989，J.Exp.Med.170481-97。CD16A的蛋白质和核酸序列在Genbank中以检索号P08637(蛋白质)和X52645(核酸)记录，在SWISS-PROT中以检索号CAA36870记录。CD16B的蛋白质和核酸序列在Genbank中以检索号075015(蛋白质)和X16863(核酸)记录，在SWISS-PROT中以检索号CAA34753记录。 专利技术概述 在一个方面，本专利技术提供可用于治疗患自身免疫疾病的个体的CD16A结合蛋白。本专利技术的CD16A结合蛋白为非小鼠抗体，包括嵌合、人和人源化的抗CD16A单克隆抗体及其片段、单链抗体和其它包含VH结构域和/或VL结构域的结合蛋白。 在一个方面，CD16A结合蛋白包含源自人IgG重链的Fc区(例如源自人IgG1的Fc区)，其中该Fc区缺乏效应子功能和/或该Fc区被修饰以减少与Fc受体的结合。在一个实施方案中，CD16A结合蛋白例如因为Fc区的残基297处的置换而不被糖基化。 在另一个方面，CD16A结合蛋白包含源自人IgG重链的Fc区(例如源自人IgG1的Fc区)，其中该Fc区其效应子功能减低和/或该Fc区被修饰以减少与Fc受体的结合。 在一个方面，CD16A结合蛋白是这样的人源化3G8抗体，其VH结构域包含三个源自小鼠单克隆抗体(mAb)3G8的VH结构域的互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，该VH结构域具有Hu3G8VH-1的VH结构域的序列。在一个实施方案中，结合蛋白的CDR具有小鼠CDR的序列。在一些型中，该VH结构域CDR与3G8的VH结构域CDR差别在于至少一个或多个以下置换CDR1中位置34处的Val、CDR2中位置50处的Leu、CDR2中位置52处的Phe、CDR2中位置54处的Asn、CDR2中位置60处的Ser、CDR2中位置62处的Ser、CDR3中位置99处的Tyr和CDR3中位置101处的Asp。在一个实施方案中，该VH结构域具有Hu3G8VH-22的VH结构域的序列。在一个实施方案中，该VH结构域包含具有序列SEQ ID NO51的FR3结构域。该VH结构域可连接到抗体重链恒定结构域，例如人Cγ1恒定结构域。 在一些型中，CD16A结合蛋白其VH结构域具有表4所示的序列。在一些型中，CD16A结合蛋白其VH结构域与Hu3G8VH-1的序列差别在于一个或多个表1所示的置换。 在一个方面，CD16A结合蛋白是这样的人源化3G8抗体，其VL结构域包含三个源自小鼠单克隆抗体3G8的VL结构域的互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，结合蛋白的CDR具有小鼠CDR的序列。在一些型中，该VL结构域CDR与3G8的VL结构域CDR差别在于至少一个或多个以下置换CDR1中位置24处的Arg；CDR1中位置25处的Ser；CDR1中位置32处的Tyr；CDR1中位置33处的Leu；CDR1中位置34处的Ala；CDR2中位置50处的Asp、Trp或Ser；CDR2中位置51处的Ala；CDR2中位置53处的Ser；CDR2中位置55处的Ala或Gln；CDR2中位置56处的Thr；CDR3中位置92处的Tyr；CDR3中位置93处的Ser和CDR3中位置94处的Thr。在一个实施方案中，该VL结构域具有Hu3G8VL-1、Hu3G8VL-22或Hu3G8VL-43的VL结构域的序列。该VL结构域可连接到抗体轻链恒定结构域，例如人CK恒定区。 在一些型中，CD16A结合蛋白其VL结构域具有表4所示的序列。在一些型中，CD16A结合蛋白其VL结构域与Hu3G8VL-1的序列差别在于一个或多个表2所示的置换。 在一个方面，CD16A结合蛋白包含如上所述的VH结构域和VL结构域(它可通过编码重链和轻链的多核苷酸的共表达来制备)。任选地，人源化重链可变区包含表4所示的序列和/或人源化轻链可变区包含表4所示的序列。例如，在示例性的实施方案中，结合蛋白其重链可变区具有序列SEQ ID NO113和其轻链可变区具有序列SEQ ID NO96、100或118。在另一个示例性的实施方案中，结合蛋白其重链可变区具有序列SEQ ID NO109和其轻链可变区具有序列SEQ ID NO96。在另一个示例性的实施方案中，结合蛋白其重链可变区具有序列SEQ ID NO104和其轻链可变区具有序列SEQ ID NO96。 在一个实施方案中，CD16A结合蛋白是包含两个轻链和两个重链的四聚抗体，所述轻链包含VL结构域和轻链恒定结构域，所述重链包含VH结构域和重链恒定结构域。在一个实施方案中，轻链恒定结构域是人CK和/或重链恒定区是Cγ1。 在本专利技术的一个实施方案中，CD16A结合蛋白包含能以小于5nM的结合常数结合CD16A或sCD16A的抗原结合位点。 在一个实施方案中，(本专利技术的)CD16A结合蛋白与包含未修饰Fc区的参考CD16A结合蛋白相比，包含对至少一个Fc效应配体的结合降低的无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含这样的ＶＨ结构域和ＶＬ结构域的抗ＣＤ１６Ａ抗体，该ＶＨ结构域包含源自小鼠３Ｇ８抗体重链的互补决定区（ＣＤＲ），该ＶＬ结构域包含源自小鼠３Ｇ８抗体轻链的ＣＤＲ，其中至少一种所述ＣＤＲ与相应的小鼠ＣＤＲ在至少一个选自以下的位置有差别：ＶＨ结构域中，ＣＤＲ１中位置３４处的Ｖａｌ、ＣＤＲ２中位置５０处的Ｌｅｕ、ＣＤＲ２中位置５２处的Ｐｈｅ、ＣＤＲ２中位置５４处的Ａｓｎ、ＣＤＲ２中位置６０处的Ｓｅｒ、ＣＤＲ２中位置６２处的Ｓｅｒ、ＣＤＲ３中位置９９处的Ｔｙｒ和ＣＤＲ３中位置１０１处的Ａｓｐ，ＶＬ结构域中，ＣＤＲ１中位置２４处的Ａｒｇ；ＣＤＲ１中位置２５处的Ｓｅｒ；ＣＤＲ１中位置３２处的Ｔｙｒ；ＣＤＲ１中位置３３处的Ｌｅｕ；ＣＤＲ１中位置３４处的Ａｌａ；ＣＤＲ２中位置５０处的Ａｓｐ、Ｔｒｐ或Ｓｅｒ；ＣＤＲ２中位置５１处的Ａｌａ；ＣＤＲ２中位置５３处的Ｓｅｒ；ＣＤＲ２中位置５５处的Ａｌａ或Ｇｌｎ；ＣＤＲ２中位置５６处的Ｔｈｒ；ＣＤＲ３中位置９２处的Ｔｙｒ；ＣＤＲ３中位置９３处的Ｓｅｒ和ＣＤＲ３中位置９４处的Ｔｈｒ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N图埃伦，LS约翰逊，E邦维尼，KE斯泰因，
申请(专利权)人：马克罗基因公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]