表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法。称取１ｇ茶叶提取物，加入３～４ｍｌ的溶解溶剂，过滤，得红棕色溶液，在４～６℃低温下慢慢加入１８～３２ｍｌ的结晶溶剂，待儿茶素析出完全，搅拌使结块沉淀分散，放置，充氮真空抽滤，取滤渣加入与上述等体积的溶解溶剂溶解，等体积的结晶溶剂沉淀，充氮真空抽滤，取滤渣。如此重复不少于７次，滤渣用蒸馏水溶解制成浓度为１５％的溶液，过葡聚糖凝胶ＬＨ－２０柱，用洗脱溶剂洗脱，收集ＥＧＣＧ馏分，绿色条带出尽后收集，４０℃减压真空回收洗脱溶剂，冰冻干燥，即可。本发明专利技术采用重结晶法，结合柱层析，快速，得率高，成本低，易于工业化控制与大生产，可获纯度大于９８％的产品。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体纯化方法。
技术介绍
茶多酚复合物(Tea polyphenols，简称TP)是从传统饮料绿茶中提取的一种天然的抗氧化剂，是由黄烷醇类(儿茶素类)，花色素类，黄酮和黄酮醇类，酚酸和缩酚酸类等四大类30多种化合物组成的复合体。具有清除自由基，抗氧化，抗突变，延缓衰老，防辐射，防癌抗癌，降血脂和胆固醇，抗动脉粥样硬化以及抗菌等多种保健和药理作用。业已证明茶多酚的生物学活性主要与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的作用有关。因此研究开发表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体纯化的新工艺对茶多酚的深度开发和创制新药具有重要的意义。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体的制备方法主要有柱分离制备法，膜分离制备法，液滴逆流分配法等。这些方法虽然可以获得高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的产品，但由于其投资大，得率很低，吸附剂再生困难及操作复杂等缺点使其仅停留在实验室中而不易于工业化生产。本专利技术采用重结晶法，结合柱分离法，快速，得率高，成本低，易于工业化控制与大生产，且可获得表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)纯度大于98％的产品。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速，得率高，成本低的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体纯化方法。表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化方法，称取1g采用水或乙醇的茶叶提取物，加入3～4ml的溶解溶剂使之溶解，过滤，得红棕色溶液，尔后，在4～6℃低温下慢慢加入18～32ml的结晶溶剂，待儿茶素析出完全，搅拌使结块分散，放置，充氮真空抽滤，得滤渣，弃滤液，取滤渣加与上述等体积的溶解溶剂溶解，等体积的结晶溶剂沉淀，充氮真空抽滤，得滤渣。如此重复不少于7次，滤渣用蒸馏水溶解制成浓度为15％的溶液，过葡聚糖凝胶LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量比为1∶20)，用洗脱溶剂洗脱，收集EGCG馏分(绿色条带出尽后收集)，体积为总洗脱溶剂的十分之一，40℃减压真空回收洗脱溶剂，冰冻干燥，得类白色粉末，即可。本专利技术采用重结晶法，结合柱分离法，快速，得率高，成本低，易于工业化控制与大生产，且可获得表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)纯度大于98％的产品。具体实施例方式上述溶解溶剂为甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇、丙酮，结晶溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、丙酮，洗脱溶剂为80％乙醇或80％甲醇水溶液。实施例1称取茶多酚总量大于95％的茶叶提取物25克，加入75ml甲醇或其它溶解溶剂使之溶解(无不溶物)，低温下在此溶液中加入450ml二氯甲烷或其它结晶溶剂，搅拌使儿茶素析出，静置30min，充氮真空抽滤，得滤饼；用75ml甲醇或其它溶解溶剂使之溶解稍有不溶物过滤去除，加450ml二氯甲烷或其它结晶溶剂使儿茶素析出，充氮真空抽滤，得滤饼，如此反复5～6次，用蒸馏水溶解制成浓度为15％的溶液，过葡聚糖凝胶LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量比为1∶20)，用80％乙醇或其他洗脱溶剂洗脱，收集EGCG馏分(绿色条带出尽后收集)，体积为总洗脱溶剂的十分之一，40℃减压真空回收乙醇，冰冻干燥得EGCG3.2克，为类白色粉末，经HPLC分析纯度为98.2％。实施例2称取茶多酚总量大于90％的茶叶提取物25克，加入100ml丙酮或其它溶解溶剂使之溶解(无不溶物)，低温下在此溶液中加入700ml二氯甲烷或其它结晶溶剂，搅拌使儿茶素析出，静置30min，充氮真空抽滤，得滤饼；用100ml甲醇或其它溶解溶剂使之溶解稍有不溶物过滤去除，加700ml二氯甲烷或其它结晶溶剂使儿茶素析出，充氮真空抽滤，得滤饼，如此反复5～6次，用蒸馏水溶解制成浓度为15％的溶液，过葡聚糖凝胶LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量比为1∶20)，用80％乙醇或其他洗脱溶剂洗脱，收集EGCG馏分(绿色条带出尽后收集)，体积为总洗脱溶剂的十分之一，40℃减压真空回收乙醇，冰冻干燥得EGCG 2.9克，为类白色粉末，经HPLC分析纯度为99.1％。实例3称取茶多酚总量大于80％的茶叶提取物50克，加入200ml乙酸乙酯或其它溶解溶剂使之溶解，去除不溶物，低温下在此溶液中加入1600ml三氯甲烷或其它结晶溶剂，搅拌使儿茶素析出，静置30min，充氮真空抽滤，得滤饼；如此反复8～9次，用蒸馏水溶解制成浓度为15％的溶液，过葡聚糖凝胶LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量比为1∶20)，用80％乙醇或其他洗脱溶剂洗脱，收集EGCG馏分(绿色条带出尽后收集)，体积为总洗脱溶剂的十分之一，40℃减压真空回收乙醇，冰冻干燥得EGCG5.8克，为类白色粉末，经HPLC分析纯度为98.3％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法，其特征在于称取１ｇ采用水或乙醇的茶叶提取物，加入３～４ｍｌ的溶解溶剂使之溶解，过滤，得红棕色溶液，尔后，在４～６℃低温下慢慢加入１８～３２ｍｌ的结晶溶剂，待儿茶素析出完全，搅拌使结块分散，放置，充氮真空抽滤，得滤渣，弃滤液，取滤渣加与上述等体积的溶解溶剂溶解，等体积的结晶溶剂沉淀，充氮真空抽滤，得滤渣。如此重复不少于７次，得滤渣用蒸馏水溶解制成浓度为１５％的溶液，过葡聚糖凝胶ＬＨ－２０柱，样品固体重与吸附剂重量比为１∶２０，用洗脱溶剂洗脱，收集ＥＧＣＧ馏分，绿色条带出尽后收集，体积为总洗脱溶剂的十分之一，４０℃减压真空回收洗脱溶剂，冰冻干燥，得类白色粉末，即可。

【技术特征摘要】
1.一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法，其特征在于称取1g采用水或乙醇的茶叶提取物，加入3～4ml的溶解溶剂使之溶解，过滤，得红棕色溶液，尔后，在4～6℃低温下慢慢加入18～32ml的结晶溶剂，待儿茶素析出完全，搅拌使结块分散，放置，充氮真空抽滤，得滤渣，弃滤液，取滤渣加与上述等体积的溶解溶剂溶解，等体积的结晶溶剂沉淀，充氮真空抽滤，得滤渣。如此重复不少于7次，得滤渣用蒸馏水溶解制成浓度为15％的溶液，过葡聚糖凝胶LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量比为1∶20，用洗脱溶剂洗脱，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈生荣，于海宁，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]