新型免疫疾病预防剂/治疗剂制造技术

一种用于免疫疾病的预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）的修饰物或其衍生物，所述修饰是在天然型ＳＥＢ的氨基酸序列中至少一个氨基酸残基被取代，其中所述ＳＥＢ修饰物或其衍生物对Ｔ细胞的活化具有抑制活性，它们与Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的特异性Ｖβ成分相互作用但它们对ＳＥＢ的免疫反应性降低了，同时没有导致具有特异性Ｖβ成分的Ｔ细胞被消除，这种消除通常由天然型ＳＥＢ或重组野生型ＳＥＢ引起。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新型的免疫疾病预防剂／治疗剂。更具体地说，本专利技术涉及诸如类风湿性关节炎、变应性疾病等免疫疾病的新型预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的天然葡萄球菌肠毒素B(下文中也称之为“SEB”)(被认为是一种超级抗原)的修饰物，或其衍生物。
技术介绍
自身免疫疾病分为两种类型器官非特异型自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎(下文中也称作“RA”)，和器官特异型自身免疫疾病，诸如溃疡性结肠炎。它们是由T细胞对自身抗原的反应引起的，通常在免疫耐受之下的所述T细胞在自身组织中因某些原因而激活，对自身抗原产生反应，导致连续的炎症反应，由此损害了组织。在这类情况下，自身抗原分别是构成自身关节的II型胶原或肠粘膜的主要成分。患有这些疾病的人数每年都有稍许增加，但仍未发现有效的治疗剂或预防剂(“因药物导致的免疫缺陷”，Men-eki Kagaku(免疫科学)，第9卷，285-289页(1984年)，Yuichi Yamamura，Chuzo Kishimoto，RobertA．Good编辑)。目前，为了治疗这些疾病，已采用了药物疗法，包括给药柳氮磺吡啶，5-氨基水杨酸，硫唑嘌呤，6-MP，曲尼司特，甲氨蝶呤，环孢菌素A，或甲硝唑，和给药过量的7S-免疫球蛋白；还采用了手术疗法，诸如胸腺切除术或更换人工关节；或症状疗法，诸如营养疗法〔YoichiIchikawa等，“长期给药甲氨蝶呤和柳氮磺胺吡啶对类风湿性关节炎的功效的研究”，《风湿病》第35卷，663-670页(1995年)；SadaoKashiwazaki，“金诺芬和甲氨蝶呤联合用药对类风湿性关节炎功效的研究”，《风湿病》第36卷，528-544页(1996年)；Takefumi Furutani等，“用低剂量甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎中的有害事件”，《风湿病》第36卷，746-752页(1996年)；Nobuo Watanabe，“对幼年型类风湿性关节炎的药物治疗”，《风湿病》第36卷，670-675页(1996年)；TakayasuYakura，“免疫抑制疗法自身免疫疾病的治疗”，《Sogo Rinsho》第30卷，3358页，(1981年)；Shin Totokawa等，“有关甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎的研究寻找更有效的给药策略”，《风湿病》第37卷，681-687页(1997年)〕。然而，这些疗法都没有根除疾病，并且存在会由于长期服药而引起严重的副作用的缺点。因此，需要开发更有效的预防剂／治疗剂和疗法。众所周知，SEB是一种细菌超级抗原(White J．等，《细胞》第56卷，27-35页，1989年)。与II类主要组织相容性复合体(下文中也称作“MHC”)复合的正常抗原被T细胞抗原受体(下文中也称作“TCR”)识别。这种识别受到II类MHC的单元型的限制，叫做“MHC限制”。相反，超级抗原则不论单元型如何都与II类MHC分子结合，并且进一步与TCR的特异性β链可变区(Vβ链)结合。当这样一种连结形成时，与超级抗原结合的T细胞被瞬间激活，从而促进其分裂和繁殖，并产生炎性细胞因子(Micusan V．V．＆ Thibodean J．，《免疫学研讨》第5卷，3-11页，1993年)。SEB是一种导致食物中毒的毒素。当对动物静脉给药SEB时可以看到食物中毒的症状，这提示毒性通过上面所提到的SEB的生物学活性产生(Micusan V．V．＆ Thibodean J．，《免疫学研讨》第5卷，3-11页，1993年)。但是，当对新出生的小鼠静脉或腹膜内给药超级抗原时，具有对该超级抗原敏感的Vβ链的T细胞亚群被清除，使得所述小鼠变得对所述抗原不敏感，即，免疫耐受(White J．等，《细胞》第56卷，27-35页，1989年)。另一方面，当对成年小鼠给药SEB时，如上所述瞬间激活后，具有反应性Vβ7，Vβ8 TCR的T细胞亚群变得对另一种SEB的刺激不敏感，即，变成无反应性的，由此导致免疫耐受。由于SEB具有这种活性，暗示其可能是顽固性自身免疫疾病诸如类风湿性关节炎或溃疡性结肠炎或免疫疾病的潜在预防剂／治疗剂(日本专利公开第9-110704号)。由于SEB是引起葡萄球菌食物中毒的肠毒素，当其给药到活体中时，其致病性就成为一个问题。按照日本专利公开第9-110704号，通过连续给药高纯度的SEB可避免这种毒性，给药剂量应不会使SEB通过口服途径长时间给药时成为致病的，由此有效地诱导免疫耐受而没有SEB的致病性。另一种避免SEB毒性的方法是Kappler J．和Marrack P．等在日本专利公开第8-500328号中公开的“突变超级抗原的保护作用”。他们的专利技术可概述如下制备SEB突变体并将其纯化，挑选出可与人II类MHC分子和TCR结合的那些SEB突变体。然后，动物在接触SEB之前，将与II类阳性细胞结合到几乎不能与天然型SEB的突变体区别开来但却不会刺激T细胞增殖的SEB突变体注射到动物体内。结果，注射后的动物显示出了对SEB毒性的完全保护。日本专利公开第8-500328号的最重要的教导是有关可以用于消除SEB毒性的SEB结构的研究。Swaminathan S．等报道了SEB的三维结构(《自然》第359卷，801页，1992年)。SEB分子由两个结构域组成，即，由残基1-120组成的第一结构域和由残基127-239组成的第二结构域。在SEB的N末端，已确定了可影响II类MHC细胞结合和／或TCR结合的三个区域，即，区域1(残基9-23)，区域2(残基41-53)和区域3(残基60-61)。本专利技术的公开基于上述发现，本专利技术人完成了本专利技术，本专利技术提供了用于免疫疾病的新型预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的、能有效地用于预防和治疗免疫疾病同时毒性降低的SEB修饰物或其衍生物。也就是，本专利技术提供了用于免疫疾病的预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的葡萄球菌肠毒素B(SEB)的修饰物，所述修饰是在天然型SEB的氨基酸序列中至少一个氨基酸残基被取代，或其衍生物，其中所述SEB修饰物或其衍生物对于T细胞的活化具有抑制活性，它们与T细胞受体(TCR)的特异性Vβ成分相互作用，但它们对SEB的免疫反应性降低了，同时没有导致具有特异性Vβ成分的T细胞被消除，这种消除通常由天然型SEB或重组野生型SEB引起。在本专利技术的第一个方面，SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在9位有氨基酸取代的SEB或其衍生物，所述氨基酸取代是通过位点特异性诱变被除了天冬氨酸以外的蛋白质构成氨基酸取代，优选天冬酰胺。在本专利技术的第二个方面，SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在23位有氨基酸取代的SEB或其衍生物，所述氨基酸取代是通过位点特异性诱变被除了天冬酰胺以外的蛋白质构成氨基酸取代，优选酪氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸或赖氨酸。在本专利技术的第三个方面，SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在41位有氨基酸取代的SEB或其衍生物，所述氨基酸取代是通过位点特异性诱变被除了异亮氨酸以外的蛋白质构成氨基酸取代，优选被精氨酸或苏氨酸取代；外加或者在44位被除了苯丙氨酸以外的蛋白质构成氨基酸取代，优选缬氨酸；或者在45位被除了亮氨酸以外的蛋白质构成氨基酸取代，优选缬氨酸。在本专利技术的第四个方面，SEB修本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫疾病预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）的修饰物，所述修饰是在天然型ＳＥＢ的氨基酸序列中至少一个氨基酸残基被取代，或其衍生物，其中所述ＳＥＢ修饰物或其衍生物对于Ｔ细胞的活化具有抑制活性，它们与Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的特异性Ｖβ成分相互作用，但它们对ＳＥＢ的免疫反应性降低了，同时没有导致具有特异性Ｖβ成分的Ｔ细胞被消除，这种消除通常由天然型ＳＥＢ或重组野生型ＳＥＢ引起。

【技术特征摘要】
JP 1998-2-15 50137/981.一种免疫疾病预防剂／治疗剂，它包含作为活性成分的葡萄球菌肠毒素B(SEB)的修饰物，所述修饰是在天然型SEB的氨基酸序列中至少一个氨基酸残基被取代，或其衍生物，其中所述SEB修饰物或其衍生物对于T细胞的活化具有抑制活性，它们与T细胞受体(TCR)的特异性Vβ成分相互作用，但它们对SEB的免疫反应性降低了，同时没有导致具有特异性Vβ成分的T细胞被消除，这种消除通常由天然型SEB或重组野生型SEB引起。2.如权利要求1所述的免疫疾病预防剂／治疗剂，其中所述SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在9位有氨基酸取代的SEB或其衍生物，所述氨基酸取代是被除了天冬氨酸以外的蛋白质构成氨基酸取代。3.如权利要求2所述的免疫疾病预防剂／治疗剂，其中所述SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在9位有天冬酰胺取代的SEB。4.如权利要求1所述的免疫疾病预防剂／治疗剂，其中所述SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在23位有氨基酸取代的SEB或其衍生物，所述氨基酸取代是被除了天冬酰胺以外的蛋白质构成氨基酸取代。5.如权利要求4所述的免疫疾病预防剂／治疗剂，其中所述SEB修饰物或其衍生物是在天然型SEB的基础上在23位有酪氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸或赖氨酸取代的SEB，或其衍生物。6.如权利要求1所述的免疫疾病预防剂／...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐佐木巧，来海和彦，副岛见事，木村由美，野崎周英，藤山佳秀，
申请(专利权)人：财团法人化学及血清疗法研究所，兴和株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]