一种药物代谢相关位点检测方法技术

本发明专利技术涉及一种药物代谢相关位点检测方法，包括步骤：提取来自人的样本的基因组ＤＮＡ；根据至少２个药物代谢相关基因分别设计一对Ｔａｑｍａｎ探针对和一对引物对，Ｔａｑｍａｎ探针对的５’端和３’端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，对所述基因组ＤＮＡ进行荧光定量ＰＣＲ扩增；根据荧光定量ＰＣＲ扩增结果来判断药物代谢相关基因是否发生突变，较佳地，药物代谢相关基因的数目是４个，Ｔａｑｍａｎ探针对和引物对用于检测ＣＹＰ２Ｃ９基因的ｒｓ１０５７９１０位点，ＣＹＰ２Ｃ１９基因的ｒｓ４２４４２８５位点，ＣＹＰ２Ｃ１９基因的ｒｓ４９８６８９３位点，ＣＹＰ２Ｄ６基因的ｒｓ１０６５８５２位点，ＣＹＰ３Ａ４基因的ｒｓ２８３７１７５９位点，本发明专利技术设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，为服用某些药物时是否需要咨询专业医生以确定是否服用及服用剂量等提供参考依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及功能相关位点检测
，更具体地，涉及药物代谢能力相关位点检测方法
，特别是指。
技术介绍
细胞色素P450酶(cytochrome P450， CYP)，又称混合功能氧化酶(mixed functionoxidase)和单加氧酶(monooxygenase)，主要存在于肝微粒体中，在外源性化合 物(包括药物和毒物)的生物转化中起着十分重要的作用，它的活性决定药物的代谢速率， 与药物的清除率有着直接关系，是药物代谢的第一相酶，因而又称为药物代谢酶。它能代谢 和/或活化许多种药物，以及前致癌物、前毒物和致变剂。P450酶系的基因主要有CYPl， CYP2 ， CYP3三个家族，相关的有以下几种重要的P450酶CYP 1A2 、 CYP2A6 、 CYP2C9 、 CYP2C19 、 CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4。 人类许多药物代谢CYP450酶具有遗传变异，研究表明，CYP450酶的许多亚型如 CYP1A1、 CYP1A2、 CYP2A6、 CYP2C9、 CYP2D6和CYP2E1等酶的活性在人群分布呈遗传多态 性。细胞色素P450酶的多态性是引起个体对药物代谢能力差异的重要因素，根据受检者 的基因型我们将肝脏代谢能力分为不良型代谢者(PM)、中间型代谢者(IM)、广泛型代谢 者(EM)和超级型代谢者(UM)四种类型，肝脏代谢能力越弱，各类药物对肝脏毒性越大，肝 脏药物代谢能力的强弱由细胞色素P450酶各亚型基因型所决定。细胞色素P450酶的不同 位点对应不同的药物，如CYP2C9基因的相关代谢药物包括抗炎镇痛药(双氯芬酸、替罗昔 康、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、甲芬那酸、氟比洛芬、喷哚美辛)、抗癫痫药(苯妥英、卡马西 平)、抗凝血药(华法林、双香豆素)、降血糖药(甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美 脲)、其它(氯沙坦、托拉塞米、他莫昔芬、屈大麻酚、阿米替林)等，而CYP2C9变异的酶清 除率只有野生型的15% 20%，易产生底物药物的副作用，尤其是华法林、苯妥英和一些 降糖药药物(如格列本脲、格列美脲)，如S-华发林引起出血，甲苯磺丁脲引起低血糖性休 克。因此，如遇到不良型代谢者(PM)和中间型代谢者(IM)的情况下，用药请咨询专业医生 建议。 因此，为了更早地了解药物代谢能力，进而在服用某些药物时做到有的放矢，避免 某些药物导致副作用，需要提前通过基因检测准确筛查出上述药物代谢相关位点的情况， 从而了解个人的基因体质与肝脏代谢能力对药物的代谢强度，协助预测可能的药物反应， 经由专业医生的判断，提供最适合您的药物清单，避免可能不适应的药物所导致的不良反 应发生。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种药物代谢相关位点 检测方法，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，为服用某些药物时是否需 要咨询专业医生以确定是否服用及服用剂量等提供参考依据。 为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下 该药物代谢相关位点检测方法，其特点是，包括步骤 a.提取来自人的样本的基因组DNA ; b.根据至少2个药物代谢相关基因分别设计一对T叫man探针对和一对引物对，所述T叫man探针对的5'端和3'端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述基因组DNA进行荧光定量PCR扩增； c.根据荧光定量PCR扩增结果来判断所述药物代谢相关基因是否发生突变。 较佳地，所述药物代谢相关基因的数目是4个。 更佳地，所述药物代谢相关基因是CYP2C9基因、CYP2C19基因、CYP2D6基因和CYP3A4基因。 更进一步地，所述Taqman探针对和所述弓|物对用于检测CYP2C9基因的rs 1057910位点，CYP2C19基因的rs4244285位点，CYP2C19基因的rs4986893位点，CYP2D6基因的rsl065852位点，CYP3A4基因的rs28371759位点。 较佳地，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和HEX标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :3和SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。 较佳地，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :6所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和HEX标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :7和SEQ ID NO :8所示的核苷酸序列。 较佳地，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :9和SEQ ID NO : 10所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和HEX标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :11和SEQ ID NO : 12所示的核苷酸序列。 较佳地，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :13和SEQ ID N0:14所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和HEX标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :15和SEQ ID NO : 16所示的核苷酸序列。 较佳地，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :17和SEQ ID N0:18所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和TET标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :19和SEQ ID NO :20所示的核苷酸序列。 本专利技术的创新点在于几个药物代谢有关的侯检位点的整合，通过选取多个药物代谢的侯检位点，根据CYP2C9基因、CYP2C19基因、CYP2D6基因和CYP3A4基因设计特异性引物和Taqman探针对来自人的样本的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增，根据产生的荧光的量和荧光的种类可以知道侯检位点的基因型，设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，从而尽早了解个人的基因体质与肝脏代谢能力对药物的代谢强度，协助预测可能的药物反应，从而在需要服用某些药物时，在遇到不良型代谢者(PM)和中间型代谢者(IM)的情况下，用药咨询专业医生建议，经由专业医生的判断，提供最适合的药物清单，避免可能不适应的药物所导致的不良反应发生。 一般而言，如果基因检测结果显示受检者是某种药物的中间型或不良型代谢者，该受检者使用这种药物时应减量服用；如果受检者是广泛型代谢者，该受检者使用这种药物时请按医嘱服用；如果受检者是超级型代谢者，该受检者使用这种药物时请加量使用。具体实施例方式为更好的理解本专利技术的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。 1.基因组DNA提取 1. 1试剂和仪器 1. 1. 1试剂和耗材基因组DNA抽提试剂盒(TIANamp BLOOD DNA kit, DP318-03 ;TIANamp Micro微量样品基因组DNA提取试剂盒，DP316 ;TIANamp 口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，DP322-03)含细胞裂解液CL ;缓冲液GA ;缓冲液GS ;缓冲液GB ;缓冲液GD ;漂洗液PW ;洗脱缓冲液TB ;Carrie本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物代谢相关位点检测方法，其特征在于，包括步骤：　　ａ．提取来自人的样本的基因组ＤＮＡ；　　ｂ．根据至少２个药物代谢相关基因分别设计一对Ｔａｑｍａｎ探针对和一对引物对，所述Ｔａｑｍａｎ探针对的５’端和３’端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述基因组ＤＮＡ进行荧光定量ＰＣＲ扩增；　　ｃ．根据荧光定量ＰＣＲ扩增结果来判断所述药物代谢相关基因是否发生突变。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈奕雄，赵翊均，
申请(专利权)人：上海基康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]