一种宫颈癌相关位点检测方法技术

本发明专利技术涉及一种宫颈癌相关位点检测方法，包括步骤：提取来自人的样本的基因组ＤＮＡ；根据至少２个宫颈癌相关基因的每一个分别设计一对Ｔａｑｍａｎ探针对和一对引物对，所述Ｔａｑｍａｎ探针对的５’端和３’端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述基因组ＤＮＡ进行荧光定量ＰＣＲ扩增；根据荧光定量ＰＣＲ扩增结果来判断所述宫颈癌相关基因是否发生突变，较佳的，Ｔａｑｍａｎ探针对和引物对用于检测ＦＡＳ基因的ｒｓ１８００６８２位点，ＭＴＨＦＲ基因的ｒｓ１８０１１３３位点，ＸＲＣＣ１基因的ｒｓ１７４３５３９５位点，ＦＡＳＬ基因的ｒｓ７６３１１０位点，本发明专利技术设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，为是否进一步采取有针对性的健康管理以及后续的检测手段提供参考依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疾病相关位点检测
，更具体地，涉及宫颈癌相关位点检测方法
，特别是指。
技术介绍
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅在乳腺癌之后。据世界范围内统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的5%，其中80%的病例发生在发展中国家。我国地域广阔、人口众多，每年新发病例约13. 15万，占世界宫颈癌新发病例总数的28. 8%。近几年来宫颈癌的年轻患者开始增加，在我国也出现了宫颈癌的年轻病例逐年增加的趋势。 宫颈癌的易患因素很多，主要有病毒感染、多性伴侣、早婚多育、年龄、宫颈病史、肥胖、包皮垢、吸烟、药物史及遗传，其中，据统计，在感染人类乳头瘤病毒者中，有家族史者较其他人患癌几率可以增加10倍。 到目前为止的研究表明，至少有多个基因的变异与宫颈癌的发病风险密切相关。因此，为了更早地预防宫颈癌的发生，需要在宫颈癌发生前就提前通过基因检测准确筛查出高风险人群，并对这一人群进行有针对性的健康管理，才能做到真正的早预防，再结合其它手段定期检测，真正实现宫颈癌的早发现、早治疗，以达到提前进行个性化预防的目的。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种宫颈癌相关位点检测方法，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，为是否进一步采取有针对性的健康管理以及后续的检测手段提供参考依据。 为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下 该宫颈癌相关位点检测方法，其特点是，包括步骤 a.提取来自人的样本的基因组DNA ; b.根据至少2个宫颈癌相关基因的每一个分别设计一对T叫man探针对和一对引物对，所述T叫man探针对的5'端和3'端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述基因组DNA进行荧光定量PCR扩增； c.根据荧光定量PCR扩增结果来判断所述宫颈癌相关基因是否发生突变。 较佳的，所述宫颈癌相关基因的数目是4个。 较佳的，所述宫颈癌相关基因是FAS基因、MTHFR基因、XRCC1基因和FASL基因。 更佳的，所述Taqman探针对和所述引物对用于检测FAS基因的rs 1800682位点，MTHFR基因的rsl801133位点，XRCCl基因的rsl7435395位点，FASL基因的rs763110位点。 较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和TET标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :3和SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。 较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :6所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和HEX标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :7和SEQ ID NO :8所示的核苷酸序列。 较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID N0:9和SEQ ID NO :IO所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和TET标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :11和SEQ ID NO : 12所示的核苷酸序列。 较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO :13和SEQ ID N0:14所示的核苷酸序列，所述Taqman探针对的5'端分别标记FAM标记和TET标记，3'端均标记TAMRA标记，所述引物对是SEQ ID NO :15和SEQ ID NO : 16所示的核苷酸序列。 本专利技术的创新点在于几个宫颈癌有关的侯检位点的整合，通过选取多个宫颈癌的侯检位点，根据FAS基因、MTHFR基因、XRCCl基因和FASL基因设计特异性引物和Taqman探针对来自人的样本的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增，根据产生的荧光的量和荧光的种类可以知道侯检位点的基因型，设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，将基因体检的结果作为宫颈癌健康管理的主线，监控疾病的发生发展。如果是宫颈癌遗传风险度高的人群，建议减少一切宫颈癌的外在致病因素，并每半年进行一次检查，做到早预防，早发现，早治疗，延缓甚至避免疾病的发生。具体实施例方式为更好的理解本专利技术的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。 1.基因组DNA提取 1. l试剂和仪器 1. 1. 1试剂和耗材基因组DNA抽提试剂盒(TIANamp BLOOD DNA kit, DP318-03 ;TIANamp Micro微量样品基因组DNA提取试剂盒，DP316 ;TIANamp 口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，DP322-03)含细胞裂解液CL ;缓冲液GA ;缓冲液GS ;缓冲液GB ;缓冲液GD ;漂洗液PW ;洗脱缓冲液TB ;Carrier RNA ;RNase-free ddH20 ;蛋白酶K(20mg/ml);吸附柱；收集管(2ML) ;1.5ML无菌收集管；无水乙醇。 1. 1. 2仪器DENVILLE260离心机，XW-80A旋涡混合器，H. H. S指针式电热恒温水浴锅。 1. 2提取步骤 从全血中提取基因组DNA 1. 2. 1取200 iil的抗凝全血至1. 5ml的E卯endorf管中，如果样本的量少于200iil，则加入缓冲液GS补充至200ia。如果样本量多于200iil，需要用细胞裂解液CL处理，具体步骤如下在样品中加入1-2. 5倍体积的细胞裂解液CL，颠倒混匀，10， OOOrpm离心1分钟，吸取上清，留下细胞核沉淀(如果裂解不彻底，可重复以上步骤一次)，向离心收集到的细胞核沉淀中加200 iU缓冲液GS，振荡至彻底混匀。 1. 2. 2加入20 iil的蛋白酶K溶液，混匀，再加入200 y 1的缓冲液GB，立刻充分颠倒混匀。56t:水浴样本10分钟，水浴过程中请每隔3分钟上下轻柔颠倒混匀样本，溶液应变清亮。(如溶液未彻底变清亮，可延长裂解时间至溶液变清亮为止)。 1. 2. 3加入200 y 1无水乙醇，充分颠倒混匀，这时可能会出现絮状沉淀。4 1. 2. 4将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管 中)，12， 000rpm( 13， 400 Xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。 1.2.5向吸附柱中加入500 ill缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙 醇)，12， 000rpm( 13， 400 Xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。 1.2.6向吸附柱中加入700 ill漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙 醇)，12， 000rpm( 13， 400 Xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。 1.2.7向吸附柱中加入500iil漂洗液PW，12，000rpm( 13，400Xg)离心30秒， 倒掉收集管中的废液。 1. 2. 8将吸附柱放回收集管中，12， OOOrpm( 13， 400 Xg)离心2分钟，倒掉废液。 吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 1.2.9将吸附柱转入一个干净的离心管中，向本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种宫颈癌相关位点检测方法，其特征在于，包括步骤：　　ａ．提取来自人的样本的基因组ＤＮＡ；　　ｂ．根据至少２个宫颈癌相关基因的每一个分别设计一对Ｔａｑｍａｎ探针对和一对引物对，所述Ｔａｑｍａｎ探针对的５’端和３’端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述基因组ＤＮＡ进行荧光定量ＰＣＲ扩增；　　ｃ．根据荧光定量ＰＣＲ扩增结果来判断所述宫颈癌相关基因是否发生突变。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈奕雄，赵翊均，
申请(专利权)人：上海基康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]