本发明专利技术公开了人USP14基因的用途及其相关药物。本发明专利技术公开了人USP14基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明专利技术还进一步构建了人USP14基因小分子干扰RNA、人USP14基因干扰核酸构建体、人USP14基因干扰慢病毒并公开了他们的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人USP14基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中USP14基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
人USP14基因的用途及其相关药物
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及人USP14基因的用途及其相关药物。
技术介绍
去泛素化酶主要有两大类，包括泛素羧基端水解酶(ubiquitin C-terminalhydrolases, UCH)和泛素特异性加工酶(ubiquitin-specific processing proteases,UBP或USP)。去泛素化调节酶调节细胞内的一系列生化反应，包括细胞的生长分化，肿瘤形成，细胞周期调控,转录激活和信号转导等(Ramakrishna S, Suresh B, Baek KH.Therole of deubiquitinating enzymes in apoptosis.Cell Mol Life Sci 2011;68:15-26.Grillari J，Grillar1-Voglauer R，Jansen-Diirr P.Post-translational modificationof cellular proteins by ubiquitin and ubiquitin—like molecules:role in cellularsenescence and aging.Adv Exp Med Biol 2010;694:172-196.)DUSP14(Ubiquitin-specific protease 14)，也称为 tRNA 鸟 _ 呤糖基转移酶(tRNA-guanine transglycosylase, TGT)的一个 60KD 的亚基(USP14/TGT60kD)，属于泛素特异性加工酶家族，位于人类染色体18pll区域(Deshpande KLj Seubert PHj TillmanDM, Farkas WR and Katze JR:Cloning and characterization of cDNA encoding therabbit tRNA-guanine tranSglycosyIase 60_kilodalton subunit.Arch BiochemBiophys 326:1-7,1996.)。有研究发现，USP14在白血病细胞和大肠癌细胞中都有表达，诱导这些细胞分化后，USP14的表达量会下降。(Ishiwata S，Katayama J，ShindoH,Ozawa Y，Itoh K and Mizugaki M:1ncreased expression of queuosine synthesizingenzyme, tRNA-guanine transglycosylase, and queuosine levels in tRNA of leukemiccells.J Biochem 129:13-17，2001.1shiwata Sj Ozawa Yj Katayama J，et al:Elevatedexpression level of 60-kDa subunit of tRNA-guanine transglycosylase in coloncancer.Cancer Lett 212:113-119，2004.)? Shinhi 等人通过免疫组化的方法发现，在正常的大肠上皮细胞中几乎检测不到USP14的表达，但是，在99例大肠癌病人中，有18例病人的大肠癌组织中能检测到USP14的高表达，而且其表达量随着病理学等级增加而增加(Shenji S，Naito Z，ISHIWATA S，et al.Ubiquitin-specific protease14 expression in colorectal canceris associated with liver and lymph nodemetastases.0ncology Reports.2006; 15:539-543.)。另外还有研究发现，USP14 在肝内胆管癌组织样本中呈现高表达，而在正常的样本中只有很弱的表达(Chuensumran U，SaeleeP,Punyarit P，et al.Ubiquitin-specific Protease 14 Expression Associated withIntrahepaticCholangiocarcinoma Cell Differentiation.Asian Pacific J CancerPrev.2011;11:775-779.)。以上研究提示，USP14可能参与了大肠癌和胆管癌的发生和发展，有望成为大肠癌和胆管癌肿瘤基因治疗的一个新的靶点。RNA干扰(RNA interference，RNAi)即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi (Tuschl T, Zamore PD, Sharp PA, BartelDP.RNA1: double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21to 23nucleotideintervals.Cell 2000;101:25-33.)。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程(Uprichard, Susan L.The therapeutic potential of RNA interference.FEBS Letters2005;579:5996-6007.)。为了深入研究USP14在肿瘤发生中的调节功能，本专利技术选取肺癌和乳腺癌细胞模型，以RNAi为手段研究USP14在肺癌和乳腺癌发生和发展中的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开与人USP14 (Ubiquitin-specific protease 14)基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰(RNAi)为手段研究USP14基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。本专利技术第一方面，以RNA干扰为手段，研究了 USP14基因在肿瘤发生和发展中的作用，公开了一种抑制或降低肿 瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括:向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制USP14基因的转录或翻译，或能够特异性抑制USP14蛋白的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。所述肿瘤细胞选自其生长与USP14蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的，所述肿瘤细胞选自肺癌、乳腺癌之任一。所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量为足够降低USP14基因的转录或翻译，或者足够降低USP14蛋白的表达或活性的剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的人USP14基因在制备或筛选肺癌、乳腺癌之任一肿瘤治疗药物中的用途。
【技术特征摘要】
1.一种分离的人USP14基因在制备或筛选肺癌、乳腺癌之任一肿瘤治疗药物中的用途。2.一种降低肿瘤细胞中USP14基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含: a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与USP14基因杂交的核苷酸序列；或者 b)shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与USP14基因杂交的核苷酸序列。3.如权利要求2所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA 二聚体，并且所述第一链的序列与USP14基因中的靶序列基本相同；所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段的序列与USP14基因中的靶序列基本相同。4.如权利要求2或3所述分离的核酸分子，其特征在于，所述USP14基因的靶序列含有SEQ ID NO: 1-5 中任一序列。5.如权利要求2或3所述分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA为小干扰RNA，该小干扰RNA第一链的序列如SEQ ID NO:17所示。6.如权利要求2或3所述分离的核酸分子，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQIDNO:18所示。7.—种USP14基因干扰核酸构建体,含有编码权利要求2-6任一权利要求所述分离的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA。8.如权利要求7所述USP14基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述USP14基因干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。9.如权利要求8所述USP14基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述干扰慢病毒载体由将编码所述shRNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，所述慢病毒载体选自:pLK0.l-puro、pLK0.1-CMV-tGFP...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱向莹，孙琴，高博，谢胜华，金杨晟，瞿红花，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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