本发明专利技术涉及一种用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ？ＡＮＳＢ０６０ＣＧＭＣＣ？Ｎｏ．３４４０及其培养方法和应用。本发明专利技术还提供了所述菌株的发酵液用于降解黄曲霉毒素Ｂ１、Ｇ１和Ｍ１的方法，通过所述方法，枯草芽孢杆菌与黄曲霉毒素Ｂ１反应２小时，对其的降解率可达到７０％以上，反应１２小时后对Ｂ１的降解率可达到８０％以上；枯草芽孢杆菌对黄曲霉毒素Ｇ１和Ｍ１的降解率可分别达到８０％和６０％以上。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌解毒活性高、特异性强、作用效果温和，不会破坏饲料中的营养成分，适用于去除饲料中的黄曲霉毒素。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及枯草芽孢杆菌，特别是涉及一种用于降解黄曲霉毒素B1、G1和M1的枯 草芽孢杆菌。
技术介绍
自从1960年黄曲霉毒素被发现以来，科学工作者便不断地研究该类毒素的预防 和去毒方法。目前对黄曲霉毒素解毒方法的研究主要有化学处理法和物理脱毒法等。传统 的理化方法去毒都存在一些问题，如导致饲料中的营养损失，影响饲料的感官品质，有些方 法所需要的设备价格昂贵等等，从而限制了实际生产中的应用。 利用微生物脱毒的报道，多集中在近十年。国内研究不多，只有刘大岭等(真菌提 取液对黄曲霉毒素解毒作用的研究[J].广东药学院学报，1995，11(2) :92 94.)发现一 种真菌代谢产物具有降解毒素的作用。国外的研究报道比较多的集中在乳酸菌、双歧杆菌、 酵母菌和白腐真菌等，还有橙色黄杆菌、红球菌、假密环菌、根霉菌等。对于乳酸菌、双歧杆 菌和酵母菌的研究表明，大部分去除毒素的效率在50%以下，而且最关键的是这种去除机 制是可逆的结合，而不是对毒素的降解。其他一些细菌和真菌的解毒研究表明，大部分菌的 降解效率不高，降解效率受作用时间、溶液pH值、菌体数量、毒素浓度、金属离子浓度等影 响，尚未发现一种微生物能完全的不可逆的降解饲料中的黄曲霉毒素。 至今为止，未见关于枯草芽孢杆菌及其代谢产物降解黄曲霉毒素的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 本专利技术的另一 目的是提供上述枯草芽孢杆菌的培养方法及其应用。 所述枯草芽孢杆菌是专利技术人筛选得到的枯草芽孢杆菌BacillussubtilisANSB060，其细胞形态和理化特征见表1 : 表1.细胞形态和理化特征试验项目结果试验项目结果革兰氏染色阳性利用碳水化合物产酸细胞形状杆状葡萄糖+细胞直径> 1 y m木糖+形成芽孢+L-阿拉伯糖+3<table>table see original document page 4</column></row><table>+ 本专利技术还提供所述枯草芽孢杆菌的培养方法，取所述枯草芽孢杆菌种子液l-5ml， 接种到50-100ml培养基中进行摇瓶发酵培养。 其中，所述枯草芽孢杆菌种子液的培养基和培养条件与发酵的培养基和培养条件 相同，种子液的活菌浓度以109CFU/ml计； 所述培养基由如下组分组成蛋白胨5-10g、葡萄糖5-8g、磷酸氢二钾0. 1-0. 2g、 磷酸二氢钾1. 0-2. Og、一水硫酸锰0. 5-2. Og、七水硫酸镁0. 5-2. Og、蒸馏水800-1200mL， pH 值为6. 5-7. 5 ; 优选地，所述培养基由如下组分组成蛋白胨10g、葡萄糖5g、磷酸氢二钾0. 15g、 磷酸二氢钾1. 5g、一水硫酸锰1. Og、七水硫酸镁1. 5g、蒸馏水1000mL， pH值为7. 0 ; 所述摇瓶发酵的条件为发酵温度为25-45t:，发酵时间18-36h，pH值6. 5_7. 5，转 速150-225r/min ; 优选地，所述摇瓶发酵的条件为发酵温度为37t:，发酵时间24h， pH值7. O，转速 200r/min。 本专利技术还提供所述枯草芽孢杆菌CGMCC No. 3440在降解黄曲霉毒素方面的应用。 所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1或黄曲霉毒素M1。 本专利技术还提供利用上述枯草芽孢杆菌CGMCC No. 3440降解黄曲霉毒素B1的方法，取所述枯草芽孢杆菌的发酵液500-900 iU ，加入黄曲霉毒素Bl溶液100-500 iU ，将反应体系的pH值调节为6. 0-8. O，在20-4(TC反应2_72h后即可去除溶液中的黄曲霉毒素Bl ; 其中，所述黄曲霉毒素B1溶液的浓度以500ppb计； 优选地，将反应体系的pH值调节为7. 2，在3(TC反应72h。 本专利技术还提供利用上述枯草芽孢杆菌CGMCC No. 3440降解黄曲霉毒素G1的方法，取所述枯草芽孢杆菌的发酵液500-900 ill ，加入黄曲霉毒素Gl溶液100-500 ill ，将反应体 系的pH值调节为6. 0-8. O，在25-45t:反应2_72h后即可去除溶液中的黄曲霉毒素Gl ; 其中，所述黄曲霉毒素Gl溶液的浓度以500ppb计； 优选地，将反应体系的pH值调节为7. O，在37t:反应64h。 本专利技术还提供利用上述枯草芽孢杆菌CGMCC No. 3440降解黄曲霉毒素M1的方法， 取所述枯草芽孢杆菌的发酵液500-900 ill ，加入黄曲霉毒素Ml溶液100-500 ill ，将反应体 系的pH值调节为6. 5-8. 5，在20-4(TC反应2_72h后即可去除溶液中的黄曲霉毒素Ml ; 其中，所述黄曲霉毒素M1溶液的浓度以500ppb计； 优选地，将反应体系的pH值调节为7. 5，在37C反应48h。 特别的，本专利技术所述的枯草芽孢杆菌CGMCC No. 3440可用于降解饲料中的黄曲霉毒素。 本专利技术的枯草芽孢杆菌及其解毒方法具有以下有益效果 1)本专利技术的枯草芽孢杆菌降解黄曲霉毒素的效率高、特异性强，对黄曲霉毒素B1和G1的降解率可达80X以上，对M1的降解率可达到60%以上，且为不可逆降解。 2)本专利技术降解黄曲霉毒素的方法解毒活性高，作用专一，作用效果温和，不会破坏饲料中的营养成分，对饲料的感官品质没有影响，适用于去除饲料中的黄曲霉毒素。 3)本专利技术降解黄曲霉毒素的方法操作简单，对饲料和环境没有污染，有效地解决了传统去毒方法存在的问题。附图说明 图1为对照组黄曲霉毒素Bl图谱； 图2为枯草芽孢杆菌处理组黄曲霉毒素Bl图谱； 图3为枯草芽孢杆菌降解黄曲霉毒素Bl的时间规律图； 图4为对照组黄曲霉毒素Gl图谱； 图5为枯草芽孢杆菌处理组黄曲霉毒素Gl图谱； 图6为对照组黄曲霉毒素Ml图谱； 图7为枯草芽孢杆菌处理组黄曲霉毒素Ml图谱。 保藏信息说明 本专利技术所述的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ANSB060，已于2009年11月12 日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No. 3440。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。 黄曲霉毒素B1购自Sigma公司(生产批号为LB56678) ， Gl以及Ml购自Supelco 公司(其生产批号分别是LB64302和LB64710);PBS(O. Olmol/L)的制备称取8g NaCl、0. 2g KC1、1. 44g Na2HP0^P0. 24g KH2P04， 溶于800ml蒸馏水中，用Na0H调节溶液的pH值至7. 5，最后加蒸馏水定容至1L。 实施例1本专利技术枯草芽孢杆菌的培养方法取枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ANSB060CGMCC No. 34405ml (活菌浓度为5109CFU/ml)，接种于50ml培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为37°C ， pH值7. 0，转速 200r/min，发酵时间24h。 其中，摇瓶发酵培养基由下述组分组成蛋白胨10g，葡萄糖5g，磷酸氢二钾0. lg， 磷酸二氢钾1. Og， 一水硫酸锰本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＮＳＢ０６０，其保藏编号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．３４４０。
【技术特征摘要】
一种用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisANSB060，其保藏编号为CGMCC No.3440。2. —种权利要求1所述枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，取所述枯草芽孢杆 菌种子液l-5ml，接种到50-100ml培养基中进行摇瓶发酵培养，所述培养基由如下组分组 成蛋白胨5-10g、葡萄糖5-8g、磷酸氢二钾0. 1-0. 2g、磷酸二氢钾1. 0-2. Og、一水硫酸锰 0. 5-2. 0g、七水硫酸镁0. 5-2. Og、蒸馏水800-1200mL， pH值为6. 5-7. 5。3. 根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述摇瓶发酵的条 件为发酵温度为25-45°C ，发酵时间18-36h， pH值6. 5-7. 5，转速150-225r/min。4. 权利要求1所述的枯草芽孢杆菌ANSB060， CGMCC No. 3440在降解黄曲霉毒素方面 的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：计成，马秋刚，高欣，赵丽红，雷元培，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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