用于生产转基因猪的ｐｉｇｇｙＢａｃ转座载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种用于生产转基因猪的ｐｉｇｇｙＢａｃ转座载体的构建方法，包括以下步骤：将加入了ＦＲＴ位点的ＺｓＧＦＰ基因连接到转座子ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ上形成重组载体ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ；再将加入了ＦＲＴ位点的Ｎｅｏｍｙｃｉｎ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ基因连接到ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ，得重组通用载体ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ－Ｎｅｏ。该载体具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１所示的核苷酸序列。本发明专利技术的转座载体能满足细胞筛选、鉴定及高效转基因的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及构建一个用于生产转基因猪的新型piggyBac转座载体及其构建方法。
技术介绍
piggyBac (以前叫作IFP2)转座子，是一个来源于鳞翅目昆虫的DNA型转座子，在结构 上与II型短的插入重复因子相关，在分类上属于第二类型，这一类型的因子包括hobo、 hermers、 mariner、 P、 Tcl禾口AC因子。piggyBac转座子最初是在杆状病毒(Baculovirus)侵 染7Hc/w/ /wwb/昆虫TN-368细胞株系时，从Ga〃en'we〃owe〃a (GmMNPV) ^Uwtograp/^ ca/z/o^Zca (AcMNPV)核多角体病毒内首次分离得到的。piggyBac转座子是一个自主因子，长2476bp，含有一个RNA聚合酶II启动子区和一个聚 腺苷酸信号，该信号的侧面是一个可读编码框(ORF)，编码l个单一的长约2.1kb的转录产 物，B卩l个68kD的转座酶，该转座酶是转座子高频率的切出和转座所需的。piggyBac转座子 的末端是长13bp的反向重复序列(ITR)，其内侧各有一段间隔区(spacer),但并不对称(左 端长3bp，右端本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于生产转基因猪的ｐｉｇｇｙＢａｃ转座载体的构建方法，其特征是包括以下步骤：将加入了ＦＲＴ位点的ＺｓＧＦＰ基因连接到转座子ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ上形成重组载体ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ；再将加入了ＦＲＴ位点的Ｎｅｏｍｙｃｉｎ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ基因连接到ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ，得重组通用载体ＰＸＬ－ＢＡＣ　Ⅱ－ＺｓＧＦＰ－Ｎｅｏ。

【技术特征摘要】
1、一种用于生产转基因猪的piggyBac转座载体的构建方法，其特征是包括以下步骤将加入了FRT位点的ZsGFP基因连接到转座子PXL-BAC II上形成重组载体PXL-BAC II-ZsGFP；再将加入了FRT位点的Neomycin Resista...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪云根，周继勇，杨华军，胡嘉彪，周芳，曹晶晶，颜焰，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]