本发明专利技术公开了一种基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法，利用基因DGAT1在脂肪组织中的表达水平来检测猪肌肉中甘油三酯含量。该法具有快速准确、操作方便且不影响猪正常生长的特点，适用于在猪养殖过程中动态监控猪肌肉中甘油三酯含量情况以便于随时掌握猪生长状况，对猪肌肉中脂肪的含量有一个相对精确的了解，进而对猪的日粮进行调整。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法，利用基因DGAT1在脂肪组织中的表达水平来检测猪肌肉中甘油三酯含量。该法具有快速准确、操作方便且不影响猪正常生长的特点，适用于在猪养殖过程中动态监控猪肌肉中甘油三酯含量情况以便于随时掌握猪生长状况，对猪肌肉中脂肪的含量有一个相对精确的了解，进而对猪的日粮进行调整。【专利说明】基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法
本专利技术属于猪肌肉中甘油三酯含量检测领域，尤其是涉及一种基因DGAT1检测猪 肌肉中甘油三酯含量的方法。
技术介绍
猪是我国主要的肉用动物，猪肉产量已占肉类总产量的60%以上。多年来的育种 工作使猪瘦肉率水平有很大提高、脂肪性状得以显著改良。然而，在瘦肉率上升的同时，猪 肉品质却在急剧下降。 猪肌肉中脂肪通常称为肌内脂肪（DIF)，猪的肌内脂肪含量是其重要经济性状，也 是影响肉质的一个极其重要的指标，对肌肉的风味、嫩度和多汁性等食用品质有重要影响。 脂肪组织能大量储存甘油三酯，猪的肌内脂肪主要成分为甘油三酯，通过对甘油三酯的测 定可以了解猪肌肉中脂肪的积累情况。因此，可以通过肌肉中甘油三酯的含量来动态监控， 从而可以动态调节猪肉品质，进而对日粮进行调整，得到品质更好的猪肉。多年来，国内外 学者对猪肌内脂肪含量做了相当多的研究，其研究结果对猪品种的选育、肉品的加工利用 等均有重要的参考价值。 二酰甘油酰基转移酶(Diacyl gycerol Acyl transferase，DGAT)是脂肪细胞中控 制三酰甘油合成的关键酶，在细胞脂肪代谢中起着重要的作用，其主要催化二酰甘油与脂 肪酸酰基生成三酰甘油。DGAT主要功能是催化DAG与酰基辅酶A结合生成TAG JAG是真核生 物能量贮存的主要形式，对细胞膜形式、脂蛋白运输有重要作用，在营养缺乏和应激时可提 供能量。TAG在体内过剩会导致糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝等疾病。 二酰甘油酰基转移酶是广泛存在于生物体内的一种细胞微粒体酶，它与脂肪代 谢、脂类在脂肪中的沉积、血衆中三酰甘油(Tiacylgycerol，TAG)的调节、肌肉中能量代谢 及畜禽卵母细胞的形成等有很大关系，并影响畜禽的产奶量和产蛋量。DGAT由酰基辅酶A (Acy 1 CoA)和二酰甘油(DAG)以共价键的形式结合，可以被二酰甘油特异激活，酰化作用刺 激蛋白可以增强其活性。编码二酰甘油酰基转移酶的基因分为DGAT1和DGAT2。 二脂酰甘油酰基转移酶l(Acyl CoA:Diacylgycerol Acyltransferase，DGATl)是 哺乳动物体内的一种非常重要的酶，其主要机制是使二酰甘油加上脂肪酸酰基形成三酰甘 油。猪DGAT1基因定位于SSC4pl5,有17个外显子和16个内含子，5'UTR为lgSbpWUTR为 261bp，其cDNA全长为1935bp(Gen Bank收录号为AY093657)。猪DGAT1的cDNA基因序列与小 鼠、人和牛的cDNA具有83 %、88 %和91 %的同源性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种快速准确、操作方便且不影响猪正常生长的 基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法。 为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案:基因 DGAT1检测猪肌肉中甘油三 酯含量的方法，利用基因 DGAT1在脂肪组织中的表达水平来检测猪肌肉中甘油三酯含量。 上述基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法，通过定量PCR来检测基因 DGAT1在脂肪组织里mRNA的表达量，用于定量PCR基因DGAT1特异片段的引物对分别具有以 下碱基序列： Forward primer：TGGAGATGCTGTTCCTCATCCAG, Reverse primer：TGATGCGTGAGTAGTCCATGT〇上述基因 dgati检须赌肌肉中甘油三酯含量的方法，包括以下步骤： ⑴从被检测的猪组织中抽提总RNA，反转录得到相应的cDNA样品； (2)用引物对Forward primer和Reverse primer对步骤（1)中的cDNA样品进行定 量 PCR〇步骤（1)中的反转录反应体系和条件为:在20yl反转录体系中，加入4yl总RNA，2yl 01ig(dT)，4yl DEPC水，先置于70°C温育lOmin，再置于冰上急速冷却2min;然后加入：lyl dNTP Mix，0.5yl M-MLV，4yl Buffer，0.5yl RRI，4yl DEPC水，依次置于42°Clh，9(TC 1〇1^11，2〇1€2111111;最后-20°(：保存。 步骤(2)中定量PCR扩增步骤的反应体系和反应条件为： 反应体系：在20yl定量PCR反应体系中，含有lyl cDNA模板，10yl SYBR Premix Ex Ta定量II 2X，0.4iil R0X Reference Dyell 50X，l]iM的lyl引物Forward primer，liiM的 1 yl引物Reverse primer，6 ? 6yl无菌去离子水； 反应条件：951€308;951€58,601€308,40个循环 ；95°(：158,60°(：1111111，951€308,60 °C15s〇 针对目前猪养殖和生产中缺乏有效监测其肌内脂肪含量状况的措施，专利技术人研究 发现，DGAT1基因的表达量与猪肌肉中甘油三酯含量成正相关，而肌内脂肪含量的高低可由 猪肌肉中甘油三酯含量的情况体现出来，猪肌肉中甘油三酯含量又可以通过DGAT1基因的 表达量确定，因此，DGAT1在脂肪组织中的相对表达量可以用来反应猪肌内脂肪含量状况。 据此，专利技术人建立了一种基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法，利用基因DGAT1在 脂肪组织中的表达水平来检测猪肌肉中甘油三酯含量。该法具有快速准确、操作方便且不 影响猪正常生长的特点，适用于在猪养殖过程中动态监控猪肌肉中甘油三酯含量情况以便 于随时掌握猪生长状况，对猪肌肉中脂肪的含量有一个相对精确的了解，进对猪的日粮进 行调整。【附图说明】 图1是5月龄、8月龄、11月龄猪肌肉甘油三酯的相对含量图。 图2是5月龄、8月龄、11月龄猪脂肪组织中的DGAT1相对表达量及肌肉甘油三酯的 相对含量对照图，图中：左为DGAT1相对表达量图，右为DGAT1相对表达量与肌肉甘油三酯相 对含量的相关性图。图3是5月龄、8月龄、11月龄猪脂肪组织中的IGF2相对表达量及肌肉甘油三酯的相 对含量对照图，图中：左为IGF2相对表达量图，右为IGF2相对表达量与肌肉甘油三酯相对含 量的相关性图。图4是5月龄、8月龄、11月龄猪脂肪组织中的UCP3相对表达量及肌肉甘油三酯的相 对含量对照图，图中：左为UCP3相对表达量图，右为UCP3相对表达量与肌肉甘油三酯相对含 量的相关性图。【具体实施方式】 一、研究设计 以巴马香猪为研究对象，正常喂食处理，在5月龄、8月龄、11月龄检测DGATUIGF2 和UCP3的表达水平，考察相关基因的表达量与猪肌肉甘油三酯含量的关系。 利用NCBI数据库中公开发表的猪（sus scrofa)的DGAT1序列（序列登录号：GI: 92711本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基因DGAT1检测猪肌肉中甘油三酯含量的方法，其特征在于利用基因DGAT1在脂肪组织中的表达水平来检测猪肌肉中甘油三酯含量。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：周磊，杨冉冉，李一星，靳艺，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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