一种含HIPK2基因的重组质粒制造技术

技术编号:6931901 阅读:444 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种含HIPK2基因的重组质粒,该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列。其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列,该载体质粒是可以在宿主中复制和生存的真核表达质粒。该重组质粒的构建包括引物设计、PCR扩增、NheI和KpnI双酶切及纯化、目的片段和载体质粒的连接、连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及重组质粒酶切鉴定阳性克隆并测序等步骤。该重组质粒可用于HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究,以及基于HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产,从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组质粒,具体地,涉及一种含HIH(2 (同源结构域相互作用蛋白激酶2)基因的重组质粒。
技术介绍
11] !^ ; ^^2(homeodomain-interacting protein kinase 2, HIH(2)是定位于细胞核内的丝/苏氨酸蛋白激酶家族成员之一,它能与同源框类蛋白相互作用而广泛参与转录调控。HPK家族蛋白具有一个保守的激酶结构域和一个同源蛋白相互作用结构域,因其能够增强同源蛋白转录活性,故取名为同源结构域相互作用蛋白激酶,目前已知该激酶有3个亚型,分别为HIHQ、HIH(2、HIH(3,其中对HIPK2研究最多。HIPK2存在于不同生物体(如线虫、啮齿类动物和人类),HIPK2在除神经组织外的正常人体组织中表达水平非常低,在脑、白细胞、辜丸、前列腺、卵巢和小肠组织中则几乎测不到,仅在心、 肌肉和肾脏相对较高表达。HIPK2基因定位于人类第7条染色体7q32-q34,小鼠染色体6B,全长15. 2kb,编码区序列长约3595bp。HIPK2从美丽线虫到人类高度保守,小鼠与人类之间氨基酸98%同源,有 L4kb、4· 5kb、7.8kb、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含HIPK2基因的重组质粒,其特征在于,该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列,所述的载体质粒DNA序列中包含与HIPK2基因连接的调节序列;所述的重组质粒通过以下步骤构建:步骤1,以含有人HIPK2基因的真核表达载体pENTR223.1/HIPK2为模板设计引物序列,分别引入Nhe I和Kpn I酶切位点;步骤2,对HIPK2基因进行PCR扩增;步骤3,对所得HIPK2基因序列和载体质粒进行Nhe I和Kpn I双酶切以及纯化;步骤4,将步骤3所得产物进行T4 DNA连接酶酶切,使HIPK2基因目的片段和载体质粒相连接;步骤5,用步骤4所得连接产物转化大肠杆菌感...

【技术特征摘要】
1.一种含HIPK2基因的重组质粒,其特征在于,该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列,所述的载体质粒DNA序列中包含与HIPK2基因连接的调节序列; 所述的重组质粒通过以下步骤构建步骤1,以含有人HIPK2基因的真核表达载体pENTR223. 1/HIPK2为模板设计引物序列, 分别引入Nhe I和Kpn I酶切位点;步骤2,对HIPK2基因进行PCR扩增;步骤3,对所得HIPK2基因序列和载体质粒进行Nhe I和Kpn I双酶切以及纯化;步骤4,将步骤3所...

【专利技术属性】
技术研发人员:周利红李琦范忠泽王炎殷佩浩慈书俊周宁
申请(专利权)人:上海中医药大学附属普陀医院上海市普陀区中心医院
类型:发明
国别省市:31

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1