使用半乳凝集素-2基因内单碱基多态性进行的炎症性疾病的判定方法技术

本发明专利技术的目的在于鉴定与心肌梗塞等炎症性疾病的发病进程相关的新型的单碱基多态性（ＳＮＰ）。本发明专利技术可提供炎症性疾病的判定方法，该方法包含检测存在于半乳凝集素－２中的至少一种基因多态性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及炎症性疾病的诊断方法，该方法包含检测存在于半乳凝集素-2基因中的基因多态性；还涉及该方法中使用的寡核苷酸、含有该寡核苷酸的炎症性疾病诊断用试剂盒、以及它们的应用。
技术介绍
虽然生活方式发生变化以及有了新的药理学方法，但包括心肌梗塞在内的冠状动脉疾病在很多国家都是主要的死亡原因(Breslow，J.L.，Nature Med.3，600-601，1997；Braunwald，E.，N.Engl.J.Med.，337，1360-1369，1997)。因此，人们强烈希望能够鉴定这些发病的遗传和环境因素。已知共通的遗传变异与患糖尿病或高血压病等生活方式病的危险性显著相关(Risch，N.，等人.，Science，273，1516-1517，1996；Collins，F.S.，等人.，Science，278，1580-1581，1997；Lander，E.S.，等人.，Science，274，536-539，1996)。鉴定多基因病的感受性基因的方法有利用“连锁”的方法和利用“相关”的方法。连锁分析是检测疾病感受性基因座与遗传标志(主要是微卫星)的座是否连锁，即研究基因座之间的关系，而相关分析是检测特定的遗传标志(主要是单碱基多态性SNP)的哪个形态(等位基因)与疾病相关，即研究等位基因间的关系。因此可以说使用共通的变异作为标志的相关分析比对疾病相关基因的局部存在进行分析的连锁分析作用更大。单碱基多态性(SNPs)是在探求与疾病的易患性或药物反应性有关的基因时有用的多态性标志。SNPs对基因产物的质或量有直接影响，也可能会增大某种疾病或药物带来严重副作用的危险性。因此，通过探求多种SNPs，有望进行疾病相关基因的鉴定或建立避免药物副作用的诊断方法。关于基因突变与心肌梗塞的关系，目前为止有对人前列环素合成酶基因的多态性进行分析、判定心肌梗塞的遗传因素的方法(日本特开2002-136291号公报)等。但是，对于与心肌梗塞相关的基因突变的了解尚不十分清楚。另一方面，已知目前哺乳类有10种半乳凝集素。其中的半乳凝集素-2与半乳凝集素-1显示43％这样高的同源性。半乳凝集素-2与半乳凝集素-1同样，形成含有两个14kDa亚单元的非共价键二聚体，在还原剂非存在下自凝聚，失去活性。另外，半乳凝集素-2与半乳凝集素-1相比，组织分布狭窄。半乳凝集素-1大量存在于以肌肉等间充组织为首的各种细胞系列中，但半乳凝集素-2在正常人组织中多见于以小肠下部为主的上皮细胞中。半乳凝集素-2的详细功能尚未了解(Trends in Glycoscience and Glycotechnology Vol.9，No.45，(1997)87-93页)。
技术实现思路
本专利技术要解决的课题是鉴定与心肌梗塞等炎症性疾病的发病进程有关的新型单碱基多态性(SNP)。本专利技术另一个要解决的课题是利用鉴定出的SNP，提供心肌梗塞等炎症性疾病的诊断方法或炎症性疾病治疗药物的开发方法。本专利技术人为解决上述课题进行了深入地研究，结果，通过鉴定半乳凝集素-1和半乳凝集素-2基因产物与心肌梗塞感受性基因产物淋巴毒素-α(LTA)的结合、以及鉴定半乳凝集素-2基因内的新型单碱基多态性(SNP)与心肌梗塞的发病进程的相关，完成了本专利技术。即，本专利技术提供炎症性疾病的判定方法，该方法包含检测存在于半乳凝集素-2基因中的至少一种基因多态性。优选提供以下的炎症性疾病的判定方法，该方法包含检测存在于半乳凝集素-2基因中的至少一种单碱基多态性。进一步优选提供以下的炎症性疾病的判定方法，该方法包含检测在SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的C/T多态性。优选炎症性疾病是心肌梗塞。本专利技术的另一方面提供一种寡核苷酸，该寡核苷酸可以与含有SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的、至少连续10个碱基序列、或其互补序列杂交，在权利要求1-4中任一项的方法中作为探针使用。本专利技术的又一方面提供一种寡核苷酸，该寡核苷酸可以扩增含有SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的至少连续10个碱基序列、和/或其互补序列，在权利要求1-4中任一项的方法中作为引物使用。优选引物为正向引物和/或反向引物。本专利技术的另一方面提供炎症性疾病诊断用试剂盒，该试剂盒包含一种或以上上述任一项记载的寡核苷酸。优选炎症性疾病为心肌梗塞。本专利技术的又一方面提供半乳凝集素-2表达状态的分析方法，该方法包含检测在SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的C/T多态性。本专利技术的另一方面提供炎症性疾病治疗药物的筛选方法，该方法包含在候选物质存在下，分析细胞内半乳凝集素-2基因或半乳凝集素-1基因的表达量，选择使该表达量变化的物质的步骤。优选提供以下炎症性疾病治疗药物的筛选方法，该方法包含在候选物质存在下分析细胞内半乳凝集素-2基因或半乳凝集素-1基因的表达量，选择使该表达量增加的物质的步骤。本专利技术的又一方面提供炎症性疾病治疗药物的筛选方法，该方法包含在候选物质存在下测定淋巴毒素-α(LTA)与半乳凝集素-2基因产物或半乳凝集素-1基因产物的结合，选择抑制该结合的物质的步骤。本专利技术的另一方面提供半乳凝集素-2转录活性的测定方法，该方法包含将含有SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的C/T多态性的半乳凝集素-2基因片段导入细胞，培养该细胞，分析该基因的表达。本专利技术的又一方面提供抑制或促进半乳凝集素-2转录活性的物质的筛选方法，该方法包含将含有SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的C/T多态性的半乳凝集素-2基因片段导入细胞，在抑制或促进半乳凝集素-2转录活性的候选物质存在下培养该细胞，分析该基因的表达。本专利技术的又一方面提供由上述筛选方法得到的抑制或促进半乳凝集素-2转录活性的物质。本专利技术的方法中，优选将在上述半乳凝集素-2基因片段的下游结合有报道基因的转录单元导入细胞，培养该细胞，通过测定报道活性来分析该基因的表达。进一步优选上述报道基因是荧光素酶基因。本专利技术的另一方面提供半乳凝集素-2转录控制因子的筛选方法，该方法包含使含有SEQ ID NO.1所示的半乳凝集素-2基因的内含子1的碱基序列中第3279位碱基的C/T多态性的半乳凝集素-2基因片段，与预测存在半乳凝集素-2转录控制因子的试样接触，检测上述片段与转录控制因子的结合。优选检测通过凝胶移位测定进行。附图简述附图说明图1表示确认LTA与半乳凝集素-1和-2体外结合的试验的结果。图2表示研究半乳凝集素-2基因的内含子1的3279C＞T的SNP对转录活性的影响的结果。图3表示研究半乳凝集素-2与微管的相互作用的结果。a表示与TAP标记的半乳凝集素-2相互作用的蛋白质的分离。b表示内源性α-微管蛋白与带有flag标记的半乳凝集素-2或LTA免疫共沉淀的实验结果。c表示U937细胞中的内源性α-微管蛋白与内源性半乳凝集素-2或LTA共存的实验结果。图4表示研究冠状动脉粥瘤切除片中的半乳凝集素-2与LTA的表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
炎症性疾病的判定方法，该方法包含检测存在于半乳凝集素－２中的至少一种基因多态性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：田中敏博，大西洋三，尾崎浩一，饭田有俊，堀正二，中村祐辅，
申请(专利权)人：独立行政法人理化学研究所，田中敏博，大西洋三，尾崎浩一，饭田有俊，堀正二，
类型：发明
国别省市：JP[日本]