通过荧光定量PCR检测转基因小麦生长期内根际土壤中荧光假单胞菌数量的方法技术

转基因作物对土壤根际微生物的影响是环境生物安全研究的重要方面。本文对转基因抗病小麦根际土壤中荧光假单胞菌数量进行绝对定量，建立了实时荧光定量PCR（Real-TimeQPCR）检测体系。应用该反应体系，对转基因小麦各个生长时期根际土壤的荧光假单胞菌拷贝数进行绝对定量。结果表明，该设计引物具有较好特异性；Real-TimeQPCR反应的扩增曲线中各梯度标准质粒的循环阈值（Ct值）间隔均匀，熔解曲线峰值较突出，该标准曲线的相关系数R2=0.99905，斜率为-3.203，计算其扩增效率E=100%。在转基因小麦的播种期、返青期、灌浆期和成熟期，根际土壤荧光假单胞菌数量呈现逐渐上升的趋势。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
建立应用荧光定量PCR方法检测转基因小麦根际土壤中荧光假单胞菌(Psdeuomnoda?fluoerncnet)数量的检测体系,其特征在于：利用荧光假单胞菌gyrB为目的基因设计的特异引物SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2对转基因小麦根际土壤样本的总DNA进行PCR扩增，获得大小在151bp的特异性片段，具体步骤如下：a）在田间播种转基因小麦，设置四个重复；分别在小麦生长发育的播种期、拔节期、灌浆期、成熟期采用对角线5点取样法采集根际土壤样本；b）应用UltraCleanTM?soil?DNA?Isolation?Kit试剂盒（Mo?Bio，USA）分别提取转基因小麦根际土壤样本的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：史建荣，杜鹃，吴季荣，刘馨，徐剑宏，胡晓丹，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：