小蓬竹组织培养的培养基组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种小蓬竹组织培养的培养基组合物及其应用，是由基本培养基ＭＳ、诱导培养基、琼脂和蔗糖配制而成，所指诱导培养基为细胞分裂素６－ＢＡ或６－ＢＡ与激动素ＫＴ的混合物，在每升的ＭＳ基本培养基中含细胞分裂素６－ＢＡ?１－５ｍｇ，或同时含细胞分裂素６－ＢＡ?１－５ｍｇ与激动素ＫＴ０．５ｍｇ，含琼脂７ｇ，含蔗糖３０ｇ；培养基组合物溶液ｐＨ值５．８；用于小蓬竹的组织培养，培养条件：温度２５～２７℃，光照时间１２ｈ／ｄ，光照强度１２００Ｌｘ。本发明专利技术填补了小蓬竹组织培养快速繁殖的空白，为小蓬竹的园林栽种、大面积绿化、喀斯特石漠化的恢复，奠定了迅速且充足供应的基础，为小蓬竹的工厂化大规模生产提供了可行的方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于竹类组织培养技术，具体地说是涉及一种小蓬竹组织培养的培养基组 合物及其应用。
技术介绍
/jN^tt (Drepanostachyum Luodianense (Yi et R. S. Wang) Keng f. )亚科镰序竹属竹种，又名“藤竹”，是中国特有种，在《中国物种红色名录》中被列为极危种。 目前只在贵州的罗甸、平塘及长顺有栽培或有野生分布，常成片生长于海拔600 1000m的 石灰岩裸露石山上。它的竹材柔韧可编凉椅和农具，也可作为造纸原料；形态优美，是良好 的园林绿化竹种，并在环境恶劣的喀斯特地区生长良好，能耐干旱和瘠薄，对增强土壤的固 土、保水、保肥能力效果十分显著，是喀斯特地区的适生性物种，在喀斯特生态系统中对水 源涵养、水土保持、养分平衡等生态功能发挥着重要作用，具有很高的生态效益。竹类的生殖周期长，很少开花结实，难以获得大规模繁殖的种子。而传统的移竹、 埋鞭、竹枝扦插等繁殖方法存在消耗种竹多、种苗运输不便、劳动强度大、繁殖系数低等问 题。采用组织培养的方法效率高，条件可控，生长快，周期短，重复性强，可进行周年试验或 生产等优点，可以快速繁殖苗，适合竹子的工厂化育苗。迄今为止，国内外竹子组织培养工作取得了很大的进展，但还是存在着许多的问 题，培养基类型和植物生长调节物质的组合就是关键问题。培养基是组织培养中最重要的 基质，选择合适的培养基对培养成功与否关系很大。目前适合不同外植体组织培养的基础 培养基多达数十种，人们针对不同外植体材料的生物学特性和培养目的，设计建立了各种 类型的培养基，目前常用的类型有MS、N6、sH、ws等培养基，这些培养基均是在植物组织培 养发展过程中，根据人们的认识和培养的需要，不断改进产生的。大量研究表明，竹子组织 培养较为适用的培养基主要为MS培养基或改良MS培养基。植物生长调节剂对植物组织培 养的诱导与分化过程具有重要作用。用于组织培养诱导阶段诱导与分化的植物生长调节物 质通常为细胞分裂素和生长素，细胞分裂素促进细胞分裂与分化，延迟组织衰老，促进侧芽 生长，常用的有6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)和KT(6-糠氨基嘌呤)；生长素主要诱导愈伤组织 的形成，体细胞胚的发生及试管苗的生根，常用的有2，4-D(2，4-二氯苯基乙酸)、NAA(萘 乙酸)和IBA(吲哚丁酸)等。同一种植物生长调节物质的不同浓度及不同植物生长调节 物质间的配比对植物的诱导与分化会产生重要影响，提高细胞分裂素的浓度有利于芽的诱 导，提高生长素的浓度有利于组织和器官的生长。因此，探索细胞分裂素和生长素的优选组 合，保证试管苗既有较高的增殖率又有较好的长势，对于提高种苗质量和实现工厂化生产 具有很重要的意义。目前国内对小蓬竹研究最多的是小蓬竹的群落结构、多样性、水土保持功能、土壤 种子库、叶面积指数以及其栽培技术研究应用等领域，而在组织培养方面的研究还是空白。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种小蓬竹组织培养的培养基组合物及其应 用，以克服小蓬竹繁殖困难，诱导难的问题。上述目的可通过如下措施实现本专利技术的小蓬竹组织培养的培养基组合物，是由基本培养基MS、诱导培养基、琼脂 和蔗糖配制而成，所指诱导培养基为细胞分裂素6-BA或6-BA与激动素KT的混合物，在每 升的MS基本培养基中含细胞分裂素6-BA l-5mg,或同时含细胞分裂素6_BA l_5mg与激动 素KT 0. 5mg,含琼脂7g，含蔗糖30g ；培养基组合物溶液pH值5. 8。试验证明，当所说培养基组合物在每升MS基本培养基中含细胞分裂素6-BA 3mg, 含琼脂7g和含蔗糖30g ；培养基组合物溶液pH值5. 8时，小蓬竹组织培养的成活率最高。同样试验证明，当所说培养基组合物在每升MS基本培养基中含细胞分裂素6-BA 2mg和激动素KT 0. 5mg,含琼脂7g和含蔗糖30g ；培养基组合物溶液pH值5. 8时，小蓬竹 组织培养的成活率也很好。将所述的培养基组合物用于小蓬竹的组织培养，培养条件温度25 27°C，光照 时间12h/d，光照强度1200Lx。本专利技术的有益效果是解决了小蓬竹繁殖困难，克服了传统的母竹移栽、竹鞭移栽 等繁殖方法耗费资源、对生境破坏大、培植时间长、效率低、运输成本高等缺点，且不受季节 的限制，为小蓬竹大面积的推广与利用，充分发挥其生态效益和经济效益提供了快速且充 足供应的有效途径。本专利技术所述的“MS培养基”是指Murashige和Skoog研制的培养基，其成分配方见表1。本专利技术所述的“1/2MS培养基”和“1/4MS培养基”是指大量元素用量分别为MS培 养基中大量元素用量的1/2量和1/4量，其他成分用量与MS培养基相同。表IMS培养基成分 以下通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的有益效果。具体实施例方式以下结合较佳实施例，对依据本专利技术提出的一种小蓬竹组织培养的培养基组合物 的具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。一、试验材料供试的材料采自从罗甸移栽于贵州大学苗圃、成活了的且生长健壮 的小蓬竹植株，外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条。二、试验方法小蓬竹组织培养过程按以下步骤进行培养基的配制和灭菌，本专利技术试验所用的 培养基为培养基组合物，是由基本培养基MS、诱导培养基、琼脂和蔗糖配制而成，所指诱导 培养基为细胞分裂素6-BA或6-BA与激动素KT的混合物，在每升的MS基本培养基中含细 胞分裂素6-BA l_5mg，或同时含细胞分裂素6-BA l_5mg与激动素KT 0. 5mg，含琼脂7g，含 蔗糖30g ；培养基组合物溶液pH值5. 8。本专利技术试验所用的培养基以基础培养基MS或1/2MS和1/4MS为参照对比试验效 果，所述1/2MS和1/4MS是指MS中大量元素用量分别为MS基本培养基中大量元素的1/2量或1/4量，其他成分用量与MS相同。 本专利技术试验所用的细胞分裂素6-BA，化学名称6_苄氨基嘌呤，分子式为C12H11N5, 本专利技术试验所用的激动素KT，化学名称N6-呋喃甲氨基嘌呤，分子式=CltlH9ON5结构式 培养基组合物试验共做10个，试验序号分别为1-10，每个培养基组合物是在1升 的MS基本培养基溶液中加入不同量的6-BA，或不同量的6-BA和KT，在相同试验条件下测 定外植体成活率，如表3，与相同条件试验的基本培养基MS或1/2MS或1/4MS成活率结果如 表2比较。1、培养基配制后在24h内必须进行灭菌，通常采用的灭菌方法为高压灭菌法，其 原理是通过加热，在密闭的高压锅内随着水蒸气压力的不断上升，使水的沸点不断提高，从 而锅内温度也随之升高。2、外植体的处理和消毒小蓬竹外植体采用生长健壮的半木质化枝条，用洗洁精溶液浸泡30min，然后 用自来水浸泡30min，流水冲洗至无泡沫产生，用滤纸吸干表面水分。在超净工作台上把已 冲洗干净的外植体浸入75%酒精中消毒lmin，用无菌水冲洗3 4(期间不断摇动)次后， 采用0. 升汞溶液处理外植体10分钟，无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干表面水分，剪取 长约1. 5cm带芽的节枝，将外植体接种到上述MS、1/2MS、1/4MS和试验序号1_10培养基上。3、外植体接种无菌操作实验室中使用的无菌操作设备是超净工作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小蓬竹组织培养的培养基组合物，其特征是：是由基本培养基ＭＳ、诱导培养基、琼脂和蔗糖配制而成，所指诱导培养基为细胞分裂素６－ＢＡ或６－ＢＡ与激动素ＫＴ的混合物，在每升的ＭＳ基本培养基中含细胞分裂素６－ＢＡ１－５ｍｇ，或同时含细胞分裂素６－ＢＡ　１－５ｍｇ与激动素ＫＴ　０．５ｍｇ，含琼脂７ｇ，含蔗糖３０ｇ；培养基组合物溶液ｐＨ值５．８。

【技术特征摘要】
一种小蓬竹组织培养的培养基组合物，其特征是是由基本培养基MS、诱导培养基、琼脂和蔗糖配制而成，所指诱导培养基为细胞分裂素6 BA或6 BA与激动素KT的混合物，在每升的MS基本培养基中含细胞分裂素6 BA1 5mg，或同时含细胞分裂素6 BA 1 5mg与激动素KT 0.5mg，含琼脂7g，含蔗糖30g；培养基组合物溶液pH值5.8。2.如权利要求1所述的培养基组合物，其特征是所说培养基组合物在每升MS基本培 养基中含细胞分裂素6-B...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘济明，李敏进，何绪，孙运刚，徐国瑞，徐雪娇，廖小锋，张东凯，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：52[中国|贵州]