通常以位点特异性或选择性方式通过四组分的缩合反应来制备聚合物－生物分子共轭物。将该方法用于制备具有在生物分子上的单个位点连接的两个聚合物分子的共轭物。共轭物通常是水溶性的并具有有益的药理学特征，如降低的免疫原性和提高的循环时间。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物分子和水溶性聚合物的共轭物的制备方法，且特别涉及通过四组分的缩合反应来制备这样的共轭物。参考文献de Nouy，A.E.J.等，Biomacromolecules 1259-267(2000).Dixon，H.B.，J.Protein Chem.399-108(1984).Domling，A.和Ugi，I.，Angew.Chem.Int.Ed.393168-3210(2000).Gaertner，H.F.等，Bioconjugate Chem.3262-6(1992)Geoghegan，K.F.等，Bioconjugate Chem.3138-46(1992)Goldstein，L.等，Appl.Biochem.& Biotech.4219-35(1993).King，T.P.等，Biochemistry 255774(1986).Marcaurelle，L.A.等，Org.Lett.33691-94(2001)Morehead，H.W.和Talmadge，K.W.，J.Chromat.587171-176(1991)Monfardini，C.等，Bioconjugate Chem.662-9(1995)O′Shannessy，D.J.和Quarles，R.H.，J.Immunol.Methods99(2)153-61(1987).Page，P.，PCT Pubn.No.WO 01/37983(2001).Park，W.K.C.等，J.Am.Chem.Soc.11810150-10155(1996).Rodriguez，E.C.等，J.Org.Chem.639614(1998).Ugi，I.等，Angew.Chemie 71386(1959).Vretblad，P.等，Acta Chemica Scandinavica 272769-2780(1973).Wilchek，M.和Bayer，E.A.，Methods of Enzymol.138429-42(1987)Wachter，E.和Werhahn，R.in SOLID PHASE METHODS INPROTEIN SEQUENCE ANALYSIS(蛋白质序列分析的固相方法)，Previero，A.& Coletti-Previero，M.-A.，编辑，Elsevier(1977)，pp.185-192.Yarema，K.J.等，J.Biol.Chem.27331168-79(1998).Zalipsky，S.，Adv.Drug Del.Rev.16157-182(1995a).Zalipsky，S.，Bioconj.Chem.6150-165(1995b).Zalipsky，S.等，Bioconjugate Chem.6705-8(1995c)Zalipsky，S.和Harris，J.M.，POLY(ETHYLENEGLYCOL)CHEMISTRY AND BIOLOGICAL APPLICATIONS(聚乙二醇化学和生物应用)，ACS Symp.Ser.680，Washington，D.C.(1997)Zalipsky，S.和Menon-Rudolph，S.，in POLY(ETHYLENEGLYCOL)CHEMISTRY AND BIOLOGICAL APPLICATIONS(聚乙二醇化学和生物应用)，Zalipsky，S.& Harris，J.M.，编辑，ACS Symp.Ser.680，Washington，D.C.(1997)，21章，pp.328-341.
技术介绍
亲水性聚合物，如聚乙二醇(PEG)，已经用于修饰各种物质，如多肽、药物和脂质体，以便降低物质的免疫原性和/或提高其血液循环持续时间(Zalipsky & Harris，1997)。例如，肠胃外给药的蛋白质是免疫原性的并具有短的药理学半衰期。一些蛋白质也相对是水不溶性的。因此，难以在患者体内获得治疗上有用的蛋白质血液水平。已经作为克服这些困难的方法描述了亲水性聚合物尤其是PEG(Zalipsky & Harris，1997)和蛋白质的共轭。例如，Davis等在U.S.专利No.4,179,337中描述了PEG和蛋白质如酶和胰岛素共轭来形成具有较低免疫原性而仍然保持基本部分生理活性的PEG-蛋白质共轭物。Veronese等(Applied Biochem.and Biotech，11141-152(1985))描述了用苯基氯甲酸酯激活聚乙二醇，用于各自共轭到核糖核酸酶和超氧化物歧化酶。Katre等在U.S专利No.4,766,106和4,917,888中描述了通过聚合物共轭来溶解蛋白质。U.S.专利No.4,902,502(Nitecki等)和PCT公开No.WO90/13540(Enzon，Inc)描述了PEG和其他聚合物与重组蛋白质的共轭来降低免疫原性并提高半衰期。还描述了将PEG用于改进脂质体的血液循环持续时间(U.S.专利No.5,103,556)。将PEG聚合物共价连接脂质的极性头部基团，以便遮掩或屏蔽脂质体以免被网状内皮系统识别和清除。综述了用于将PEG连接到生物相关分子的各种共轭化学方法(Zalipsky，1995a)。专利技术概述本专利技术提供了制备水溶性聚合物，优选是PEG聚合物与生物活性或生物相关分子尤其是多肽的共轭物的通用方法。通常以位点特异性或位点选择性方式来进行与生物分子的共轭。例如，该方法允许在多肽上选自胺、羧酸或合成引入的醛或酮的官能团连接PEG链。该方法还提供了以组合方式来制备不同的共轭物，如果需要。一方面中，本专利技术提供了制备蛋白质或多肽与水溶性聚合物的共轭物的方法，该方法包括使以下的组分(a)-(d)反应(a)RA-C(O)R’(羰基组分)，其中R’是H或低级烷基，优选H或甲基，且更优选H(即，醛)，(b)RN-NH2(胺组分)(c)RC-C(O)OH(羧酸组分)，和(d)R1-NC(异腈组分)，来形成共轭的产物，引入由RA、RN、RC和RI所示各个部分中的至少一个。(a)-(c)中的至少一个是所述的蛋白质或多肽；即，反应包括带有反应性羰基(RA-C(O)R’)的蛋白质或多肽，带有反应性胺(RN-NH2)的蛋白质或多肽，和/或带有反应性羧酸(RC-C(O)OH)的蛋白质或多肽。(a)-(d)中的至少一个是水溶性聚合物；即，反应包括带有反应性羰基(RA-C(O)R’)的水溶性聚合物，带有反应性胺(RN-NH2)的水溶性聚合物，带有反应性羧酸(RC-C(O)OH)的水溶性聚合物，和/或带有反应性异腈(RI-NC)的水溶性聚合物。一实施方案中，共轭的产物是RINH-C(O)-CR’RA-NRN-C(O)RC的形式，确切地引入组分(a)-(d)各自的一个残基。另一实施方案中，例如，其中组分(a)-(d)中的一个带有多于一个的所示反应性官能度(如带有多个氨基的组分RN-NH2，或带有多个羧酸基团的组分RC-C(O)OH)，共轭产物可以包括共轭至其他组分的附加残基的所述组分。聚合物，和从其所形成的共轭物，优选在室温和生理pH下是水溶性的。蛋白质和本文档来自技高网...
【技术保护点】
制备蛋白质或多肽和水溶性聚合物的共轭物的方法，包括：使以下组分（ａ）－（ｄ）进行反应：（ａ）Ｒ↓［Ａ］－Ｃ（Ｏ）Ｒ’，其中Ｒ’是Ｈ或低级烷基，（ｂ）Ｒ↓［Ｎ］－ＮＨ↓［２］（ｃ）Ｒ↓［Ｃ］－Ｃ（Ｏ）ＯＨ，和 （ｄ）Ｒ↓［Ｉ］－ＮＣ来形成共轭产物，引入由Ｒ↓［Ａ］、Ｒ↓［Ｎ］、Ｒ↓［Ｃ］和Ｒ↓［Ｉ］所示各个部分中的至少一个；其中（ａ）－（ｃ）中的至少一个是蛋白质或多肽，（ａ）－（ｄ）中的至少一个是水溶性聚合物，且（ａ）－（ｄ ）中的任何剩余组分是稳定的、非干扰化合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S扎利普斯基，
申请(专利权)人：阿尔扎公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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