木犀草素３’－葡萄糖醛酸苷在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及下式（１）表示的木犀草素３’－葡萄糖醛酸苷在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用。这种木犀草素３’－葡萄糖醛酸苷对宿主ＨｅｐＧ２．２．１５细胞无明显的毒性，对ＨｅｐＧ２．２．１５细胞的最大无毒浓度ＴＣ０大于５００μｇ／ｍｌ，对ＨｅｐＧ２．２．１５细胞表达ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ有显著的抑制作用，经含５００μｇ／ｍｌ式（１）化合物生长液培养９天后，细胞上清中ＨＢｅＡｇ与ＨＢｓＡｇ含量分别为对照组的５１％和７０％（即抑制率分别为４９％和３０％）。式（１）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷(luteolin 3’ -glucuronide)的新用途， 具体来说涉及木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用。
技术介绍
病毒性乙型肝炎是一种严重危害人类健康的常见病，它的防治是一个全球性公共 卫生问题，已引起世界各国政府的关注。我国是病毒性肝炎的高发区，其中尤以乙型肝炎为 突出。据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者超过2. 8亿，我国约占9300万，其中1/3出现 肝损害的临床表现。目前我国有乙肝患者3000万，每年约有30万人死于与乙肝有关的肝 硬化或肝癌。乙型肝炎不仅严重危害我国人民的健康，而且还给国家带来严重的社会经济 负担。乙型肝炎的治疗时间长，医疗费用较高，再加不恰当的滥用药物，更加重了额外的经 济负担。虽然目前临床上已在使用α-干扰素、拉米夫定、阿德福伟等数种药物进行乙型肝 炎的治疗，但由于这些药物都有比较严重的副作用，因而无法达到对乙肝患者进行很好治 疗的目的，所以仍然迫切需要新的抗乙肝病毒药物的问世。海菖蒲在海南南海水域的海草床中属优势种，属于水鳖科海菖蒲属。本专利技术人曾 报道从南海海草海菖蒲(Enhalus acoroides)中分离得到木犀草素3’-葡萄糖醛酸苷(见 文献 1 :Qi SH, Zhang S, Qian P Y, et al. Botanica Marina, 2008, 51 :441_447·)。木犀草 素3’-葡萄糖醛酸苷(luteolin 3'-glucuronide)是一种黄酮苷，其结构用下述式(1)表 示 木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷最初是从日本苔藓類植物Lunularia cruciata (半 月笞)中分离至IJ 的(见文献 2 =Markham K R, Porter L J. Phytochemistry, 1974， 13 :1553-1555.)，后来也曾有报道从日本苔藓類植物Ricciocarpos natans (浮苔)， Marchantia polymorpha(地錢笞)中分离得至Ij (见文献 3 =Markham K R, Porter I J. Phytochemistry, 1974，13 1937-1942.)，但不曾见其抗乙型肝炎病毒活性的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种木犀草素3’ _葡萄糖醛酸苷的新用途。我们通过实验证实木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷具有抗乙型肝炎病毒活性，从而实 现了本专利技术的目的。本专利技术的木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷可用于制备抗乙型肝炎病毒(HBV)的药物。本专利技术的木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷的制备方法包括以下的步骤(1)将海菖蒲用甲醇、乙醇、甲醇_水或乙醇-水等有机溶剂提取，将提取液减压浓 缩得到粗提取物；(2)将粗提取物悬溶于水，用氯仿或乙酸乙酯萃取，减压浓缩得氯仿层或乙酸乙酯 层；(3)将氯仿层或乙酸乙酯层进行常压硅胶柱层析，用两种有机溶剂的混合系统例 如氯仿_丙酮、氯仿_乙酸乙酯、石油醚_丙酮或石油醚_乙酸乙酯等溶剂系统为洗脱剂进 行梯度洗脱，薄层层析TLC追踪合并组分，将在TLC上能用体积比7 3的氯仿-甲醇溶剂 系统展开的组分用氯仿-甲醇溶剂系统梯度冲洗，得到粗产品； (4)将粗产品用重结晶、过高效液相色谱柱、过常压柱等方法纯化得到纯品。纯品 为黄色，在紫外灯254nm波长下有紫外荧光吸收，经高效液相色谱柱(反相硅胶C18柱)分 析，用体积比25 75的乙腈-水冲洗时出峰时间约为8分钟，在紫外波长约238，268，342nm 处有最大吸收。通过体外抗病毒试验，发现本专利技术的木犀草素3’ _葡萄糖醛酸苷对宿主 H印G2. 2. 15细胞无明显的毒性，对H印G2. 2. 15细胞的最大无毒浓度TCtl大于500 μ g/mL，对 H印G2. 2. 15细胞表达HBeAg和HBsAg有显著的抑制作用，且其抑制作用呈剂量依赖性，经含 500 μ g/mL本专利技术的木犀草素3’ -葡萄糖醛酸苷的生长液培养9天后，细胞上清中HBeAg 与HBsAg含量分别为对照组的51%和70% (即抑制率分别为49%和30% )。具体实施例方式以下的实施例是对本专利技术的进一步说明，但本专利技术不限于下述实施例。实施例1 用自来水洗干净后风干得干重2. 5kg的海菖蒲，切碎后用乙醇有机溶剂(约15L) 室温浸泡3次，每次5天，将提取液减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用乙酸乙酯 萃取3次(每次400mL)，减压浓缩得乙酸乙酯层(约24g)。用氯仿和甲醇(体积比1 1) 的混合溶剂将乙酸乙酯层溶解拌硅胶，凉干拌样硅胶后，用约1200mL石油醚-丙酮(体积 比10 10)混合溶剂拌约400g硅胶进行湿法装柱，以石油醚-丙酮(2000mL体积比从 100 10到0 100变化)溶剂系统梯度洗脱，薄层层析TLC(GF254)追踪合并得7个组 分。将在TLC(GF254)上能用氯仿-甲醇体积比7 3溶剂系统展开的组分用氯仿-甲醇 (SOOmL体积比从7 3到6 4变化)溶剂系统梯度冲洗，得到粗品，将粗品用氯仿-甲醇 的混合溶剂重结晶，得黄色纯品。该化合物在薄层层析板上用紫外灯254nm波长下有紫外 荧光吸收；经高效液相色谱柱分析，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测 器，LunaTMC 18 (2)柱，250mmX4. 5讓i. d，室温，体积比25 75的乙腈-水冲洗，流速ImL/ min，出峰时间约为8分钟，在紫外波长约238，268，342nm处有最大吸收，其光谱数据如下C21H18O12 ；1H NMR(500MHz, DMS0) δΗ 7. 62 (1Η, dd, J = 1. 4and 8. 4Hz, Η_6，)， 7. 71 (1Η, d, J = 1. 4Ηζ，Η-2，)，6· 98 (1Η, d, J = 8. OHz, Η_5，)，6. 51 (1Η, s, Η_8)，6. 84 (1Η,S, Η-3)，6· 18 (1H, S, H_6)，5. 13 (1H, d, J = 7. OHz, Η_1”)，3· 96 (1Η, d, J = 9. 5Ηζ, Η_5”)， 3. 42(1Η, J = 9. 5and 9. 5Ηζ，Η_4”)，3. 36(lH，dd，J = 7. Oand 9. 5Ηζ，Η_2”)，3. 35(1Η, J = 9. 5and 9·5Ηζ，Η_3”)；13C 匪R(125MHz，DMSO) δ c 163. 3 (s，C_2)，102. 4 (d，C_3)，181. 5 (s， C-4)，161. 2 (s，C-5)，98. 7 (d, C_6)，164. 3 (s, C_7)，94. 0 (d, C_8)，157. 1 (s, C_9)，103. 4 (s, C-10)，122. l(s，C-l，)，115. l(d，C_2，)，145. 8(s，C_3，)，151. 0(s，C_4，)，116. 9(d，C_5，)， 122. l(d, C-6，)，102. 3 (d, C_l”)，73. 4 (d，C_2”)，75. 6 (d，C_3”)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述式（１）的化合物在制备抗乙型肝炎病毒的药物中的应用：＊＊＊式（１）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：漆淑华，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]