原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒，属于液体活检病理学检测技术领域。本发明专利技术首次将原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物应用到鼻咽部上皮细胞异质性增生检测领域中，令人惊喜的发现，相较于单独地以原血红素或β‑葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行检测，将原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物进行检测的敏感度、特异度以及约登指数均明显提高，因此，以原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物用于检测鼻咽部上皮细胞的异质性增生，有助于提高对由鼻咽部上皮细胞异质性增生引起的鼻咽癌的诊断结果的准确性。

Heme and beta glucuronidase and combined application kit in nasopharyngeal epithelial cell proliferation in the detection of heterogeneity

The invention discloses heme and beta glucuronidase and combined application kit in nasopharyngeal epithelial cell proliferation in the detection of heterogeneity, which belongs to the technical field of detection liquid biopsy. The present invention applies the heme and beta glucuronidase as combined markers applied to the field of nasopharyngeal epithelial cell proliferation in the detection of heterogeneity, surprising discovery, compared to separate with heme or beta glucuronidase as a marker for detection, the heme and beta glucuronic acid as the joint neuraminidase markers detection sensitivity and specificity and Youden index were significantly increased, therefore, the heme and beta glucuronidase as the marker for heterogeneity in detection of nasopharyngeal epithelial cell hyperplasia, and help to improve the accuracy of diagnosis of nasopharyngeal carcinoma caused by nasopharyngeal epithelial cell heterogeneity hyperplasia of.

【技术实现步骤摘要】
原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒
本专利技术涉及液体活检病理学检测
，具体而言，涉及原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒。
技术介绍
鼻咽部上皮细胞异质性增生的结果是鼻咽癌。鼻咽癌是中国常见的恶性肿瘤之中的一种，死亡率在癌症中排第8位。但是从全世界范围来看，中国鼻咽癌的发病率却居世界之冠，据世界卫生组织的调查显示说明，世界上80％的鼻咽癌发生在中国，年发病率为10～25/10万，而全世界平均年发病率在1/10万以下。男女发病之比约为2.5：1。我国鼻咽癌的死亡率占全国恶性肿瘤死亡率的2.81％，由于鼻咽癌病因尚未完全清楚，无法进行一级预防，因此寄希望于二级预防，即早发现、早诊断与早治疗。鼻咽癌的预后与分期密切相关。粗略估计，鼻咽癌病人发现时的临床分期能够降低一期，则总的5年生存率可以提高20％。另外，早期治疗相对简单，费用低，生存质量也高。因此，提高鼻咽癌的早诊率是提高生存率的关键因素之一。为加强我国癌症的预防与控制工作，落实《中国癌症预防与控制规划纲要》(2004-2001)的工作目标，在中央财政支持下，卫生部在2007年组织制定了《鼻咽癌早诊早治项目技术方案》，决定在部分省、直辖市开展癌症早诊早治项目。但是，目前鼻咽癌的筛查方法如为头颈部检查(颈部淋巴结触诊)、EB病毒抗体(VCA/IgA)检测等，敏感性、特异性均不高，造成阳性预测值很低。近期有以唾液作为检测标本，用ELISA方法进行检测，但敏感性和特异性仍不理想。研发敏感性高、特异性强、经济便捷的鼻咽癌筛查方法非常迫切。另外，目前临床检测鼻咽部上皮细胞异质性增生的筛查方法都是针对单个的标志物进行检测，检测结果的敏感度和特异度并不高，对鼻咽癌的诊断结果不准确。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用，将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶同时作为联合标志物，用于检测鼻咽部上皮细胞异质性增生，具有敏感度和特异度高的特点，有助于提高对由鼻咽部上皮细胞异质性增生引起的鼻咽癌的诊断结果的准确性。本专利技术的另一目的在于提供一种鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒，该试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，可用于对由鼻咽部上皮细胞异质性增生引起的鼻咽癌的筛查、早诊、预后判断及指导个体治疗等领域，具有较高的敏感度和特异度。本专利技术是这样实现的：原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用。一种鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒，该鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，该鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒包括：用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜和用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。本专利技术的原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒的有益效果是：相较于以单个的原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物，本专利技术首次提出将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物，应用于检测鼻咽部上皮细胞异质性增生的情况，令人惊喜的发现，相较于单独地以原血红素或β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行检测，将原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物进行检测的敏感度(87％)、特异度(97％)以及约登指数(0.84)均明显提高，有助于提高对由鼻咽部上皮细胞异质性增生引起的鼻咽癌的诊断结果的准确性。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1提供的原血红素比色板的结构示意图；图2为本专利技术实施例1提供的β-葡萄糖醛酸苷酶比色板的结构示意图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒进行具体说明。原血红素是血红素家族的重要成员，是血红素在人体内的存在形式，是血红素结合蛋白的活性基。它由原卟啉IX与二价铁离子结合而成。据其分子结构和功能不同又分为原血红素a、b、c，在肿瘤发生过程中被释放，属于医学相关生物标志(medicine-relatedbiomarker)。致癌因素导致鼻咽部上皮细胞糖代谢异常，肿瘤细胞的耗糖量是正常细胞的十倍，而且磷酸戊糖途径代谢活S跃，称为“瓦博格氏效应”。在肿瘤细胞能量代谢电子传递过程中，其间芬顿氏反应产生的羟自由基、过氧自由基等对线粒体造成氧化损伤，改变细胞蛋白的极性量值，使位居线粒体基膜中血红素结合蛋白疏水核(又称血红素口袋)中的原血红素释放，导致由鼻咽部的分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中原血红素含量增加，其释放量与细胞癌变程度呈正相关。原血红素具有过氧化物酶的作用，可以使过氧化物脱氧，进而使供氢体氧化成含显色集团的物质。用比色法测定鼻咽部分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中原血红素含量，即可显示鼻咽部上皮细胞是否存有异质性增生。β-葡萄糖醛酸苷酶是鼻咽部上皮细胞异质性增生过程中活性增强的一种生物标志物。它是由四个相同亚单位组成的糖蛋白，广泛存在于人体的各种组织及体液中，生理状态下具有参与细胞增生的作用，而在病理状态下，β-葡萄糖醛酸苷酶可以作用于葡萄糖醛酸甙的β一糖苷键，水解癌周结缔组织中的蛋白多糖及糖蛋白，破坏其网状结构的防御作用，有利于癌细胞的浸润与扩散。有关鼻咽癌β-葡萄糖醛酸苷酶活性增高的机制，一是为适应肿瘤生存引起的机体对酶代谢的改变，如癌细胞分泌β-葡萄糖醛酸苷酶增强，癌细胞膜对β-葡萄糖醛酸苷酶通透性改变，对该酶抑制剂的缺乏或增加；二是肿瘤组织浸润并且破坏周围正常组织，引起其它组织酶生成异常，或因肿瘤压迫梗阻引起该酶的大量释放，造成β-葡萄糖醛酸苷酶增高。通过联合应用形态学细胞水平的免疫组化技术、亚细胞水平的免疫电镜技术和机能学的ELISA技术，对鼻咽癌组织及鼻咽部分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中β-葡萄糖醛酸苷酶进行的同步检测显示，β-葡萄糖醛酸苷酶在鼻咽癌患者组织及鼻咽部分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体中增高，是由癌细胞自身的生物学特性决定的，缘于肿瘤细胞为适应其快速过度增殖和异常分化的自主性生长的生存方式而产生的自我调控，由其自身独特的生长方式决定并成为内因的。在最适温度与PH条件下，酚酞葡萄糖醛酸甙经β-葡萄糖醛酸苷酶催化水解，释放出游离酚酞。加碱性溶液终止反应，酚酞呈红色。观察酚酞指示的颜色变化，即可了解样本液中β-葡萄糖醛酸苷酶的活性，显示鼻咽部上皮细胞是否存有恶变及其程度。但是，以单个的原血红素a/b/c作为标志物检测鼻咽部上皮细本文档来自技高网...

【技术保护点】
原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物在制备鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鼻咽部上皮细胞为鼻咽部假复层纤毛柱状上皮细胞。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒的检测样本为由鼻咽部的分泌液、组织渗液和粘液组成的混合液体。4.一种鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其特征在于，所述鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒以原血红素和β-葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行联合检测，所述鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒包括：用于检测原血红素的原血红素检测试剂膜和用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂膜。5.根据权利要求4所述的鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其特征在于，所述鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒还包括样本前处理液，所述样本前处理液由pH为6.8-7.8、浓度为0.05mol/L的Tris-Hcl缓冲液与EDTA混合制得。6.根据权利要求4或5所述的鼻咽部上皮细胞异质性增生检测试剂盒，其特征在于，所述原血红素检测试剂膜由以下方法制得：将聚乙烯吡咯烷酮与磷酸缓冲液混合，得到第一混合液；将原血红素空白试剂膜浸泡于所述第一混合液中，去除所述原血红素空白试剂膜的水分后，得到原血红素试剂膜半成品；将所述原血红素试剂膜半成品浸泡于第二混合液中，去除所...

【专利技术属性】
技术研发人员：温鹏，
申请(专利权)人：温鹏，
类型：发明
国别省市：山东,37