刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种从香青兰中提取分离得到刺槐素‑7‑O‑葡萄糖醛酸苷的方法，其特点在于：将香青兰干燥的地上部分粉碎，用渗漉法收集提取，得到渗漉液，用减压浓缩得稠浸膏；水浴干燥后得浸膏粉。将浸膏粉采用高浓度醇溶解后干法拌样，进行聚酰胺柱及ODS柱层析，经洗脱，洗脱液经减压蒸馏装置蒸干得白色结晶，即为化合物刺槐素‑7‑O‑葡萄糖醛酸苷。

Preparation method of acacetin 7 O glucuronide

The invention relates to a method for extraction and isolation of acacetin 7 O glucuronide from Dracocephalum in, which is characterized in that: the moldavica dry land crushing, collecting percolating extraction, get percolate, decompression concentrating to obtain dense water extract; after drying to extract powder. The extract powder with high concentration ethanol dissolved after dry mixing, polyamide column and ODS column chromatography, the elution, elution dry white crystals by vacuum distillation device, which is 7 O compounds Robinin glucuronide.

【技术实现步骤摘要】
刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的制备方法
本专利技术涉及一种从香青兰中提取分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的方法。
技术介绍
刘金旗(贡菊化学成分的研究[J].中国中药杂志，2001，26(8)：547-548.)首次报道从贡菊植物分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的结构，该工艺采用萃取、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、重结晶等技术联合从2.5kg贡菊中分离得到200mg的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，操作复杂、步骤繁琐。刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的结构式为：杨建波(新疆一枝蒿化学成分的研究[J].中草药，2008，39(8)：1125-1127.)采用乙醇回流提取、萃取、硅胶柱、聚酰胺柱、SephadexLH-20柱、ODS柱反复柱层析分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，工艺操作步骤繁琐。张现涛(梓木草的化学成分[J].ChineseJournalofNaturalMedicines，2005，3(6)：357-358.)采用乙醇回流提取、萃取、硅胶柱、SephadexLH-20柱、ODS柱反复柱层析分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，该二艺操作步骤繁琐。靳鑫(穿心莲化学成分的研究，中草药，2012，43(1)：47-50)采用萃取、硅胶柱色谱等手段首次从穿心莲植物分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，该工艺采用了6种技术联合进行分离，操作复杂、步骤繁琐。黄松(独脚金黄酮类化学成分研究[J].中药材，2010，33(7)：1089-1091.)采用D101大孔树脂、聚酰胺柱层析和反相制备液相色谱法从1kg独角金植物中分离得到9.46mg的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，该方法分离制备得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的量较少，仅为9.64mg·kg-1。目前无市售的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷纯品，其药理活性尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从香青兰中提取分离得到刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：a、将香青兰干燥的地上部分粉碎，用5～10倍量的40％～75％乙醇浸泡12～24h；b、采用渗漉法，香青兰药材与40％～75％乙醇比例1∶30～40，流速1～6mL/min，收集前15倍量的渗漉液；c、渗漉液用孔径0.1～10mm的网孔过滤1～5次，滤液合并；d、用减压浓缩装置，在压力：0.08～0.1Mpa，温度：30～60℃下，蒸馏除去乙醇得0.8～1.2g/mI的稠浸膏；水浴干燥后得浸膏粉；e、将浸膏粉采用70％～100％乙醇溶解后干法拌样，上100～200目聚酰胺进行柱层析，20～95％乙醇梯度洗脱，并收集40％～60％乙醇的洗脱液；洗脱液用减压蒸馏装置，在压力：0.08～0.1Mpa，温度：40～60℃下蒸干，得浸膏粉；f、将上述所得浸膏粉用50％甲醇溶解上ODS填料，50～100％甲醇-0.5％甲酸水梯度洗脱，并收集55～60％甲醇-0.5％甲酸水的洗脱液；洗脱液用减压蒸馏装置，在压力：0.08～0.1Mpa，温度：40～60℃下蒸干得化合物I粗品。g、为了进一步纯化所得粗品，滤去杂质，采用HPLC在流动相为55～60vol％甲醇和0.5％甲酸水溶液的条件下对粗品进行制备得制备液，洗脱液用减压蒸馏装置，在压力：0.08～0.1Mpa，温度：40～60℃下蒸干得单体刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷。有益技术效果本专利采用聚酰胺和ODS柱色谱技术联合的方法，方法简单，步骤简短。从1kg香青兰植物中分离得到121mg的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷，转移率较高。本专利技术获得的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷纯度高，达到98％。附图说明下面将结合附图和具体实施方式对本专利技术的上述和其他目的、特征和优点作出进一步详细的说明。图1为本专利技术提供方法的工艺流程图；图2为根据本专利技术一个实施例所制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的紫外光谱(UV)图；图3为根据本专利技术一个实施例所制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的红外光谱(IR)图；图4为根据本专利技术一个实施例所制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的电喷雾质谱(ESI-MS)图；图5为根据本专利技术一个实施例所制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的核磁共振氢谱(1H-NMR)图；图6为根据本专利技术一个实施例所制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的核磁共振碳谱(13C-NMR)图。具体实施方式本专利技术提供的一种刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的制备方法，包括获得香青兰的提取物，以及对提取物进一步层析、HPLC制备等步骤。下面结合附图，详述本专利技术所提供的方法。如图1所示，首先，将1份重量的香青兰干燥的地上部分粉碎，用30～40重量倍数的40～75vol％的乙醇溶液渗漉提取。然后，将提取液浓缩，例如可以采用减压浓缩的方法，浓缩后提取液呈膏状。之后再将膏状物干燥，例如可以采用真空干燥的方法，将膏状物制成浸膏粉。将浸膏粉进行聚酰胺柱层析。层析的步骤可以为：将浸膏粉采用高浓度醇溶解后拌入聚酰胺中，例如可以采用100～200目的层析用聚酰胺，拌入的比例为浓缩后的浸膏粉与层析用聚酰胺的重量比为1∶10～20。上柱完毕后，流动相采用乙醇溶液，按梯度20％～95％的比例通入流动相进行洗脱。合并相同组分洗脱液，浓缩，得到40％～60％乙醇洗脱馏分。将40％～60％乙醇洗脱馏分采用70％乙醇溶解，滤除杂质，再浓缩后进行ODS柱层析，流动相采用复合洗脱剂，所述复合洗脱剂由A组分和B组分构成，所述A组分选自下述组中的至少一种：甲醇、乙醇、丙酮、异丙酮或丁醇，所述B组分为水、甲酸-水、磷酸-水，所述A组分与B组分的体积比为1∶1～8∶2。例如流动相可以采用甲醇-0.5％甲酸水，甲醇-0.5％甲酸水的体积比依次为55∶45、6∶4、8∶2。此时刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的组分主要在流动相甲醇-0.5％甲酸水体积比为6∶4时被洗脱。最后，合并相同组分洗脱液并浓缩，得到化合物I的粗提物。进一步地，为了提高刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的纯度，还可用HPLC对刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷进行制备，例如色谱柱为C18(150*10mm，10μm)，流动相为50～60vol％甲醇和0.5％甲酸水溶液，流速为3.5mL/min，进样量为0.5～1.0mL，对上述粗提物进行HPLC制备，即得到淡黄色粉末状结晶，为刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷成品，其纯度可达95％以上。经UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR对所得组分的结构进行鉴定，可知其为刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷。图2、图3为根据本专利技术的制备方法制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的UV图谱和IR图谱。图4为根据本专利技术的制备方法制备的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的ESI-MS的分析可知，ESI-MS特征峰在m/z461[M+](正离子)，m/z316.20[M+-COOH]，m/z285.10[M+-Glucuronide]。再结合图5、图6所示的根据本专利技术的制备方法制备的田蓟苷的NMR图谱分析，可确定其分子量为460，分子式为C22H20O11，其中，1H-NMR(400MHz，DMSO)图谱中表现出典型的黄酮苷类化合物的氢谱特征，通过耦合常数及化学位移可确定每个氢的归属，δ：12.91(5-OH)，8.07(d，J＝8本文档来自技高网...

【技术保护点】
式I所示的刺槐素‑7‑O‑葡萄糖醛酸苷的制备方法，

【技术特征摘要】
2015.11.24 CN 201510870572X1.式I所示的刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a、将香青兰干燥的地上部分粉碎，用5～10倍量的40％～75％乙醇浸泡12～24h；b、采用渗漉法，香青兰药材与40％～75％乙醇比例1∶30～40，流速1～6mL/min，收集前15倍量的乙醇渗漉液；c、渗漉液用孔径0.1～10mm的网孔过滤1～5次，滤液合并；d、用减压浓缩装置，在压力：0.08～0.1Mpa，温度：30～60℃下，蒸馏除去乙醇得0.8～1.2g/mL的稠浸膏；水浴干燥后得浸膏粉；e、将浸膏粉采用70％～100％乙醇溶解后干法拌样，上100～20...

【专利技术属性】
技术研发人员：王新春，袁勇，邢建国，赵洁，王晓义，陈卫军，黄川生，
申请(专利权)人：石河子大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：新疆,65