【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、用可电离脂质配制的脂质纳米颗粒可充当用于将生物活性剂，特别是多核苷酸，诸如rna，包括mrna和引导rna，递送至细胞中的载荷媒介物。含有可电离脂质的lnp组合物可有助于将寡核苷酸药剂递送跨过细胞膜，并且可用于将用于基因编辑的组分和组合物引入到活细胞中。尤其难以递送至细胞的生物活性剂包括蛋白质、基于核酸的药物及其衍生物，尤其包括诸如mrna的相对较大的寡核苷酸的药物。用于将有前景的基因编辑技术递送至细胞中，诸如用于递送crispr/cas9系统组分(例如编码核酸酶的mrna和相关引导rna(grna))的组合物尤其引人关注。
2、需要用于改善诸如rna的核酸的体内和体外递送的组合物。举例而言，需要用于将crispr/cas组分递送至诸如人细胞的真核细胞的组合物。具体地说，用于递送编码crispr蛋白质组分的mrna和用于递送crispr grna的组合物尤其引人关注。具有可稳定和递送rna组分的适用于体外和体内递送的特性的组合物也尤其引人关注。
技术实现思路
1、本公开提供了脂质组合物(例如纳米颗粒(lnp)组合物)。此类脂质组合物可具有有利于将生物药剂，包括例如核酸载荷，诸如crispr/cas基因编辑组分递送至细胞的特性。
2、在一些实施方案中，lnp组合物包含：
3、生物活性剂；和
4、脂质组分，其中所述脂质组分包含：
5、a)可电离脂质，其量为所述脂质组分的约25-50mol％；
6、b
7、c)辅助脂质，其量为所述脂质组分的约39-65mol％；和
8、d)peg脂质，其量为所述脂质组分的约0.5-1.8mol％；
9、其中所述可电离脂质为式(i)化合物
10、
11、其中
12、x1是c6-7亚烷基；
13、x2是或不存在，条件是如果x2是则r2不是烷氧基；
14、z1是c2-3亚烷基；
15、z2选自-oh、-nhc(＝o)och3和-nhs(＝o)2ch3；
16、r1是c7-9无支链烷基或c7-11无支链炔基；并且
17、每个r2独立地是c8烷基或c8烷氧基；
18、或其盐。
19、在一些实施方案中，lnp组合物包含：
20、生物活性剂；和
21、脂质组分，其中所述脂质组分包含：
22、a)可电离脂质，其量为所述脂质组分的约25-50mol％；
23、b)中性脂质，其量为所述脂质组分的约7-25mol％；
24、c)辅助脂质，其量为所述脂质组分的约39-65mol％；和
25、d)peg脂质，其量为所述脂质组分的约0.8-1.8mol％；
26、其中所述可电离脂质为式(i)化合物
27、
28、其中
29、x1是c6-7亚烷基；
30、x2是或不存在，条件是如果x2是则r2不是烷氧基；
31、z1是c2-3亚烷基；
32、z2选自-oh、-nhc(＝o)och3和-nhs(＝o)2ch3；
33、r1是c7-9无支链烷基；并且
34、每个r2独立地是c8烷基或c8烷氧基；
35、或其盐。
36、在某些实施方案中，可电离脂质的量为脂质组分的约30-45mol％；中性脂质的量为脂质组分的约10-15mol％；辅助脂质的量为脂质组分的约39-59mol％；并且peg脂质的量为脂质组分的约1-1.5mol％。
37、在一些实施方案中，可电离脂质的量为脂质组分的约30mol％；中性脂质的量为脂质组分的约10mol％；辅助脂质的量为脂质组分的约59mol％；并且peg脂质的量为脂质组分的约1-1.5mol％。
38、在一些实施方案中，可电离脂质的量为脂质组分的约40mol％；中性脂质的量为脂质组分的约15mol％；辅助脂质的量为脂质组分的约43.5mol％；并且peg脂质的量为脂质组分的约1.5mol％。
39、在一些实施方案中，可电离脂质的量为脂质组分的约50mol％；中性脂质的量为脂质组分的约10mol％；辅助脂质的量为脂质组分的约39mol％；并且peg脂质的量为脂质组分的约1mol％。
40、在某些实施方案中，可电离脂质是
41、
42、或其盐，中性脂质是dspc；辅助脂质是胆固醇；并且peg脂质是1，2-二肉豆蔻酰基-外消旋-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000。
43、在某些实施方案中，lnp的z平均直径小于约145nn，例如小于约100nm、小于约95nm或小于约90nm。在某些实施方案中，lnp的数量平均直径大于约45nm，例如大于约50nm。
44、在某些实施方案中，lnp的多分散性指数为约0.005至约0.75，例如约0.005至约0.1。
45、在一些实施方案中，lnp组合物的n/p比为约5至约7，较佳约6。
46、在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中核酸组分是rna组分。在一些实施方案中，rna组分包含mrna。在优选的实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中rna组分包含rna引导的dna结合剂，例如cas核酸酶mrna，诸如2类cas核酸酶mrna，或cas9核酸酶mrna。
47、在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中mrna是修饰的mrna。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中rna组分包含grna核酸。在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中grna核酸是grna。
48、在某些优选的实施方案中，本公开涉及本文所述的lnp组合物，其中rna组分包含2类cas核酸酶mrna和grna。在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中grna核酸是或编码双引导rna(dgrna)。在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中grna核酸是或编码单引导rna(sgrna)。
49、在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的lnp组合物，其包含引导rna核酸和2类cas核酸酶mrna，其中mrna与引导rna核酸的比率为按重量计约2∶1至1∶4，优选按重量计约1∶1。
50、在某些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何lnp组合物，其中grna是修饰的grna，例如所述修饰的grna在5′端处包含前五个核苷酸中的一个或多个处的修饰，或所述修饰的grna在3′端处包含最后五个核苷酸中的一个或多个处的修饰，或两者。
51、在某些实施方案中，本公开涉及一种将生物活性剂递送至细胞的方法，其包括使细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脂质组合物，其包含：
2.一种脂质组合物，其包含：
3.如权利要求1或2所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是式(II)化合物
4.一种脂质组合物，其包含：
5.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
6.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
7.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是不带电脂质或两性离子脂质。
8.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是DSPC或DPME。
9.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是DSPC。
10.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质选自胆固醇、5-十七烷基间苯二酚和胆固醇半琥珀酸酯。
11.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质是胆固醇。
12.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质包含二肉豆蔻酰基甘油(DMG)。
13.如前述权利
14.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质是PEG-DMG。
15.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质是PEG-2k DMG。
16.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
17.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30-45mol％。
18.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30-40mol％。
19.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30mol％。
20.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约40mol％。
21.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约50mol％。
22.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-20mol％。
23.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-15mol％。
24.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10mol％。
25.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约15mol％。
26.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约50-60mol％。
27.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39-59mol％。
28.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约43.5-59mol％。
29.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约59mol％。
30.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约43.5mol％。
31.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39mol％。
32.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质的量为所述脂质组分的约0.9-1.6mol％。
33.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质的量为所述脂质组分的约1-1.5mol％。
34.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质的量为所述脂质组分的约1mol％。
35.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述PEG脂质的量为所述脂质组分的约1.5mol％。
36.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约27-40mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-20mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约50-60mol％；并且所述PEG脂质的量为所述脂质组分的约0.9-1.6mol％。
37.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种脂质组合物，其包含：
2.一种脂质组合物，其包含：
3.如权利要求1或2所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是式(ii)化合物
4.一种脂质组合物，其包含：
5.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
6.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
7.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是不带电脂质或两性离子脂质。
8.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是dspc或dpme。
9.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质是dspc。
10.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质选自胆固醇、5-十七烷基间苯二酚和胆固醇半琥珀酸酯。
11.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质是胆固醇。
12.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质包含二肉豆蔻酰基甘油(dmg)。
13.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质包含peg-2k。
14.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质是peg-dmg。
15.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质是peg-2k dmg。
16.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质是
17.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30-45mol％。
18.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30-40mol％。
19.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30mol％。
20.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约40mol％。
21.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约50mol％。
22.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-20mol％。
23.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-15mol％。
24.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10mol％。
25.如权利要求1至21中任一项所述的脂质组合物，其中所述中性脂质的量为所述脂质组分的约15mol％。
26.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约50-60mol％。
27.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39-59mol％。
28.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约43.5-59mol％。
29.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约59mol％。
30.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约43.5mol％。
31.如权利要求1至25中任一项所述的脂质组合物，其中所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39mol％。
32.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质的量为所述脂质组分的约0.9-1.6mol％。
33.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1-1.5mol％。
34.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1mol％。
35.如权利要求1至31中任一项所述的脂质组合物，其中所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1.5mol％。
36.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约27-40mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-20mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约50-60mol％；并且所述peg脂质的量为所述脂质组分的约0.9-1.6mol％。
37.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30-45mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10-15mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39-59mol％；并且所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1-1.5mol％。
38.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约30mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约59mol％；并且所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1-1.5mol％。
39.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约40mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约15mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约43.5mol％；并且所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1.5mol％。
40.如权利要求1至16中任一项所述的脂质组合物，其中所述可电离脂质的量为所述脂质组分的约50mol％；所述中性脂质的量为所述脂质组分的约10mol％；所述辅助脂质的量为所述脂质组分的约39mol％；并且所述peg脂质的量为所述脂质组分的约1mol％。
41.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中每个mol％变化小于5％。
42.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中每个mol％变化小于1％。
43.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中每个mol％变化小于0.5％。
44.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中每个mol％基于所述可电离脂质、所述中性脂质、所述辅助脂质和所述peg脂质的相对标称浓度。
45.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中每个mol％基于所述可电离脂质、所述中性脂质、所述辅助脂质和所述peg脂质的相对实际浓度。
46.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的z平均直径小于约100mm。
47.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的z平均直径小于约95nm。
48.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的z平均直径小于约90nm。
49.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的数量平均直径大于约45nm。
50.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的数量平均直径大于约50nm。
51.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物呈lnp形式；并且所述lnp的多分散性指数为约0.005至约0.75。
52.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述lnp组合物呈lnp形式；并且所述lnp的多分散性指数为约0.005至约0.1。
53.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物的n/p比为约5至约7。
54.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物的n/p比为约6。
55.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含非核酸组分。
56.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含或编码治疗活性蛋白。
57.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含或编码基因组编辑工具。
58.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含或编码一种或多种能够在dna或rna中产生单链或双链断裂的核酸酶。
59.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含核酸组分。
60.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述生物活性剂包含rna。
61.如权利要求60所述的脂质组合物，其中所述rna是mrna。
62.如权利要求61所述的脂质组合物，其中所述核酸组分包含编码rna引导的dna结合剂的mrna。
63.如权利要求62所述的脂质组合物，其中所述mrna包含cas核酸酶mrna。
64.如权利要求62所述的脂质组合物，其中所述mrna包含2类cas核酸酶mrna。
65.如权利要求62所述的脂质组合物，其中所述mrna包含cas9核酸酶mrna。
66.如权利要求59至65中任一项所述的脂质组合物，其中所述核酸组分包含修饰的rna。
67.如权利要求59至66中任一项所述的脂质组合物，其中所述核酸组分包含引导rna核酸。
68.如权利要求67所述的脂质组合物，其中所述引导rna核酸是grna。
69.如权利要求67或68所述的脂质组合物，其中所述引导rna核酸是或编码双引导rna(dgrna)。
70.如权利要求67或68所述的脂质组合物，其中所述引导rna核酸是rna或编码单引导rna(sgrna)。
71.如权利要求68至70中任一项所述的脂质组合物，其中所述grna是修饰的grna。
72.如权利要求71所述的脂质组合物，其中所述修饰的grna在5′端处包含前五个核苷酸中的一个或多个处的修饰。
73.如权利要求71或72所述的脂质组合物，其中所述修饰的grna在3′端处包含最后五个核苷酸中的一个或多个处的修饰。
74.如权利要求59至73中任一项所述的脂质组合物，其中所述核酸组分包含引导rna核酸；所述mrna是2类cas核酸酶mrna；并且所述mrna与所述引导rna核酸的比率为按重量计约2：1至1：4。
75.如权利要求74所述的脂质组合物，其中所述引导rna核酸与所述2类cas核酸酶mrna的比率为按重量计约1：1。
76.如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物，其中所述脂质组合物是lnp组合物。
77.一种基因编辑方法，其包括使细胞与如前述权利要求中任一项所述的脂质组合物接触。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述基因编辑引起基因敲除。
79.如权利要求77所述的方法，其中所述基因编辑引起基因校正。
80.如权利要求77所述的方法，其中所述基因编辑引起插入。
81.一种裂解dna的方法，其包括使细胞与如权利要求1至76中任一项所述的脂质组合物接触。
82.一种将生物活性剂递送至细胞的方法，其包括使所述细胞与如权利要求1至76中任一项所述的脂质组合物接触。
83.如权利要求77至82中任一项所述的方法，其中所述接触步骤产生单链dna切口。
84.如权利要求77至82中任一项所述的方法，其中所述接触步骤产生双链dna断裂。
85.如权利要求77至84中任一项所述的方法，其还包括将至少一种模板核酸引入到所述细胞。
86.如权利要求77至85中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述脂质组合物施用至所述细胞。
87.如权利要求77至86中任一项所述的方法，其中所述脂质组合物是第一脂质组合物，并且所述方法还包括使所述细胞与包含mrna、grna和grna核酸中的一种或多种的第二脂质组合物接触。
88.如权利要求87所述的方法，其中所述第二脂质组合物是如权利要求1至76中任一项所述的第二脂质组合物。
89.如权利要求87或88所述的方法，其中所述第一脂质组合物和所述第二脂质组合物同时施用。
90.如权利要求87或88所述的方法，其中所述第一脂质组合物和第二脂质组合物依序施用。
91.如权利要求87至90中任一项所述的方法，其中所述第一脂质组合物包含第一grna并且所述第二脂质组合物包含第二grna，其中所述第一grna和第二grna包含与不同靶序列互补的不同引导序列。
92.如权利要求77至91中任一项所述的方法，其中所述细胞是真核细胞。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述细胞是人细胞。
94.如权利要求77至93中任一项所述的方法，其中所述细胞适用于过继细胞疗法(act)。
95.如权利要求94所述的方法，其中所述细胞适用于自体细胞疗法。
96.如权利要求77至95中任一项所述的方法，其中所述细胞是干细胞。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述干细胞是造血干细胞(hsc)或诱导性多能干细胞(ipsc)。
98.如权利要求77至97中任一项所述的方法，其中所述细胞是免疫细胞。
99.如权利要求98所述的方法，其中所述免疫细胞是白细胞或淋巴细胞。
100.如权利要求98所述的方法，其中所述免疫细胞是淋巴细胞。
101.如权利要求100所述的方法，其中所述淋巴细胞是t细胞、b细胞或nk细胞。
102.如权利要求100所述的方法，其中所述淋巴细胞是t细胞。
103.如权利要求100所述的方法，其中所述淋巴细胞是活化t细胞。
104.如权利要求100所述的方法，其中所述淋巴细胞是非活化t细胞。
105.如权利要求77至104中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述脂质组合物体外接触。
106.如权利要求77至105中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述脂质组合物离体接触。
107.如权利要求77至10...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·斯瓦米，V·拉克舍，A·普鲁德乌斯，M·梅塔尼，R·G·帕马，
申请(专利权)人：英特利亚治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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