本发明专利技术涉及一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，目前还没有检测成本低，检测限达０．１μｇ／ｋｇ的测定方法。本发明专利技术包括标准溶液制备、标准曲线制作、蜂胶样液制备和氯霉素残留量检测工序；蜂胶样液制备工序中加入１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液溶解蜂胶样品，用水稀释以释出蜂胶样品中的目标物，再用ＨＣｌＯ４进行酸化以沉淀蜂胶样品中的蜂胶成分，蜂胶样液用１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液将滤液的ｐＨ值调节到１０．５；最后将蜂胶样液通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪测得氯霉素的残留量。本发明专利技术检测成本低，检测效率高，检测限能达０．１μｇ／ｋｇ，定量限为０．３μｇ／ｋｇ，线性相关系数为０．９９９９。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，尤其是涉及一种高效液相色谱 串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，主要用于对蜂胶中氯霉素药物残留量进行检 查，同时也适用于对蜂王浆、蜂蜜中氯霉素药物残留量进行检查。
技术介绍
氯霉素(Chloramphenicol)是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素，为广谱抑菌剂。 由于其对血液系统的毒性较大，被欧盟、日本、美国等国禁止用于动物源性食品。氯霉素检测方法主要有LC/MS/MS法、GC/MS法、GC法、ELISA法、HPLC法和CHARM II法等，如SN/T 2063-2008中的进出口蜂王浆中氯霉素残留量的检测方法和农业部781 号公告-2-2006中的动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱均属于LC/MS/MS 法，如农业部781号公告-10-2006中的蜂蜜中氯霉素残留量的测定气相色谱法和GB/ T 22338-2008中的动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定均属于GC/MS法，如农业部 1025号公告-21-2008中的动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法属于GC法，如SN/T 2058-2008中的进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法属于ELISA法，如由吴华、黄鸿和欧 剑峰等发表在四川化工2009年第12卷第3期第40-42页上的高效液相色谱法测定蜂蜜 中氯霉素残留量的研究和由潘莹宇、许茜和康学军等发表在色谱2005年第23卷第6期第 577-580页上的高效液相色谱_荧光检测法测定牛奶中氯霉素的残留量均属于HPLC法，如 SN/T1966-2007上的水产品中氯霉素残留检测方法属于CHARM II法。由上可知，液相色谱-串联质谱方法作为确证方法已经广泛被国内外政府监督检 验机构运用，其在灵敏度、准确度、检测效率上所具有的独特优势，已成为目前最优越性的 残留检测仪器设备，用于检测动物源性食品中氯霉素残留量时，其检测限可以达到0. 1 μ g/ kg，相关文献报道已经很多。但是，由于不同种类的样品成分不一样，样品净化程度也不同， 在使用液相色谱-串联质谱方法时，并非所有的样品都能够达到0. 1 μ g/kg这个检出限， 例如使用已有的可以测定氯霉素残留量的液相色谱-串联质谱方法测定蜂胶中氯霉素残 留量时，其检测限远达不到0. 1 μ g/kg，这是因为蜂胶中的成分有近千种，国内还没有理想 的方法作为蜂胶中氯霉素残留量检测标准，国内也未见蜂胶中氯霉素残留量检测的相关文 献。综上所述，目前还没有一种方法简单、准确，检测成本低，检测效率高，检测限能达 0. 1 μ g/kg的用于测定蜂胶中氯霉素残留限量的方法，在蜂胶检测中难以满足国外对蜂胶 中氯霉素残留限量的要求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，而提供一种方法简单，检测 成本低，检测效率高，检测限能达0. 1 μ g/kg的高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素 残留量的方法。本专利技术解决上述问题所采用的技术方案是该高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中 氯霉素残留量的方法的特点在于该方法所用到的原料包括纯度大于99.0%的氯霉素标 准品，浓度为100mg/l的D5-氯霉素标准品，为农残级的乙酸乙酯，为分析纯的氢氧化钠，为 优级纯的正己烷，为液相色谱纯的乙腈，蜂胶样品；该方法所用到的设备包括三重四极杆串联质谱仪，配有二元泵、在线脱气机、自动进样器、数据处理软件的高效液相色谱仪；所述三重四极杆串联质谱仪中的离子源温 度为600°C，辅助加热气为55. OOpsi，干燥气为65. OOpsi，气帘气为25. OOpsi，碰撞气 为5. OOpsi,电喷雾电压为-4100. 00V,离子化法为负离子模式；所述高效液相色谱仪为 Agilent 1200series，色谱柱为 Hypersil 0DS2，色谱柱的规格为 4. 6mmX 150mm，5 μ m，柱温 为30°C，进样量为20μ 1 ；该方法包括标准溶液制备工序、标准曲线制作工序、蜂胶样液制备工序和氯霉素 残留量检测工序；所述标准溶液制备工序如下a、氯霉素贮备标准溶液配制步骤称取氯 霉素标准品IOmg用乙腈定容至IOml配成浓度为1000mg/L的氯霉素贮备标准溶液，将该氯 霉素贮备标准溶液置于-18°C以下保存待用；b、氯霉素中间标准液配制步骤取a中的氯霉 素贮备标准溶液100 μ 1用乙腈定容至IOml配成浓度为10mg/L的氯霉素中间标准液；C、氯 霉素氘代内标中间液配制步骤采用D5-氯霉素标准品代替氯霉素标准品，重复上述a步骤 和b步骤，制得浓度为10mg/L的氯霉素氘代内标中间液；d、临时标准使用液配制步骤取 氯霉素中间标准液用体积浓度为30 %的乙腈水溶液配至5 μ g/kg和50 μ g/kg，取氯霉素氘 代内标中间液用体积浓度为30%的乙腈水溶液配至200μ g/kg ；所述标准曲线制作工序中，取标准溶液制备工序中制得的氯霉素贮备标准溶液、 氯霉素中间标准液、氯霉素氘代内标中间液和临时标准使用液，通过高效液相色谱仪和三 重四极杆串联质谱仪得到标准曲线；所述蜂胶样液制备工序中，取蜂胶样品2g和浓度为200μ g/kg的D5-氯霉素标准 品内标50ul置于一号50ml离心塑料瓶中并充分混合，然后静置5min以上，再向一号50ml 离心塑料瓶中加入5ml浓度为lmol/L的NaOH溶液并不断振荡提取5min，使蜂胶样品充分 溶解，然后向一号50ml离心塑料瓶中加入5ml水并摇勻，再向一号50ml离心塑料瓶中加入 IOml浓度为5%的HClO4进行酸化并充分摇勻而制得蜂胶液；该蜂胶液先在常温下超声提 取5min，再在转速为3000rpm下离心5min而得到上层离心液，然后对上层离心液进行过滤 而制得滤液；取滤液IOml置于二号50ml离心塑料瓶中，用浓度为lmol/L的NaOH溶液将 滤液的PH值调节到10. 5，然后向二号50ml离心塑料瓶中加入IOml乙酸乙酯并充分混合 3min,在转速为3000rpm下离心2min而得到乙酸乙酯层，然后将乙酸乙酯层置于15ml塑料 离心管中，该乙酸乙酯层在35°C下进行氮气吹干，再向15ml塑料离心管中加入体积浓度为 30%的乙腈水溶液Iml并进行超声溶解，然后向15ml塑料离心管中加入2ml正己烷并充分 混合而制得离心液，将该离心液在转速为SOOrpm下离心2min而得到下层样液，最后将下层 样液过0. 22 μ m的滤膜而制得蜂胶样液；所述氯霉素残留量检测工序中，取蜂胶样液制备工序中制得的蜂胶样液，通过高 效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪，并结合标准曲线制作工序中得到的标准曲线而测 得蜂胶中氯霉素的残留量；该方法的检测限为0. 1 μ g/kg，定量限为0. 3 μ g/kg。本专利技术该方法所使用的水为双重蒸馏水。本专利技术所述蜂胶样液制备工序中，向一号50ml离心塑料瓶中加入浓度为lmol/L 的NaOH溶液溶解蜂胶样品，然后用水稀释以释出蜂胶样品中的氯霉素残留物，再用HClO4 进行酸化以沉淀蜂胶样品中的蜂胶成分。本专利技术所述蜂胶样液制备工序中，蜂胶样液用浓度为lmol/L的NaOH溶液将滤液 的PH值调节到10. 5，乙酸乙酯层在35°C下采用氮吹仪进行氮气吹干，再向15m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，其特征在于：该方法所用到的原料包括纯度大于９９．０％的氯霉素标准品，浓度为１００ｍｇ／ｌ的Ｄ５－氯霉素标准品，为农残级的乙酸乙酯，为分析纯的氢氧化钠，为优级纯的正己烷，为液相色谱纯的乙腈，蜂胶样品；该方法所用到的设备包括三重四极杆串联质谱仪，配有二元泵、在线脱气机、自动进样器、数据处理软件的高效液相色谱仪；所述三重四极杆串联质谱仪中的离子源温度为６００℃，辅助加热气为５５．００ｐｓｉ，干燥气为６５．００ｐｓｉ，气帘气为２５０ｒｐｍ下离心２ｍｉｎ而得到乙酸乙酯层，然后将乙酸乙酯层置于１５ｍｌ塑料离心管中，该乙酸乙酯层在３５℃下进行氮气吹干，再向１５ｍｌ塑料离心管中加入体积浓度为３０％的乙腈水溶液１ｍｌ并进行超声溶解，然后向１５ｍｌ塑料离心管中加入２ｍｌ正己烷并充分混合而制得离心液，将该离心液在转速为８００ｒｐｍ下离心２ｍｉｎ而得到下层样液，最后将下层样液过０．２２μｍ的滤膜而制得蜂胶样液；所述氯霉素残留量检测工序中，取蜂胶样液制备工序中制得的蜂胶样液，通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪，并结合标准曲线制作工序中得到的标准曲线而测得蜂胶中氯霉素的残留量；该方法的检测限为０．１μｇ／ｋｇ，定量限为０．３μｇ／ｋｇ。．００ｐｓｉ，碰撞气为５．００ｐｓｉ，电喷雾电压为－４１００．００Ｖ，离子化法为负离子模式；所述高效液相色谱仪为Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ｓｅｒｉｅｓ，色谱柱为ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２，色谱柱的规格为４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ，柱温为３０℃，进样量为２０μｌ；该方法包括标准溶液制备工序、标准曲线制作工序、蜂胶样液制备工序和氯霉素残留量检测工序；所述标准溶液制备工序如下：ａ、氯霉素贮备标准溶液配制步骤：称取氯霉素标准品１０ｍｇ用乙腈定容至１０ｍｌ配成浓度为１０００ｍｇ／Ｌ的氯霉素贮备标准溶液，将该氯霉素贮备标准溶液置于－１８℃以下保存待用；ｂ、氯霉素中间标准液配制步骤：取ａ中的氯霉素贮备标准溶液１００μｌ用乙腈定容至１０ｍｌ配成浓度为１０ｍｇ／Ｌ的氯霉素中间标准液；ｃ、氯霉素氘代内标中间液配制步骤：采用Ｄ５－氯霉素标准品代替氯霉素标准品，重复上述ａ步骤和ｂ步骤，制得浓度为１０ｍｇ／Ｌ的氯霉素氘代内标中间液；ｄ、临时标准使用液配制步骤：取氯霉素中间标准液用体积浓度为３０％的乙腈水溶液配至５μｇ／ｋｇ和５０μｇ／ｋｇ，取氯霉素氘代内标中间液用体积浓度为３...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周萍，钱志来，陈建清，毛增亮，
申请(专利权)人：杭州蜂之语蜂业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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