一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法，通过用乙酸－乙腈－水溶液超声提取奶油饼干中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间，通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。从而建立了一种测定奶油饼干中三聚氰胺简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法，广泛应用于奶油饼干为代表的食品中三聚氰胺的检测技术领域。

【技术实现步骤摘要】
专利说明 专利
本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是涉及领域。
技术介绍
三聚氰胺(Melamine，MEL)，学名1，3，5-三氨基-2，4，6-三嗪(1，3，5-Triamine-2，4，6-Triazine)，分子式C3N3(NH2)3，分子量126.12。简称三胺、又称2，4，6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺等，白色结晶粉末，无味，是一种三嗪类含氮杂环化合物，重要的有机化工原料，广泛用于塑料、涂料、粘合剂、食品包装材料、消毒剂、化肥和杀虫剂的生产。三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂(MF)的原料。由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被人称为“蛋白精”。资料表明，三聚氰胺可能从环境、食品包装材料等途径进入到食品中，其含量很低。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加到食品中。 蛋白质主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30％，而三聚氰胺的分子式含氮量为66.7％左右。通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过测出含氮量来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。但是食用添加了三聚氰胺的食品，会导致中毒和肾结石。2007年，美国报道了宠物猫、狗因食入含三聚氰胺饲料而死亡的事件，事后调查表明掺杂了6.6％三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因。随后美国食品药品管理局(FDA)制订了相应的检验方法。2008年9月11日，有关部门披露，某些奶粉中含有三聚氰胺，导致了一些婴幼儿因食用含三聚氰胺奶粉而出现肾结石症状，少数婴幼儿抢救无效而死亡。随后在一些液体奶、乳制品及含乳食品中也检出三聚氰胺，给整个食品行业带来巨大的冲击，社会影响极坏。在检出三聚氰胺的产品中，石家庄三鹿牌婴幼儿配方奶粉三聚氰胺含量很高，其中最高的达2563mg/kg。2008年10月，国家有关部门参考美国食品药品管理局(FDA)和美国食品化学品法典(FCC)三聚氰胺检测方法，制定了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》国家标准(GB/T223888-2008)。2008年10月7日，卫生部等5部门公布了乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值，含乳15％以上的食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。 测定三聚氰胺的方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)。HPLC的灵敏度较低且无法提供结构信息，一般常作为筛选方法；GC-MS、HPLC-MS/MS能够进行确证分析。GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》规定了原料乳与乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即HPLC法、GC-MS法、HPLC-MS/MS法。上述方法均是测定原料乳与乳制品、饲料、宠物食品、植物源性蛋白质等中的三聚氰胺，测定奶油饼干中三聚氰胺的方法未见公开报道。 目前公开报道检测食品中的三聚氰胺主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法，但是现有三聚氰胺的检测方法样品前处理繁琐，需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次检测样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的检测，不能高通量的检测样品中三聚氰胺。因此，探索和研究简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的检测食品中三聚氰胺的方法，对于维护食品安全，保护人民的身体健康和消费者的合法权益，促进食品行业的快速发展均具有重要意义。
技术实现思路
针对目前未见公开报道测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，现有三聚氰胺的检测方法样品前处理繁琐，需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次检测样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的检测，不能高通量的检测样品中三聚氰胺的缺陷。 本专利技术的目的在于提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法。 本专利技术具体提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的确证和定量方法。 本专利技术的技术方案通过建立了GC-MS法测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，用乙酸-乙腈-水溶液超声提取奶油饼干中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间，通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。从而建立了一种测定奶油饼干中三聚氰胺简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法。 本专利技术具体提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的方法步骤如下 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取10-30min，4500r/min离心5-10min，过滤后经固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化，3-5mL水平衡，准确移取4-6mL滤液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L盐酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3-5mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在45-75℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应2-8min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。 本领域所熟知，三聚氰胺微溶于水(3.1g/L，20℃)、乙醇、弱酸和弱碱等，可溶于甲醇、吡啶、二甲基亚砜，水溶液呈弱碱性。三聚氰胺属于极性化合物、碱性化合物，因此提取溶剂一般都选用稀酸溶液、有机溶剂和水的混合溶液、极性较强的有机溶剂或缓冲溶液。本专利技术选择乙酸-乙腈-水溶液为提取溶剂，加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率，加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白，减少干扰，采用的乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀奶油饼干样品中的蛋白质和部分脂肪，过滤迅速，滤液澄清。 本专利技术通过对选择离子监测模式(SIM)离子选择的优化，有效消除复杂基体干扰三聚氰胺的特征离子为99、171、197、285、327、342，GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中GC-MS法使用的特征离子为99、171、327、342。经对奶油饼干加标样品的分析，样品基质中含有99、171离子碎片，对定量测定干扰大，本专利技术最终选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342离子组合来定量和确证。 本领域熟知，衍生化反应一般为70℃下加热45min，本专利技术经过反复试验确定采用在微波高档800W条件下，衍生化5min，进一步缩短了反应时间。 通过实施本专利技术技术方案，实现本
技术实现思路
，可以达到以下有益效果 1.高回收率本专利技术中采用乙酸-乙腈-水溶液提取奶油饼干样品中的三聚氰胺，使得三聚氰胺以正离子态被吸附在阳离子交换柱上，用0.1mol/L盐酸代替水来淋洗，既可以使三聚氰胺保持正离子态被吸附在阳离子交换柱上，又可以有效除去样品中的水溶性杂质、无机盐和非离子化的脂溶性杂质，可减少进样口和离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，奶油饼干经前处理后，气相色谱－质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，其特征在于，所述的前处理步骤如下：　称取１．００克奶油饼干样品于１５ｍＬ具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入１０ｍＬ乙酸－乙腈－水溶 液振摇，乙酸－乙腈－水溶液按照体积比１∶７０∶２９配制，超声提取１０－３０ｍｉｎ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心５－１０ｍｉｎ，过滤后经固相萃取柱依次用３－５ｍＬ的甲醇活化，３－５ｍＬ水平衡，准确移取４－６ｍＬ滤液上柱，依次用３－５ｍＬ的０．１－０．３ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，３－５ｍＬ的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用３－５ｍＬ５％氨水甲醇洗脱，用５ｍＬ刻度试管收集洗脱液，在４５－７５℃氮吹浓缩至干后，加入２００μＬ吡啶和２００μＬ衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，经微波加热衍生化反应后转移至样品瓶中，供气相色谱－质谱测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋格，田延河，杨忠，姚伟琴，李世雨，苏敏，窦辉，朱慧萍，胡建民，
申请(专利权)人：新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]