一种快速检测乳粉中三聚氰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测乳粉中三聚氰胺的方法，通过用乙酸－乙腈－水溶液超声提取乳粉中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间，通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。从而建立了一种测定乳粉中三聚氰胺简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法，广泛应用于乳粉为代表的食品中三聚氰胺的检测技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法， 特别是涉及领域。
技术介绍
三聚氰胺(Me/aw/we ， MEL ), 学名 1,3,5-三氨基-2,4,6-三口秦 (1,3,5-7H(3脂'"e-2,4,6-7H"d打e)，分子式C3N3(NH2)3，分子量126. 12。简称三胺、 又称2,4,6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺等，白色结晶粉末，无 味，是一种三溱类含氮杂环化合物，重要的有机化工原料，广泛用于塑料、涂 料、粘合剂、食品包装材料、消毒剂、化肥和杀虫剂的生产。三聚氰胺最主要 的用途是作为生产三聚氰胺曱醛树脂(MF)的原料。由于食品和祠料工业蛋白质 含量测试方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂，以提升食品 检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被人称为"蛋白精"。资料表明, 三聚氰胺可能从环境、食品包装材料等途径进入到食品中，其含量很低。三聚 氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加到食品中。蛋白质主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30%,而三聚氰胺的分子 式含氮量为66.7%左右。通用的蛋白质测试方法"凯氏定氮法"是通过测出含 氮量来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏 高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。但是食用添加了三聚氰胺的食 品，会导致中毒和肾结石。2007年，美国报道了宠物猫、狗因食入含三聚氰胺 饲料而死亡的事件，事后调查表明掺杂了 6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物 食品导致中毒的原因。随后美国食品药品管理局(FDA)制订了相应的检验方法。 2008年9月11日，有关部门披露，某些奶粉中含有三聚氰胺，导致了一些婴幼儿因食用含三聚氰胺奶粉而出现肾结石症状，少数婴幼儿抢救无效而死亡。随 后在一些液体奶、乳制品及含乳食品中也检出三聚氰胺，给整个食品行业带来 巨大的冲击，社会影响极坏。在检出三聚氰胺的产品中，石家庄三鹿牌婴幼儿配方奶粉三聚氰胺含量很高，其中最高的达2563mg/kg。 2008年10月，国家有 关部门参考美国食品药品管理局(FDA)和美国食品化学品法典(FCC)三聚氰胺检 测方法，制定了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》国家标准(GB/ T223888-2008) 。 2008年10月7日，卫生部等5部门乂>布了乳制品及含乳食品 中三聚氰胺临时管理限量值，公告规定 一、婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限 量值为lmg/kg,高于lmgZkg的产品一律不得销售。二、液态奶(包括原料乳)、 奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg,高于2.5mg/kg的产品一 律不得销售。三、含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg， 高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。测定三聚氰胺的方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS) 和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)。 HPLC的灵敏度较低且无法提供结构 信息， 一般常作为筛选方法；GC-MS、 HPLC-MS/MS能够进行确证分析。 GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》规定了原料乳与乳制 品中三聚氰胺的三种测定方法，即HPLC法、GC-MS法、HPLC-MS/MS法。GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺;^测方法》中气相色谱-质谱 法(GC-MS)法样品前处理繁瑣、需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次4全测 样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的检测，不能高通量的 检测样品中三聚氰胺。因此，探索和研究简便、快速，灵敏、准确、低成本、耐 用的检测食品中三聚氰胺的方法，对于维护食品安全，保护人民的身体健康和 消费者的合法权益，促进食品行业的快速发展均具有重要意义。
技术实现思路
针对GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中气相色谱 -质谱法(GC-MS)法样品前处理繁琐、需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次4企测样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的外企测，不能高 通量的检测乳粉中三聚氰胺的缺陷。本专利技术的目的在于提供了一种测定乳粉中三聚氰胺的简便、快速，灵敏、 准确、^氐成本、耐用的确i正和定量方法。本专利技术具体提供了 一种测定乳粉中三聚氰胺的确证和定量方法。本专利技术的技术方案通过建立了 GC-MS法测定乳粉中三聚氰胺的方法，用 乙酸-乙腈-水溶液超声提取乳粉中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型 阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间， 通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力， 降低检测限和提高定量重现性。从而建立了 一种测定奶油饼干中三聚氰胺简便、 快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确i正和定量方法。本专利技术具体提供了 一种测定乳粉中三聚氰胺的方法步骤如下称取0.50克乳粉样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙 酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1: 70: 29配制，超声提取 10-30min, 4500r/min离心5-10min，过滤后经固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇 活化，3-5mL水平衡，准确移取4-6mL滤液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L 盐酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3-5mL5。/。氨水甲醇洗 脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在45-75°C氮吹浓缩至干后，加入200 |a L吡 啶和200 jaL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应 2-8min，冷却，转移至L5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。本领域所熟知，三聚氰胺微溶于水(3.1g/L， 2(TC)、乙醇、弱酸和弱碱等， 可溶于甲醇、吡啶、二甲基亚砜，水溶液呈弱碱性。三聚氰胺属于极性化合物、 碱性化合物，因此提取溶剂一般都选用稀酸溶液、有机溶剂和水的混合溶液、 极性较强的有机溶剂或援冲溶液。本专利技术选择乙酸-乙腈-水溶液为提取溶剂， 加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率，加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白，减少 干扰，本专利技术采用的乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀牛奶样品中的蛋白质和部分脂肪，过滤迅速，滤液澄清。本专利技术通过对选择离子监测模式(SIM)离子选择的优化，有效消除复杂基体千扰三聚氰胺的特征离子为99、 171、 197、 285、 327、 342, GB/T22388-2008 《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中GC-MS法使用的特征离子为99、 171、 327、 342。经对乳粉加标样品的分析，样品基质中含有99、 171离子碎片， 对定量测定干扰大，本专利技术最终选定三聚氰胺的特征离子为197、 285、 327、 342， 采用上述离子组合来定量和确证。本领域熟知，衍生化反应一般为7(TC下加热45min,本专利技术经过反复试验 确定采用在樣t波高档800W条件下，衍生化5min,大大缩短了反应时间。通过实施本专利技术具体的技术指标，实现本
技术实现思路
，可以达到以下有益效果。1. 高回收率本专利技术中采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺， 使得三聚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定乳粉中三聚氰胺的方法，乳粉经前处理后，气相色谱－质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，其特征在于，所述的前处理步骤如下：　称取０．５０克乳粉样品于１５ｍＬ具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入１０ｍＬ乙酸－乙腈－水溶液振摇，乙酸 －乙腈－水溶液按照体积比１∶７０∶２９配制，超声提取１０－３０ｍｉｎ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心５－１０ｍｉｎ，过滤后经固相萃取柱依次用３－５ｍＬ的甲醇活化，３－５ｍＬ水平衡，准确移取４－６ｍＬ滤液上柱，依次用３－５ｍＬ的０．１－０．３ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，３－５ｍＬ的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用３－５ｍＬ５％氨水甲醇洗脱，用５ｍＬ刻度试管收集洗脱液，在４５－７５℃氮吹浓缩至干后，加入２００μＬ吡啶和２００μＬ衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，经微波加热衍生化反应后转移至样品瓶中，供气相色谱－质谱测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋格，姚伟琴，窦辉，朱慧萍，胡建民，李炎，李欣，王昭妮，
申请(专利权)人：新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]