动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法和应用。将样品直接绞碎均质后加水匀浆，采用乙酸乙酯为提取溶剂，经正己烷脱脂净化后，用液相色谱‑串联质谱仪检测，外标法定量。本发明专利技术首次提供了一种动物源性食品中得曲恩特残留检测的标准方法，也填补了本领域技术空白。本发明专利技术回归方程相关系数达到0.99以上，测定低限为0.3 µg/kg，在0.3 µg/kg～3 µg/kg添加浓度水平上的回收率为80%～120%，实验室内相对标准偏差≤20%。本发明专利技术方法操作简便，灵敏度高，抗干扰能力强，定性定量科学准确，能够为我国相关监管部门制定得曲恩特最高残留限量提供技术支持。

Determination of residual method and application of curved ente animal derived materials

The invention discloses a determination method and application of curved ente residue was an animal derived materials. The sample was directly minced homogeneous water homogenate, using ethyl acetate as extracting solvent by n-hexane after purification by liquid chromatography tandem mass spectrometry detection, external standard method. The present invention provides the first standard method for detecting residues of a curved point in food of animal origin, also fill the technology gaps in this field. The regression equation of the correlation coefficient was above 0.99. The determination limit was 0.3 g/kg in 0.3, g/kg ~ 3 g/kg concentration on recovery rate is 80% ~ 120%, the relative standard deviation is less than 20% in the laboratory. The method of the invention has the advantages of simple operation, high sensitivity, strong anti-interference ability, scientific and accurate qualitative and quantitative, can maximum residue limits to provide technical support for the relevant regulatory authorities in China made music ente.

【技术实现步骤摘要】
动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法和应用
本专利技术涉及兽药残留的检测
，更具体地，涉及一种动物源性材料尤其是羊肉、羊肝或羊肾中得曲恩特残留的测定方法和应用。
技术介绍
动物源性食品中兽药的残留直接影响人体的健康。得曲恩特(Derquantel)，别名2-Deoxoparaherquamide，分子式为C28H37N3O4，分子量为分子量为479.61100，其结构式如式(Ⅰ)所示：得曲恩特(Derquantel)是一种新型高效的家畜用驱肠线虫药，目前仅用于绵羊。新西兰食品安全局(NZFSA)2010年对新西兰食品中农药化合物最大残留限量标准进行修改。新标准规定绵羊肥/瘦肉及内脏内的得曲恩特(Derquantel)的最高残留限量MRL：0.1mg/kg；我国食品法典委员会(CAC)2015年增加了该药的最高残留限量MRL：羊肉0.3μg/kg，羊肝0.8μg/kg，羊肾0.4μg/kg。目前尚未有动物源性食品中得曲恩特残留量检测的标准方法，也未见任何相关检测方法的文献报道。得曲恩特检测方法的缺乏，难以为我国相关监管部门制定得曲恩特最高残留限量提供技术支持。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于针对得曲恩特残留检测的技术不足，提供一种动物源性材料或食品中得曲恩特残留量的测定方法。本专利技术要解决的另一技术问题是提供所述检测方法的应用，尤其是在羊肉、羊肝和/或羊肾食品中得曲恩特残留量测定方面的应用。本专利技术目的通过以下技术方案予以实现：提供一种动物源性材料或食品中得曲恩特残留量的测定方法，是将动物源性材料直接绞碎至匀浆和均质得到待测样品，采用乙酸乙酯为提取溶剂提取待测样品，经正己烷脱脂净化后，用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量；所述液相色谱-串联质谱仪测定条件为：液相色谱条件为：色谱柱：AtlantisT3(4.6mm×100mm，粒径3μm)，或相当者；流动相：乙腈-5mM甲酸水溶液(45+55，体积比)；流速：0.35mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；喷雾电压IS：5000V；CUR：35；CAD：medium；辅助加热气温度：550℃；GS1：65；GS2：70；去集簇电压DP：180V；入口电压EP：10V；碰撞池出口电压CXP：10V；驻留时间：0.1s；定性离子对和碰撞能量：480.3>405.3，碰撞能量40V；480.3>148.2，碰撞能量50V；定量离子对：480.3>405.3。优选地，所述加水匀浆处理的条件为12000r/min下匀浆处理30s；加水的量按照动物源性材料与水的质量体积比为5±0.05g：10mL确定。优选地，所述采用乙酸乙酯提取是提取两次，合并两次提取液并定容，取上清液于玻璃试管中40℃氮吹浓缩至干；所述定容采用的定容液是乙腈与5mM甲酸水溶液按照体积比1:1混匀所得。优选地，所述乙酸乙酯提取的第一次提取是水平振荡提取15min，离心处理；所述乙酸乙酯提取的第二次提取是水平振荡提取10min，离心处理；所述的离心处理是在4000r/min条件下离心处理5min。优选地，所述正己烷脱脂净化是将乙酸乙酯提取所得液体经漩涡处理后静置分层，弃正己烷层；再加正己烷，重复脱脂一次。本专利技术检测方法具体步骤如下：S1.样品预处理：S11.取动物源性可食性组织，绞碎，并均质，分别得到供试试料、空白试料和空白添加试料；将所得供试试料、空白试料和空白添加试料进行检测或于-18℃以下保存备用；所述供试试料、空白试料和空白添加试料的制备方法分别为具体是取动物源性可食性组织，绞碎，并均质；取均质后的供试样品，作为供试试料；取均质后的空白样品，作为空白试料；取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。S12.提取：称取试料加水后匀浆处理得匀浆试料；取乙酸乙酯洗涤匀浆用刀头，洗涤液与匀浆试料合并，第一次提取后离心处理，取乙酸乙酯层于比色管中，残渣加乙酸乙酯再提取一次，合并两次提取液并定容，取上清液于玻璃试管中40℃氮吹浓缩至干。S13.净化：往步骤S12吹干的玻璃试管中加入定容液，溶解待测化合物，第一次旋涡处理，加溶剂脱脂处理，第二次旋涡处理，取脱脂处理后的下层溶液离心处理，滤膜过滤，得到待测试液，进行液相色谱-串联质谱测定。步骤S12中，试料与水的质量体积比为5±0.05g：10mL。步骤S12中，所述匀浆处理的条件为12000r/min下匀浆处理30s。步骤S12中，所述第一次提取是水平振荡提取15min。所述的离心处理是在4000r/min条件下离心处理5min。步骤S13中，所述的定容液的制备方法为取50mL乙腈和50mL5mM甲酸水溶液，充分混匀，备用。步骤S13中，所述第一次旋涡处理的时间为2min，所述第二次旋涡处理的时间为1min。步骤S13中，所述溶剂为正己烷，所述脱脂处理是第一次加正己烷，旋涡处理，静置分层，弃正己烷层，再加正己烷，重复脱脂一次。步骤S13中，所述离心处理是在12000r/min下离心处理5min。S2.进行液相色谱-串联质谱测定：S21.标准曲线的制备精密量取100ng/mL得曲恩特标准工作液适量，用定容液稀释，配制成得曲恩特浓度为0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0μg/L的系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以得曲恩特的特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数；S22.液相色谱-串联质谱仪测定条件：其中，液相色谱条件为：色谱柱：AtlantisT3(4.6mm×100mm，粒径3μm)，或相当者；流动相：乙腈－5mM甲酸水溶液(45+55，体积比)；流速：0.35mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；喷雾电压IS：5000V；CUR：35；CAD：medium；辅助加热气温度：550℃；GS1：65；GS2：70；去集簇电压DP：180V；入口电压EP：10V；碰撞池出口电压CXP：10V；驻留时间：0.1s；定性离子对和碰撞能量：480.3>405.3，碰撞能量40V；480.3>148.2，碰撞能量50V；定量离子对：480.3>405.3。本专利技术同时提供所述检测方法的应用，应用于动物源性材料的得曲恩特残留检测，包括定性检测或定量检测。所述定性检测方法为：通过试料色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液色谱峰的特征离子相对照定性。试料与标准品保留时间的相对偏差不大于5％；试料特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过规定值，则可判断试样中存在相应的被测物。所述定量检测方法为：取试料溶液和标准溶液，按外标法以峰面积计算。标准溶液及试料溶液中的得曲恩特的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准曲线校准：由As＝a×cs+b求得a和b，则试料中得曲恩特残留量按式(Ⅱ)计算：式中：As————标准溶液中得曲恩特的峰面积；cs————标准溶液中得曲恩特的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；c—本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，是将动物源性材料直接绞碎均质后加水匀浆处理后采用乙酸乙酯提取，提取液经正己烷脱脂净化后得到待测试液，用液相色谱‑串联质谱仪定性或定量检测待测试液，所述定量检测采用外标法；所述液相色谱‑串联质谱仪测定条件为：液相色谱条件为：色谱柱：Atlantis T3；流动相：乙腈‑5mM甲酸水溶液（45+55，体积比）；流速：0.35 mL/min；柱温：40℃；进样量：5 µL；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；喷雾电压IS：5000 V；CUR：35；CAD：medium；辅助加热气温度：550℃；GS1：65；GS2：70；去集簇电压DP：180 V；入口电压EP：10 V；碰撞池出口电压CXP：10 V；驻留时间：0.1 s；定性离子对和碰撞能量：480.3>405.3，碰撞能量40 V；480.3>148.2，碰撞能量50 V；定量离子对：480.3>405.3。

【技术特征摘要】
1.一种动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，是将动物源性材料直接绞碎均质后加水匀浆处理后采用乙酸乙酯提取，提取液经正己烷脱脂净化后得到待测试液，用液相色谱-串联质谱仪定性或定量检测待测试液，所述定量检测采用外标法；所述液相色谱-串联质谱仪测定条件为：液相色谱条件为：色谱柱：AtlantisT3；流动相：乙腈-5mM甲酸水溶液（45+55，体积比）；流速：0.35mL/min；柱温：40℃；进样量：5µL；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；喷雾电压IS：5000V；CUR：35；CAD：medium；辅助加热气温度：550℃；GS1：65；GS2：70；去集簇电压DP：180V；入口电压EP：10V；碰撞池出口电压CXP：10V；驻留时间：0.1s；定性离子对和碰撞能量：480.3>405.3，碰撞能量40V；480.3>148.2，碰撞能量50V；定量离子对：480.3>405.3。2.根据权利要求1所述动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，所述加水匀浆处理的条件为12000r/min下匀浆处理30s；加水的量按照动物源性材料与水的质量体积比为5±0.05g：10mL确定。3.根据权利要求1所述动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，所述采用乙酸乙酯提取是提取两次，合并两次提取液并定容，取上清液于玻璃试管中40℃氮吹浓缩至干；所述定容采用的定容液是乙腈与5mM甲酸水溶液按照体积比1:1混匀所得。4.根据权利要求3所述动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，所述乙酸乙酯提取的第一次提取是水平振荡提取15min，离心处理；所述乙酸乙酯提取的第二次提取是水平振荡提取10min，离心处理；所述的离心处理是在4000r/min条件下离心处理5min。5.根据权利要求1所述动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，所述正己烷脱脂净化是将乙酸乙酯提取所得液体经漩涡处理后静置分层，弃正己烷层；再加正己烷，重复脱脂一次。6.根据权利要求1至5任一项所述动物源性材料中得曲恩特残留的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.样品预处理；S11.取动物源性可食性组织，绞碎，并均质，取均质后的供试样品，作为供试试料；取均质后的空白样品，作为空白试料；取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料；将所得供试试料、空白试料和空白添加试料进行检测或于-18℃以下保存备用；S12.提取：称取试料加水后匀浆处理得匀浆试料；取乙酸乙酯洗涤匀浆用刀头，洗涤液与匀浆试料合并，第一次提取后离心处理，取乙酸乙酯...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵琳智，吴映璇，欧阳少伦，林峰，谢敏玲，邹游，姚仰勋，陈思敏，蓝草，
申请(专利权)人：广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44