一种结核杆菌ＥＳＡＴ－６重组二聚体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属生物工程和诊断医学领域。具体涉及一种结核杆菌ＥＳＡＴ－６重组二聚体及其制备方法、抗原性分析及其在结核病血清学诊断中的应用。本发明专利技术以含有两个ｅｓａｔ－６拷贝的嵌合基因核酸疫苗ＨＧ８５６Ａ质粒ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增获得了２×ｅｓａｔ－６基因片段，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中克隆、表达并纯化了ＥＳＡＴ－６重组二聚体蛋白。该蛋白在２个ＥＳＡＴ－６单体之间通过ＡｃｃＩ酶切位点ＧＴＣ?ＴＡＣ编码的氨基酸Ｔｙｒ、Ｖａｌ连接，Ｎ端携带有６×Ｈｉｓ标签，可通过镍螯合亲和层析进行纯化。实验证实纯化的重组二聚体具有良好的反应原性和抗原特异性。可作为抗原用于结核病的早期诊断，包括ＥＬＩＳＡ或ＥＬＩＳＰＯＴ等血清学诊断或者作为皮肤试验用抗原。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种结核杆菌ＥＳＡＴ－６重组二聚体，其特征是通过下述方法制备：以含有两个ｅｓａｔ－６拷贝的嵌合基因核酸疫苗ＨＧ８５６Ａ质粒ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增获得２×ｅｓａｔ－６基因片段，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中克隆、表达并纯化制得ＥＳＡＴ－６重组二聚体蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：范小勇，郭建，卢水华，吴文娟，
申请(专利权)人：上海市公共卫生临床中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]