工程化抗HER2双特异性蛋白制造技术

在一方面，提供了具有特异性结合至人HER2的亚结构域II和人HER2的亚结构域IV的能力的双特异性蛋白。在另一方面，提供了使用特异性结合至人HER2的亚结构域II和亚结构域IV的双特异性蛋白治疗癌症或治疗癌症脑转移的方法。特异性蛋白治疗癌症或治疗癌症脑转移的方法。特异性蛋白治疗癌症或治疗癌症脑转移的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化抗HER2双特异性蛋白
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年2月19日提交的美国临时申请号62/978,758的优先权，所述临时申请的公开内容出于所有目的特此以引用的方式整体并入。

技术介绍

[0003]目前，治疗诸如乳腺癌等癌症的脑转移展现令人生畏的临床挑战。在乳腺癌患者中，脑转移的发生率高达50％。临床数据表明HER2阳性乳腺癌有转移至脑中的倾向。值得注意的是，抗HER2疗法已被证明可用于控制颅外肿瘤，但不能用于控制颅内病变。这些疗法未能控制转移性病变，诸如HER2阳性乳腺癌的脑转移，主要归因于治疗剂无法穿过血脑屏障(BBB)并进入脑实质。

技术实现思路

[0004]在一方面，本公开提供了一种蛋白质，其包含：
[0005](a)第一Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分；
[0006](b)第二Fc多肽，其在N端融合至单链可变片段(scFv)，其中所述第一Fc多肽和第二Fc多肽形成Fc二聚体；以及
[0007](c)轻链多肽，其与(a)中所述的Fd部分配对以形成Fab，
[0008]其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV，或者其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。在一些实施方案中，Fab结合至人HER2的亚结构域II并且scFv结合至人HER2的亚结构域IV。在其他实施方案中，Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且scFv结合至人HER2的亚结构域II。
[0009]在此蛋白质的一些实施方案中，第二Fc多肽通过第一接头融合至scFv。第一接头的长度可以为1至20个氨基酸，例如GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118)。
[0010]在此蛋白质的一些实施方案中，scFv包含通过第二接头连接的V
L
区和V
H
区。第二接头的长度可以为1至20个氨基酸，例如，以下序列中的任一种：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS(SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:120；(G4S)2
‑
G4)、GGGGSGGGGSGG(SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:122)和GGGGGSGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123)。
[0011]在此蛋白质的一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽特异性结合至转铁蛋白受体(例如，含有本文所述的产生TfR结合位点的序列修饰中的任一种)。在一些实施方案中，第一Fc多肽和第二Fc多肽各自包含促进异二聚化的修饰。在某些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽包含T366W取代，并且第二Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代。在其他实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代，并且第二Fc多肽包含T366W取代。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽独立地包含降低效应子功能
的修饰。在某些实施方案中，根据EU编号，降低效应子功能的修饰是L234A和L235A取代。
[0012]在此蛋白质的一些实施方案中，铰链区或其一部分连接至第一Fc多肽和/或第二Fc多肽的N端。
[0013]在此蛋白质的一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽独立地包含与选自由SEQ ID NO:131
‑
149组成的组的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列。在特定实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽独立地包含与选自SEQ ID NO:135
‑
139的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列。
[0014]在此蛋白质的一些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽独立地包含在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与选自SEQ ID NO:135
‑
139的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列。
[0015]在此蛋白质的一些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽包含在位置234处的Ala、在位置235处的Ala、在位置366处的Trp、在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与SEQ ID NO:137的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列，并且根据EU编号，第二Fc多肽包含在位置366处的Ser、在位置368处的Ala和在位置407处的Val，以及与SEQ ID NO:133的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列。
[0016]在此蛋白质的其他实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽包含在位置366处的Ser、在位置368处的Ala和在位置407处的Val，以及与SEQ ID NO:133的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列，并且根据EU编号，第二Fc多肽包含在位置234处的Ala、在位置235处的Ala、在位置366处的Trp、在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与SEQ ID NO:137的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列。
[0017]在此蛋白质的一些实施方案中，
[0018](i)(a)包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:21的序列具有至少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种蛋白质，其包含：(a)第一Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分；(b)第二Fc多肽，其在N端融合至单链可变片段(scFv)，其中所述第一Fc多肽和第二Fc多肽形成Fc二聚体；以及(c)轻链多肽，其与(a)中所述的Fd部分配对以形成Fab，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV，或者其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。2.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV。3.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。4.如权利要求1至3中任一项所述的蛋白质，其中所述第二Fc多肽通过第一接头融合至所述scFv。5.如权利要求4所述的蛋白质，其中所述第一接头的长度为1至20个氨基酸。6.如权利要求4或5所述的蛋白质，其中所述第一接头包含序列GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118)。7.如权利要求1至6中任一项所述的蛋白质，其中所述scFv包含通过第二接头连接的V
L
区和V
H
区。8.如权利要求7所述的蛋白质，其中所述第二接头的长度为1至20个氨基酸。9.如权利要求7或8所述的蛋白质，其中所述第二接头包含以下序列中的任一种：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS(SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:120；(G4S)2‑
G4)、GGGGSGGGGSGG(SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:122)和GGGGGSGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123)。10.如权利要求1至9中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽特异性结合至转铁蛋白受体。11.如权利要求1至10中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽各自包含促进异二聚化的修饰。12.如权利要求11所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含T366W取代，并且所述第二Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代。13.如权利要求11所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代，并且所述第二Fc多肽包含T366W取代。14.如权利要求1至13中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽独立地包含降低效应子功能的修饰。15.如权利要求14所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述降低效应子功能的修饰是L234A和L235A取代。16.如权利要求1至15中任一项所述的蛋白质，其中铰链区或其一部分连接至所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽的N端。17.如权利要求1至16中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc
多肽独立地包含与选自由SEQ ID NO:131
‑
149组成的组的序列具有至少90％同一性的序列。18.如权利要求1至17中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽独立地包含与选自SEQ ID NO:135
‑
139的序列具有至少90％同一性的序列。19.如权利要求1至18中任一项所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽独立地包含在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与选自SEQ ID NO:135
‑
139的序列具有至少90％同一性的序列。20.如权利要求1至19中任一项所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含在位置234处的Ala、在位置235处的Ala、在位置366处的Trp、在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与SEQ ID NO:137的序列具有至少90％同一性的序列，并且根据EU编号，所述第二Fc多肽包含在位置366处的Ser、在位置368处的Ala和在位置407处的Val，以及与SEQ ID NO:133的序列具有至少90％同一性的序列。21.如权利要求1至19中任一项所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含在位置366处的Ser、在位置368处的Ala和在位置407处的Val，以及与SEQ ID NO:133的序列具有至少90％同一性的序列，并且根据EU编号，所述第二Fc多肽包含在位置234处的Ala、在位置235处的Ala、在位置366处的Trp、在位置384处的Tyr、在位置386处的Thr、在位置387处的Glu、在位置388处的Trp、在位置389处的Ser、在位置413处的Ser、在位置415处的Glu、在位置416处的Glu和在位置421处的Phe，以及与SEQ ID NO:137的序列具有至少90％同一性的序列。22.如权利要求1至21中任一项所述的蛋白质，其中：(i)(a)包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:21的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ii)(a)包含与SEQ ID NO:2的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:20的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iii)(a)包含与SEQ ID NO:3的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iv)(a)包含与SEQ ID NO:4的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:18的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(v)(a)包含与SEQ ID NO:6的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:15或17的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者
(vi)(a)包含与SEQ ID NO:7的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:14的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(vii)(a)包含与SEQ ID NO:8的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:13的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(viii)(a)包含与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:11或12的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ix)(a)包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:22的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(x)(a)包含与SEQ ID NO:5的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:18的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列。23.如权利要求22所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含在位置234和235处的Leu。24.如权利要求22或23所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第二Fc多肽包含在位置234和235处的Leu。25.一种蛋白质，其包含：(a)第一Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分；(b)第二Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分，其中所述第一Fc多肽和第二Fc多肽形成Fc二聚体；以及(c)两个轻链多肽，其各自与(a)和(b)中所述的每个Fd部分配对以形成Fab；其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在C端融合至scFv，或者其中(a)和/或(b)中的所述Fd部分在N端融合至scFv，或者其中所述第一Fc多肽或所述第二Fc多肽在C端融合至scFv并且(a)或(b)中的所述Fd部分在N端融合至scFv，并且其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV，或者其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。26.如权利要求25所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在C端融合至所述scFv。27.如权利要求25所述的蛋白质，其中(a)和/或(b)中的所述Fd部分在N端融合至所述scFv。28.如权利要求25所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽或所述第二Fc多肽在C端融合至所述scFv，并且(a)或(b)中的所述Fd部分在N端融合至所述scFv。29.如权利要求25至28中任一项所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV。30.如权利要求25至28中任一项所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域
IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。31.如权利要求25至30中任一项所述的蛋白质，其中融合至所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽的所述scFv包含相同的序列。32.如权利要求25至30中任一项所述的蛋白质，其中融合至(a)和/或(b)中的所述Fd部分的所述scFv包含相同的序列。33.如权利要求25至32中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽通过第一接头融合至所述scFv。34.如权利要求25至33中任一项所述的蛋白质，其中(a)和/或(b)中的所述Fd部分通过第一接头融合至所述scFv。35.如权利要求33或34所述的蛋白质，其中所述第一接头的长度为1至20个氨基酸。36.如权利要求33至35中任一项所述的蛋白质，其中所述第一接头包含以下序列中的任一种：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS(SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:120；(G4S)2‑
G4)、GGGGSGGGGSGG(SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:122)和GGGGGSGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123)。37.如权利要求25至36中任一项所述的蛋白质，其中所述scFv包含通过第二接头连接的V
L
区和V
H
区。38.如权利要求37所述的蛋白质，其中所述第二接头的长度为1至20个氨基酸。39.如权利要求37或38所述的蛋白质，其中所述第二接头包含以下序列中的任一种：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS(SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:120；(G4S)2‑
G4)、GGGGSGGGGSGG(SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:122)和GGGGGSGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123)。40.如权利要求25至39中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽特异性结合至转铁蛋白受体。41.如权利要求25至40中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽各自包含促进异二聚化的修饰。42.如权利要求41所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含T366W取代，并且所述第二Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代。43.如权利要求41所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含T366S、L368A和Y407V取代，并且所述第二Fc多肽包含T366W取代。44.如权利要求25至43中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽独立地包含降低效应子功能的修饰。45.如权利要求44所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述降低效应子功能的修饰是L234A和L235A取代。46.如权利要求25至45中任一项所述的蛋白质，其中铰链区或其一部分连接至所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽的N端。47.如权利要求25至46中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽独立地包含与选自由SEQ ID NO:131
‑
149组成的组的序列具有至少90％同一性的序
NO:8的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(vii)(a)包含与SEQ ID NO:36的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:7的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(viii)(a)包含与SEQ ID NO:37或39的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:6的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ix)(a)包含与SEQ ID NO:37的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:6的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(x)(a)包含与SEQ ID NO:157的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:6的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列。53.如权利要求25至51中任一项所述的蛋白质，其中：(i)(a)包含与SEQ ID NO:27或28的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:31的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ii)(a)包含与SEQ ID NO:29的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:30的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iii)(a)包含与SEQ ID NO:33或34的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:37或39的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iv)(a)包含与SEQ ID NO:35的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:36的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(v)(a)包含与SEQ ID NO:33的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:38的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列。54.如权利要求25至51中任一项所述的蛋白质，其中：(i)(a)包含与SEQ ID NO:40的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:4的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ii)(a)包含与SEQ ID NO:41的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:3的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iii)(a)包含与SEQ ID NO:42的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:2的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含
NO:50的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(vi)(a)包含与SEQ ID NO:46的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:156的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列。56.如权利要求25至51中任一项所述的蛋白质，其中所述第一Fc多肽或所述第二Fc多肽在C端融合至所述scFv，并且(a)或(b)中的所述Fd部分在N端融合至所述scFv，并且其中：(i)(a)包含与SEQ ID NO:40的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:31的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(ii)(a)包含与SEQ ID NO:41的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:30的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iii)(a)包含与SEQ ID NO:42的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:29的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(iv)(a)包含与SEQ ID NO:43的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:27或28的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:25的序列具有至少90％同一性的序列；或者(v)(a)包含与SEQ ID NO:45的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:37或39的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(vi)(a)包含与SEQ ID NO:47的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:36的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(vii)(a)包含与SEQ ID NO:48的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:35的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列；或者(viii)(a)包含与SEQ ID NO:49的序列具有至少90％同一性的序列，(b)包含与SEQ ID NO:33或34的序列具有至少90％同一性的序列，并且(c)中的所述两个轻链多肽中的每一个包含与SEQ ID NO:26的序列具有至少90％同一性的序列。57.如权利要求52至56中任一项所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽包含在位置234和235处的Leu。58.如权利要求52至57中任一项所述的蛋白质，其中根据EU编号，所述第二Fc多肽包含在位置234和235处的Leu。59.一种蛋白质，其包含：(a)第一Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分；(b)第二Fc多肽，其在N端融合至Fab的Fd部分，其中所述第一Fc多肽和第二Fc多肽形成Fc二聚体；以及
(c)两个轻链多肽，其各自与(a)和(b)中所述的每个Fd部分配对以形成Fab；其中一个或两个所述轻链多肽在N端融合至scFv，或者其中一个或两个所述轻链多肽在C端融合至scFv，或者其中第一轻链多肽在N端融合至scFv，并且第二轻链多肽在C端融合至scFv，并且其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV，或者其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。60.如权利要求59所述的蛋白质，其中一个或两个所述轻链多肽在N端融合至所述scFv。61.如权利要求59所述的蛋白质，其中一个或两个所述轻链多肽在C端融合至所述scFv。62.如权利要求59所述的蛋白质，其中第一轻链多肽在N端融合至所述scFv，并且第二轻链多肽在C端融合至所述scFv。63.如权利要求59至62中任一项所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域II并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域IV。64.如权利要求59至62中任一项所述的蛋白质，其中所述Fab结合至人HER2的亚结构域IV并且所述scFv结合至人HER2的亚结构域II。65.如权利要求59至64中任一项所述的蛋白质，其中融合至一个或两个所述轻链多肽的所述scFv包含相同的序列。66.如权利要求59至65中任一项所述的蛋白质，其中所述一个或两个轻链多肽通过第一接头融合至所述scFv。67.如权利要求66所述的蛋白质，其中所述第一接头的长度为1至20个氨基酸。68.如权利要求66或67所述的蛋白质，其中所述第一接头包含以下序列中的任一种：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS(SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:120；(G4S)2‑
G4)、GGGGSGGGGSGG(SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:122)和GGGGGSGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123)。69.如权利要求59至68中任一项所述的蛋白质，其中所述scFv包含通过第二接头连接的V
L
区和V
H
区。70.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：古纳斯卡兰，
申请(专利权)人：戴纳立制药公司，
类型：发明
国别省市：