靶向NK激活性受体的嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向NK激活性受体的新型嵌合抗原受体，其可以治疗由NK细胞病变引起的恶性肿瘤，同时也可以在通用型CAR细胞的背景下避免患者体内NK细胞对引入的治疗性CAR细胞的杀伤。本发明专利技术还涉及表达这种新型嵌合抗原受体的工程化免疫细胞、包含其的组合物及其在治疗疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
靶向NK激活性受体的嵌合抗原受体
本专利技术属于免疫治疗领域。更具体地，本专利技术涉及靶向NK激活性受体的嵌合抗原受体、表达此类嵌合抗原受体的工程化免疫细胞及其用途。
技术介绍
嵌合抗原受体(CAR)细胞疗法作为一种靶向肿瘤的新型精准靶向疗法，近年来已经证明了其在肿瘤治疗，尤其是血液肿瘤治疗方面的良好效果。它的基本原理是在免疫细胞(例如常用的T细胞、NK细胞等)中通过基因工程装载外源性的嵌合抗原受体，经过体外扩增后，再将经修饰的免疫细胞回输至人体，从而对靶向肿瘤细胞进行杀伤。嵌合抗原受体一般由抗原结合区、跨膜区和胞内信号转导区组成，通过抗原结合区与肿瘤细胞表面表达的肿瘤相关抗原(TAA)或肿瘤特异性抗原(TSA)的结合，将信号经由胞内信号转导区传递至免疫细胞内部，进而激活免疫细胞发挥其效应功能。NK细胞是一种细胞毒性淋巴细胞，能够通过多种机制杀伤靶细胞，例如释放穿孔素和颗粒酶引起细胞溶解、通过激活凋亡途径引起细胞凋亡、释放细胞因子直接作用于靶细胞、细胞介导的细胞毒性作用等，在肿瘤免疫、抗病毒感染中均起到重要的作用。NK细胞的活化状态由激活性受体和抑制性受体之间的平衡所决定。正常情况下，识别MHC-I类分子的抑制性受体在平衡中占主导地位，以阻止NK细胞对自身健康细胞的杀伤。但是，当细胞表面MHC-I类分子的表达降低或缺失，或者肿瘤细胞、病毒感染细胞等通过表面抗原与激活性受体结合，都会使活化信号超过抑制信号，进而激活NK细胞杀伤靶细胞。在通用型CAR-T细胞中，通常需要抑制或敲除MHC-I类分子，例如HLA和B2M以降低宿主对外源引入的CAR-T细胞的免疫排斥。但这种抑制或敲除会使宿主体内的NK细胞活化，导致宿主NK细胞对CAR-T细胞的杀伤，严重影响CAR-T细胞在体内的增殖和存活，进而影响CAR-T细胞的疗效。因此，需要开发一种新型的嵌合抗原受体，以解决NK细胞对治疗性CAR细胞的杀伤问题。
技术实现思路
在第一个方面，本专利技术提供了一种新型嵌合抗原受体，其包含抗原结合区、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述抗原结合区靶向NK激活性受体。在一个实施方案中，所述NK激活性受体选自NKG2家族，优选选自NKG2C、NKG2D、NKG2E、NKG2F和NKG2H，更优选是NKG2D。在一个实施方案中，所述NK激活性受体选自天然细胞毒性受体(Naturalcytotoxicityreceptors,NCR)家族，优选选自NKp30、NKp44、NKp46和NKp80，更优选选自NKp30和NKp46。在一个实施方案中，所述NK激活性受体选自KIR-S家族，优选选自KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、KIR2DS5和KIR3DS1，更优选KIR2DS4。在一个实施方案中，所述NK激活性受体选自协同受体，优选选自2B4、DNAM-1、CD2和LFA-1。在一个实施方案中，所述新型嵌合抗原受体包含第二抗原结合区，其与选自以下的肿瘤抗原结合：TSHR、CD19、CD123、CD22、BAFF-R、CD30、CD171、CS-1、CLL-1、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、GPRC5D、TnAg、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、间皮素、IL-llRa、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR-β、SSEA-4、CD20、AFP、Folate受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、CS1、CD138、NCAM、Claudin18.2、Prostase、PAP、ELF2M、EphrinB2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gploo、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、FucosylGMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、豆荚蛋白、HPVE6、E7、MAGEAl、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、前列腺特异性蛋白、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、CyclinBl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、muthsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D和它们的任意组合。优选地，所述靶标选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD123、CD138、CD171、MUC1、AFP、Folate受体α、CEA、PSCA、PSMA、Her2、EGFR、IL13Ra2、GD2、NKG2D、EGFRvIII、CS1、BCMA、间皮素和它们的任意组合。在一个实施方案中，所述抗原结合区是抗体或其功能性片段，包括但不限于免疫球蛋白分子、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、二硫键-连接的Fv(sdFv)、抗体的重链可变区(VH)或轻链可变区(VL)、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、所述抗原的天然配体或其功能性片段。在一个实施方案中，所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。优选地，跨膜结构域选自CD8α、CD4、CD28和CD278的跨膜结构域。在一个实施方案中，所述胞内信号传导结构域选自以下蛋白的信号传导结构域：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。优选地，所述胞内信号传导结构域是包含CD3ζ的信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体进一步包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含一个或多个选自以下蛋白质的胞内区：TLR1、TLR2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型嵌合抗原受体，其包含抗原结合区、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述抗原结合区靶向NK激活性受体。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型嵌合抗原受体，其包含抗原结合区、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述抗原结合区靶向NK激活性受体。


2.权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述NK激活性受体选自NKG2家族、NCR家族、KIR-S家族、2B4、DNAM-1、CD2和LFA-1。


3.权利要求2所述的嵌合抗原受体，其中所述NK激活性受体选自NKG2C、NKG2D、NKG2E、NKG2F、NKG2H、NKp30、NKp44、NKp46和NKp80。


4.权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中所述NK激活性受体选自NKG2D和NKp46。


5.权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含靶向NKG2D或NKp46的抗体，所述靶向NKG2D的抗体包含:
(i)分别如SEQIDNO：61、62和63所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：64、65和66所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
(ii)分别如SEQIDNO：67、68和69所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：70、71和72所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
(iii)分别如SEQIDNO：67、68和73所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：74、75和76所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；或
(iv)分别如SEQIDNO：77、78和79所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：80、81和82所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
所述靶向NKp46的抗体包含：
(i)分别如SEQIDNO：83、84和85所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：86、87和88所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
(ii)分别如SEQIDNO：89、90和91所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：92、93和94所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
(iii)分别如SEQIDNO：95、96和97所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：98、99和100所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
(iv)分别如SEQIDNO：101、84和102所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：103、87和104所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；或
(v)分别如SEQIDNO：105、106和107所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQIDNO：108、109和110所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。


6.权利要求5所述的嵌合抗原受体，其中所述靶向NKG2D的抗体包含与SEQIDNO：27第1-121位、SEQIDNO：29第1-109位、SEQIDNO：31第1-109位或SEQIDNO：33第1-108所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的轻链可变区序列和与SEQIDNO：27第137-246位、SEQIDNO：29第122-243位、SEQIDNO：31第122-236位或SEQIDNO：33第121-243位所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的重链可变区序列；
所述靶向NKp46的抗体包含与SEQIDNO：35第1-107位、SEQIDNO：37第1-107位、SEQIDNO：39第1-107位、SEQIDNO：41第1-107位或SEQIDNO：43第1-107位所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的轻链可变区序列和与SEQIDNO：35第123-244位、SEQIDNO：37第123-238位、SEQIDNO：39第123-238位、SEQIDNO：41第123-242位或SEQIDNO：43第123-237位所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的重链可变区序列。


7.权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合区选自免疫球蛋白分子、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、二硫键-连接的Fv(sdFv)、抗体的重链可变区(VH)或轻链可变区(VL)、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体和所述抗原的天然配体或其功能性片段。


8.权利要求1-7任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。


9.权利要求1-8任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号传导结构域选自以下蛋白的信号传导结构域：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。优选地，所述胞内信号传导结构域是包含CD3...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚丽，陈功，姜小燕，任江涛，贺小宏，王延宾，韩露，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32