【技术实现步骤摘要】
本公开属于免疫治疗领域。更具体地，本公开涉及一种用于癌症疗法的工程化th9细胞以及包含其的组合物。
技术介绍
1、近年来，细胞治疗作为一种新兴的肿瘤治疗手段，已经在临床中展现出非常显著的疗效。细胞治疗主要是对免疫细胞进行体外扩增，然后再回输给肿瘤患者，以达到治疗目的。然而，这种疗法仍然面临细胞耗竭较快，在患者体内持续性不够等问题，导致疗效下降。因此，如何提高免疫细胞的持续性是该领域长期面临的挑战之一。
2、本公开通过筛选特定的免疫细胞亚型，并表达特定的细胞因子，能够降低免疫细胞的耗竭，进而提高其肿瘤抑制效果。
技术实现思路
1、除非另有说明，否则本文中所使用的所有科学技术术语的含义与本公开所属领域的普通技术人员通常所了解的相同。
2、本公开的目的在于提供一种工程化的th9细胞，其表达特异性识别claudin18.2的细胞表面分子，例如tcr、car等。与常规car-t细胞相比，该工程化的th9细胞耗竭速度更低，扩增能力更强，具有更好的肿瘤抑制效果。
3、工程化的th9细胞
4、在第一个方面，本公开提供一种工程化的th9细胞，其表达特异性识别claudin18.2的细胞表面分子。
5、th9细胞于2008年首次被发现，属于cd4+t细胞的一种新亚型，其特征在于能够分泌il-9。目前，th9细胞与肿瘤的关系还不明确，一方面il-9表达失调会导致某些自主细胞增殖和淋巴细胞的恶性转化，对肿瘤生长起促进作用。另一方面，th9细胞最近
6、在一个实施方案中，细胞表面分子选自嵌合抗原受体、t细胞受体、t细胞融合蛋白或t细胞抗原耦合器。如本文所用，术语“细胞表面分子”是指在细胞表面表达的能够与claudin18.2特异性结合的分子。此类表面分子一般包含能够与claudin18.2特异性结合的抗原结合区、将表面分子锚定在细胞表面的跨膜结构域，以及负责信号传递的胞内结构域。常见的此类表面分子的实例包括例如t细胞受体(tcr)、嵌合抗原受体(car)、t细胞融合蛋白(tfp)或t细胞抗原耦合器(tac)。
7、如本文所用，术语“t细胞受体”或“tcr”是t细胞表面的特征性标志，以非共价键与cd3结合形成复合物。抗原呈递细胞通过主要组织相容性复合体分子(mhc)将抗原肽呈递至t细胞并且结合至tcr复合物以诱发一系列胞内信号传导。tcr由分别形成异二聚体的六条肽链组成，其一般分为αβ型和γδ型。每条肽链包括恒定区和可变区，其中可变区负责结合特异性的抗原和mhc分子。
8、如本文所用，术语“嵌合抗原受体”或“car”是指人工构建的杂合多肽，该杂合多肽一般包括抗原结合区(例如抗体的抗原结合部分)、跨膜结构域和胞内结构域(包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域)，各个结构域之间通过接头连接。car能够利用单克隆抗体的抗原结合特性以非mhc限制性的方式将t细胞和其它免疫细胞的特异性和反应性重定向至所选择的靶标。非mhc限制性的抗原识别给予car细胞与抗原处理无关的识别抗原的能力，因此绕过了肿瘤逃逸的主要机制。此外，当在t细胞内表达时，car有利地不与内源性t细胞受体(tcr)的α链和β链二聚化。
9、如本文所用，术语“t细胞融合蛋白”或“tfp”是指由tcr各组分衍生的重组多肽，通常由tcr亚基和与其连接的抗原结合区组成并在细胞表面表达。其中，tcr亚基包括至少部分tcr胞外结构域、跨膜结构域、tcr胞内信号结构域。
10、如本文所用，术语“t细胞抗原耦合器”或“tac”包括三个功能结构域：1肿瘤靶向结构域，包括单链抗体、设计的锚蛋白重复蛋白(designed ankyrin repeat protein，darpin)或其他靶向基团；2胞外区结构域，与cd3结合的单链抗体，从而使得tac受体与tcr受体靠近；3跨膜区和cd4共受体的胞内区，其中，胞内区连接蛋白激酶lck，催化tcr复合物的免疫受体酪氨酸活化基序(itam)磷酸化作为t细胞活化的初始步骤。
11、如本文所用，“抗原结合区”是指可以与抗原结合的任何结构或其功能性变体。抗原结合区可以是抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、鼠源抗体、嵌合抗体及其功能性片段。例如，抗原结合区包括但不限于igg、fab、fab'、f(ab')2、fd、fd′、fv、scfv、sdfv、线性抗体、单域抗体、纳米抗体、双体、anticalin、darpin等，优选选自fab、scfv、单域抗体和纳米抗体。在本公开中，抗原结合区可以是单价或二价，且可以是单特异性、双特异性或多特异性的抗体。
12、在一个实施方案中，所述细胞表面分子包含结合claudin18.2的抗体。在一个实施方案中，所述抗体为完整抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、scfv抗体片段、线性抗体、sdab或纳米抗体。优选地，所述抗体包含如seq id no：1、2、3所示的cdr-1、cdr-2和cdr-3。优选地，所述抗体与seq id no：4具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
13、在一个实施方案中，所述细胞表面分子是包含结合claudin18.2的抗体的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。
14、如本文所用，术语“跨膜结构域”是指能够使嵌合抗原受体在免疫细胞(例如淋巴细胞、nk细胞或nkt细胞)表面上表达，并且引导免疫细胞针对靶细胞的细胞应答的多肽结构。跨膜结构域可以是天然或合成的，也可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。当嵌合受体多肽与靶抗原结合时，跨膜结构域能够进行信号传导。特别适用于本公开中的跨膜结构域可以源自例如tcrα链、tcrβ链、tcrγ链、tcrδ链、cd3ζ亚基、cd3ε亚基、cd3γ亚基、cd3δ亚基、cd45、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd16、cd22、cd33、cd28、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154或它们的任意组合。优选地，所述跨膜结构域选自cd8α、cd4、cd28或cd278的跨膜结构域。更为优选地，所述跨膜结构域为cd8α或cd28跨膜结构域，与seq id no:5、6、7所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
15、在一个实施方案中，本公开的嵌合抗原受体还可以包含位于抗体和跨膜结构域之间的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工程化的Th9细胞，其表达特异性识别Claudin18.2的细胞表面分子。
2.根据权利要求2所述的Th9细胞，其还表达一种或多种外源性的细胞因子，所述细胞因子选自TSLP、IL7、XCL1和XCL2。
3.根据权利要求2所述的Th9细胞，其中所述细胞因子是TSLP。
4.根据权利要求2所述的Th9细胞，其中所述细胞因子是IL7和XCL1的组合，或IL7和XCL2的组合，或IL7、XCL1和XCL2的组合。
5.根据权利要求1所述的Th9细胞，其中所述细胞表面分子选自嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白或T细胞抗原耦合器。
6.根据权利要求1所述的Th9细胞，其中所述细胞表面分子包含结合Claudin18.2的抗体。
7.根据权利要求6所述的Th9细胞，其中所述抗体为完整抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、scFv抗体片段、线性抗体、sdAb或纳米抗体。
8.根据权利要求6所述的Th9细胞，其中所述抗体包含如SEQ ID NO：1、2、3所示的CDR-1、CDR-2和CD
9.根据权利要求6所述的Th9细胞，其中所述抗体与SEQ ID NO：4具有至少90％同一性。
10.根据权利要求1所述的Th9细胞，其中所述细胞表面分子是包含结合Claudin18.2的抗体的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。
11.根据权利要求10所述的Th9细胞，其中所述共刺激结构域选自以下蛋白质的共刺激信号传导结构域：LTB、CD94、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、CARD11、CD2、CD7、CD8、CD18、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54、CD83、CD134、CD137、CD270、CD272、CD276、CD278、CD357、DAP10、DAP12、LAT、NKG2C、SLP76、PD-1、LIGHT、TRIM、ZAP70或其任意组合。
12.根据权利要求10所述的Th9细胞，其中所述初级信号传导结构域选自以下蛋白的信号传导结构域：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b、CD66d或其任意组合。
13.根据权利要求10所述的Th9细胞，其中所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或其任意组合。
14.根据权利要求1所述的Th9细胞，其中所述Th9细胞的至少一种MHC相关基因和/或至少一种TCR/CD3相关基因的表达被抑制或沉默。
15.根据权利要求14所述的Th9细胞，所述MHC相关基因选自HLA-A、HLA-B、HLA-C、B2M、HLA-DPA、HLA-DQ、HLA-DRA、TAP1、TAP2、LMP2、LMP7、RFX5、RFXAP、RFXANK、CIITA或其任意组合，优选HLA-A、HLA-B、HLA-C、B2M、RFX5、RFXAP、RFXANK、CIITA或其任意组合；所述TCR/CD3基因选自TRAC、TRBC、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ或其任意组合。
16.一种药物组合物，其中包含权利要求1-15任一项所述的Th9细胞和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋型剂。
17.权利要求1-15任一项所述Th9细胞或权利要求16所述药物组合物在制备治疗/预防/诊断癌症的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种工程化的th9细胞，其表达特异性识别claudin18.2的细胞表面分子。
2.根据权利要求2所述的th9细胞，其还表达一种或多种外源性的细胞因子，所述细胞因子选自tslp、il7、xcl1和xcl2。
3.根据权利要求2所述的th9细胞，其中所述细胞因子是tslp。
4.根据权利要求2所述的th9细胞，其中所述细胞因子是il7和xcl1的组合，或il7和xcl2的组合，或il7、xcl1和xcl2的组合。
5.根据权利要求1所述的th9细胞，其中所述细胞表面分子选自嵌合抗原受体、t细胞受体、t细胞融合蛋白或t细胞抗原耦合器。
6.根据权利要求1所述的th9细胞，其中所述细胞表面分子包含结合claudin18.2的抗体。
7.根据权利要求6所述的th9细胞，其中所述抗体为完整抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、scfv抗体片段、线性抗体、sdab或纳米抗体。
8.根据权利要求6所述的th9细胞，其中所述抗体包含如seq id no：1、2、3所示的cdr-1、cdr-2和cdr-3。
9.根据权利要求6所述的th9细胞，其中所述抗体与seq id no：4具有至少90％同一性。
10.根据权利要求1所述的th9细胞，其中所述细胞表面分子是包含结合claudin18.2的抗体的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域和胞内结构域，其中所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。
11.根据权利要求10所述的th9细胞，其中所述共刺激结构域选自以下蛋白质的共刺激信号传导结构域：ltb、cd94、tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、card11、cd2、cd7、cd8、cd18、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54、cd8...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢芸，杜靖雯，任江涛，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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