一种人重组乙型干扰素的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种人重组乙型干扰素的高效制备方法，所述方法包括：通过将亮氨酸拉链1、类泛素修饰分子羧基端与乙型干扰素融合，并在酵母系统高效表达，获得亮氨酸拉链1‑类泛素修饰分子羧基端‑乙型干扰素融合蛋白；将所述的融合蛋白，与类泛素修饰分子氨基端‑亮氨酸拉链2蛋白分子混合，亮氨酸拉链1与亮氨酸拉链2可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体，从而使得类泛素修饰分子羧基端与类泛素修饰分子氨基端重组成为完整的类泛素分子重建物，用类泛素修饰分子特异性蛋白酶处理该重建物，从而获得与自然人乙型干扰素结构和功能相似的重组人乙型干扰素。本发明专利技术具有表达水平高、工艺简单、保持蛋白结构和活性等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种人重组乙型干扰素的制备方法本申请是申请日为2014年4月9日、中国申请号为2014101411186、专利技术名称为“一种人重组乙型干扰素的制备方法”的专利技术申请的分案申请。
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种人重组乙型干扰素的制备方法。
技术介绍
乙型干扰素(又称为β干扰素，Interferon-β，IFN-β)是由体内纤维细胞和巨噬细胞分泌的细胞因子，是一种糖蛋白，含166个氨基酸，分子量约为20，500道尔顿，具有抗炎症功能，抗病毒、抗增殖以及免疫调节活性，其作为药物可广泛用于抗感染、抗肿瘤和拮抗自身免疫性疾病。尽管乙型干扰素已经在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和中国仓鼠卵巢癌细胞中进行表达，然而，由这些系统所表达和生产的蛋白量相对较少。小分子类泛素修饰蛋白(smallubiquitin-likemodifier，SUMO)具有高度类似泛素的桶状蛋白结构，具有相当的保守性，能够提供蛋白正确折叠的核心，极大提高了目的蛋白的溶解性，已经证明是最好的提高可溶蛋白表达量的标签之一。并且，SUMO这个融合的蛋白标签可以在体外用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人重组乙型干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(a)通过将亮氨酸拉链1、类泛素修饰分子羧基端与乙型干扰素融合，并在酵母系统高效表达，获得亮氨酸拉链1-类泛素修饰分子羧基端-乙型干扰素融合蛋白，分离所述融合蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；/n(b)将所述的融合蛋白，与类泛素的修饰分子氨基端-亮氨酸拉链2蛋白分子混合，所述类泛素的修饰分子氨基端-亮氨酸拉链2蛋白分子的序列如SEQ ID NO.2所示；所述亮氨酸拉链2与亮氨酸拉链1可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体，从而生成类泛素分子重建物；所述类泛素分子重建物包含：由亮氨酸拉链1和亮氨酸拉链2相互作用形成的亮氨酸拉链二聚...

【技术特征摘要】
1.一种人重组乙型干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)通过将亮氨酸拉链1、类泛素修饰分子羧基端与乙型干扰素融合，并在酵母系统高效表达，获得亮氨酸拉链1-类泛素修饰分子羧基端-乙型干扰素融合蛋白，分离所述融合蛋白，其序列如SEQIDNO.1所示；
(b)将所述的融合蛋白，与类泛素的修饰分子氨基端-亮氨酸拉链2蛋白分子混合，所述类泛素的修饰分子氨基端-亮氨酸拉链2蛋白分子的序列如SEQIDNO.2所示；所述亮氨酸拉链2与亮氨酸拉链1可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体，从而生成类泛素分子重建物；所述类泛素分子重建物包含：由亮氨酸拉链1和亮氨酸拉链2相互作用形成的亮氨酸拉链二聚体、重建的类泛素分子以及乙型干扰素蛋白；
(c)用类泛素分子的特异性蛋白酶处理步骤b的重建物，从而将亮氨酸拉链二聚体和重建的类泛素分子切割下来，分离获得与自然人乙型干扰素结构和功能相似的重组人乙型干扰素。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的类泛素修饰分子是SUMO。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述SUMO的羧基端区域具有SEQIDNO.1中第52-96位的氨基酸序列；或者所述SU...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华平，张金阔，钱柳青，范名俊，朱苗苗，
申请(专利权)人：广州复能基因有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44