结合CD47蛋白的融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种结合CD47蛋白的融合蛋白及其应用，所述融合蛋白能够以1×10

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合CD47蛋白的融合蛋白及其应用
本申请涉及一种结合CD47蛋白的融合蛋白及其应用。所述融合蛋白可特异性地阻断CD47蛋白与SIRPα的相互作用，不引起凝血反应，且可抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。
技术介绍
CD47蛋白是一种跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，在包括红细胞在内许多细胞表面表达。CD47的配体包括整合素(intergrins)、凝血栓蛋白1(thrombospondin-1)以及信号调节蛋白(SIRPs)。CD47影响多种生物学功能，包括细胞迁移，T细胞、树突状细胞活化，轴突发育等。除此之外，CD47通过与SIRPα相互作用可抑制巨噬细胞的吞噬作用，保护血细胞等正常细胞不被巨噬细胞吞噬。研究发现，除正常组织细胞表达CD47以外，许多肿瘤细胞过度表达CD47，并通过与巨噬细胞表面的SIRPα相结合而阻止巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，这被视为肿瘤逃避机体免疫监视的一种机制。阻断CD47蛋白和SIRPα的相互作用，可抑制肿瘤增长(TheocharidesAPA，etal.，2012)。然而，现有的用于阻断CD47蛋白和SIRPα相互作用的试剂识别活性有限，其与CD47蛋白的亲和力往往不足，且对肿瘤的抑制能力有限。另一方面，现有靶向CD47的抗体类药物存在引起贫血反应或者血小板减少的副作用(白银鹏等，ChinJClinOncol.，2017Vol44.No.7)。亟需开发能够有效阻断CD47蛋白和SIRPα相互作用、且副作用小的新型疗法。
技术实现思路
本申请提供了一种结合CD47蛋白的融合蛋白及其应用。所述融合蛋白可以特异性结合CD47蛋白。本申请所述的融合蛋白具有下列性质中的至少一种：1)以较高的亲和力特异性与CD47蛋白相结合；2)特异性阻断CD47蛋白与SIRPα的相互作用；3)不引起凝血反应；4)抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖；5)阻断由CD47/SIRPα相互作用而诱导的凋亡信号；和/或，6)对受试者安全没有伤害身体的副作用。本申请还提供了所述融合蛋白的制备方法和应用。一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其可特异性结合CD47蛋白，并且具有以下特征中的至少一项：1)以1×10-8M或更低的KD值与CD47蛋白相结合；2)特异性阻断CD47蛋白与SIRPα的相互作用；3)不引起凝血反应；以及4)抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。在某些实施方式中，所述CD47蛋白为人CD47蛋白。在某些实施方式中，所述CD47蛋白为在细胞表面表达的CD47蛋白。在某些实施方式中，所述肿瘤或肿瘤细胞为CD47阳性。在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：CD47阳性血液肿瘤和/或CD47阳性实体瘤。在某些实施方式中，所述融合蛋白包括能够特异性结合所述CD47蛋白的人SIRPα结构域和免疫球蛋白Fc区，其中所述人SIRPα结构域与所述免疫球蛋白Fc区直接或间接相连。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含人SIRPα的胞外结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含人SIRPα的IgV结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含人SIRPα变体1的结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含人SIRPα变体1的IgV结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含人SIRPα变体1中第33位-第149位的氨基酸残基、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。在某些实施方式中，本申请所述人SIRPα结构域包含下述任一项所示的氨基酸序列：SEQIDNO：1-20、62-65，以及，与其具有至少80％(例如，至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方式中，本申请所述的融合蛋白包含下述任一项所示的氨基酸序列：SEQIDNO：21-61中，以及，与其具有至少80％(例如，至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体包含1个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加。在某些实施方式中，所述突变体在选自下组的一个或多个残基处包含氨基酸取代：I61、V63、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、D96、K98、N100、R107、G109和V132。在某些实施方式中，所述突变体包含一个或多个选自下组的氨基酸取代：R22C、I29L、I61L/V/F、V63I、E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L、Q82S/R/G/N、K83R、E84K/H/D/R/G、V93L/A、D95H/R/E、D96S/T、K98R、N100G/K/D/E、R107N/S、G109R/H和V132L/R/I/S。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域包含下述任一项所示的氨基酸序列：SEQIDNO：1-20、62-65。在某些实施方式中，所述免疫球蛋白Fc区包含IgG的Fc区。在某些实施方式中，所述IgG为人IgG。在某些实施方式中，所述IgG选自下组：IgG1和/或IgG4。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域位于所述免疫球蛋白Fc区的N端。在某些实施方式中，所述人SIRPα结构域与所述免疫球蛋白Fc区通过连接子相连。在某些实施方式中，所述免疫球蛋白Fc区包含包含下述任一项所示的氨基酸序列：SEQIDNO：67-68。在某些实施方式中，所述融合蛋白包含下述任一项所示的氨基酸序列：SEQIDNO：21-61。另一方面，本申请提供了核酸分子，其编码本申请所述的融合蛋白。另一方面，本申请提供了载体，其包含本申请所述的核酸分子。另一方面，本申请提供了宿主细胞，其包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体。另一方面，本申请提供了制备本申请所述的融合蛋白的方法，所述方法包括在使得所述融合蛋白表达的条件下，培养本申请所述的宿主细胞。另一方面，本申请提供了组合物，其包含本申请所述的融合蛋白、核酸分子、载体和/或宿主细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。另一方面，本申请提供了本申请所述的融合蛋白、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物在制备药物和/或试剂盒中的用途，其中所述药物和/或试剂盒用于预防或治疗肿瘤或自免疫疾病。在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。在某些实施方式中，所述自免疫疾病选自下组：克罗恩氏病、过敏性哮喘和类风湿性本文档来自技高网...

【技术保护点】
融合蛋白，其特异性结合CD47蛋白，并且具有以下特性中的至少一项：/n(a)以1×10

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180417 CN 2018103434829融合蛋白，其特异性结合CD47蛋白，并且具有以下特性中的至少一项：
(a)以1×10
-8M或更低的K
D值与CD47蛋白相结合；

(b)特异性阻断CD47蛋白与SIRPα的相互作用；
(c)不引起凝血反应；以及
(d)抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。


根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述CD47蛋白为人CD47蛋白。


根据权利要求1-2中任一项所述的融合蛋白，其包括能够特异性结合所述CD47蛋白的人SIRPα结构域和免疫球蛋白Fc区，其中所述人SIRPα结构域与所述免疫球蛋白Fc区直接或间接相连。


根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述人SIRPα结构域包含人SIRPα的胞外结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。


根据权利要求3-4中任一项所述的融合蛋白，其中所述人SIRPα结构域包含人SIRPα的IgV结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。


根据权利要求3-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述人SIRPα结构域包含人SIRPα变体1的结构域、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。


根据权利要求3-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述人SIRPα结构域包含人SIRPα变体1中第33位-第149位的氨基酸残基、其片段，或者其中经过1个或多个氨基酸取代的其突变体。


根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述突变体在选自下组的一个或多个残基处包含氨基酸取代：I61、V63、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、D96、K98、N100、R107、G109和V132。


根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述突变体包含一个或多个选自下组的氨基酸取代：R22C、I29L、I61L/V/F、V63I、E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L、Q82S/R/G/N、K83R、E84K/H/D/R/G、V93L/A、D95H/R/E、D96S/T、K98R、N100G/K/D/E、R107N/S、G109R/H和V132L/R...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕明，丁晓然，缪仕伟，谈彬，王学恭，
申请(专利权)人：杭州尚健生物技术有限公司，尚健单抗北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33