一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用，将OMP25蛋白N端信号肽序列与BP26蛋白N端信号肽序列删除，保留其抗原决定簇序列，中间通过Linker序列GGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCT将之连接成为融合蛋白；所述的OMP25蛋白N端信号肽序列为第1个aa～29个aa，所述的BP26蛋白N端信号肽序列为第1个aa～24个aa。本发明专利技术比单独蛋白更经济、方便，抗原性更优。蛋白获得耗时少产量高，避免了活菌的培养和生物安全风险，特异性强，定位布鲁氏菌细胞抗原表位更有利于揭示体液免疫的本质。

【技术实现步骤摘要】
一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用
本专利技术涉及融合蛋白
，特别是涉及一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用。
技术介绍
布鲁氏菌病又称地中海弛张热，马耳他热，是由布鲁氏菌(Brucellasp)引起的一种以流产和发热为特征的人畜共患性传染病，在世界许多国家和地区流行，高发地区为地中海地区，亚洲，中南美洲等。能导致多种动物和人发病，是以侵害生殖系统为主的人畜共患性传染病，严重危害动物健康和人类公共卫生安全。布鲁氏菌是革兰氏阴性兼性胞内菌，主要宿主有猪、牛、羊、狗等动物和人，传播途径主要是经消化道、呼吸道和皮肤粘膜。临床分型为急性期、慢性期活动型及慢性期相对稳定型。潜伏期7～60天，平均2周，少数患者可达数月至1年以上。急性期病多缓起，主要症状为发热、多汗、关节痛、睾丸肿痛等。发热多为低热和不规则热，5％～20％出现典型的波浪热。肝脾肿大也很常见。其他尚可有头痛、神经痛、淋巴结肿大，皮疹等。我国将该病列为二类动物疫病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，将OMP25蛋白N端信号肽序列与BP26蛋白N端信号肽序列删除，保留其抗原决定簇序列，中间通过Linker序列GGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCT将之连接成为融合蛋白；所述的OMP25蛋白N端信号肽序列为第1个aa～29个aa，所述的BP26蛋白N端信号肽序列为第1个aa～24个aa。/n

【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，将OMP25蛋白N端信号肽序列与BP26蛋白N端信号肽序列删除，保留其抗原决定簇序列，中间通过Linker序列GGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCT将之连接成为融合蛋白；所述的OMP25蛋白N端信号肽序列为第1个aa～29个aa，所述的BP26蛋白N端信号肽序列为第1个aa～24个aa。


2.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，根据pET28a(+)载体的多克隆位点，在OMP25蛋白序列的两端分别引入NdeI和BamH1两个酶切位点及保护碱基GGAATTC和CG，在BP26蛋白序列的两端分别引入BamH1和EcoRI两个酶切位点及保护碱基CG和C，便于插入表达载体pET28a(+)中。


3.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的抗原表位氨基酸序列，第25个aa-第213个aa，共189aa：






含有布鲁氏菌周质蛋白BP26的抗原表位氨基酸序列，第30个aa-第250个aa，共221aa：



构建的含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和周质蛋白BP26的融合蛋白的抗原表位氨基酸序列422aa：








4.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的抗原表位基因的DNA序列，588bp：
GGAATTCCATATGGACGCCATCCAGGAACAGCCTCCGGTTCCGGCTCCGGTTGAAGTAGCTCCCCAGTATAGCTGGGCTGGTGGCTATACCGGTCTTTACCTTGGCTACGGCTGGAACAAGGCCAAGACCAGCACCGTTGGCAGCATCAAGCCTGACGATTGGAAGGCTGGCGCCTTTGCTGGCTGGAACTTCCAGCAGGACCAGATCGTATACGGTGTTGAAGGTGATGCAGGTTATTCCTGGGCCAAGAAGTCCAAGGACGGCCTGGAAGTCAAGCAGGGCTTTGAAGGCTCGCTGCGTGCCCGCGTTGGCTACGACCTGAACCCGGTTATGCCGTACCTCACGGCTGGTATTGCCGGTTCGCAGATCAAGCTTAACAACGGCTTGGACGACGAAAGCAAGTTCCGCGTGGGTTGGACGGCTGGTGCCGGTCTCGAAGCCAAGCTGACGGACAACATCCTCGGCCGCGTTGAGTACCGTTACACCCAGTACGGCAACAAGAACTATGATCTGGCCGGTACGACTGTTCGCAACAAGCTGGACACGCAGGATTTCCGCGTCGGCATCGGCTACAAGTTCGGATCCCG
含有布鲁氏菌周质蛋白BP26的抗原表位基因的DNA序列(681bp)：
CGGGATCCGAGAATCAGATGACGACGCAGCCCGCGCGCATCGCCGTCACCGGGGAAGGCATGATGACGGCCTCGCCCGATATGGCCATTCTCAATCTCTCGGTGCTACGCCAGGCAAAGACCGCGCGCGAAGCCATGACCGCGAATAATGAAGCCATGACAAAAGTGCTCGATGCCATGAAGAAGGCCGGCATCGAAGATCGCGATCTCCAGACAGGCGGCATCAATATCCAGCCGATTTATGTCTATCCTGACGACAAGAACAACCTGAAAGAGCCTACCATCACCGGCTATTCTGTATCCACCAGTCTCACGGTTCGCGTGCGCGAACTGGCCAATGTTGGAAAAATTTTGGATGAATCCGTCACGCTCGGTGTTAATCAGGGCGGTGATTTGAACCTGGTCAATGATAATCCCTCTGCCGTGATCAACGAGGCGCGCAAGCGCGCAGTGGCCAATGCCATTGCCAAGGCGAAGACGCTTGCCGACGCTGCAGGCGTGGGGCTTGGCCGTGTGGTGGAAATCAGTGAACTGAGCCGCCCGCCCATGCCGATGCCAATTGCGCGCGGACAGTTCAGAACCATGCTAGCAGCCGCACCGGACAATTCCGTGCCGATTGCCGCAGGCGAAAACAGCTATAACGTATCGGTCAATGTCGTTTTTGAAATCAAGTAAGAATTCC
构建的含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和周质蛋白BP26的融合蛋白抗原表位基因的DNA序列，1289bp：
GGAATTCCATATGGACGCCATCCAGGAACAGCCTCCGGTTCCGGCTCCGGTTGAAGTAGCTCCCCAGTATAGCTGGGCTGGTGGCTATACCGGTCTTTACCTTGGCTACGGCTGGAACAAGGCCAAGACCAGCACCGTTGGCAGCATCAAGCCTGACGATTGGAAGGCTGGCGCCTTTGCTGGCTGGAACTTCCAGCAGGACCAGATCGTATACGGTGTTGAAGGTGATGCAGGTTATTCCTGGGCCAAGAAGTCCAAGGACGGCCTGGAAGTCAAGCAGGGCTTTGAAGGCTCGCTGCGTGCCCGCGTTGGCTACGACCTGAACCCGGTTATGCCGTACCTCACGGCTGGTATTGCCGGTTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕素芳，李峰，董炳梅，郭广君，沈志强，胡莉萍，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37