【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞冻存。具体地，本专利技术涉及一种细胞冻存液及其用途。
技术介绍
1、细胞冻存是细胞长期保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要的时候再复苏细胞。细胞冻存的应用场景广泛，例如可以用于免疫细胞治疗等领域。
2、免疫细胞治疗是一种运用生物技术和生物制剂对采集的免疫细胞进行体外培养、扩增后输到病人体内的治疗方法，其能够激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，免疫细胞治疗已成为肿瘤患者放疗、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。
3、近年来关于免疫细胞治疗项目的研究开展越来越多，很多项目已到达临床治疗阶段；但一些细胞对冻融过程敏感，解冻后细胞的存活率和细胞毒性显著降低。不论对第三方细胞库，还是对配送和应用临床管理来说，细胞的长期有效储存始终是一个问题。
4、现有细胞冻存液的配方中常加入动物血清以帮助维持体外培养细胞的存活，但动物血清中含有大量的异种蛋白，既增加了感染传染病的风险，又很容易引起过敏反应或者免疫排斥，因此不适用于临床研究。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种细胞冻存液，能够很好地解决细胞解冻后存活率和细胞性能显著降低的问题，且不含动物血清，所用试剂均为gmp级，dmso含量低，能够适用于临床研究。
2、本专利技术提
3、在一个实施方案中，所述il-2是重组人il-2。
4、在一个实施方案中，所述il-2的含量为500-2500iu/ml。在一个实施方案中，所述il-2的含量为500-2400iu/ml，优选500-2300iu/ml，更优选500-2200iu/ml。在一个实施方案中，所述il-2的含量为600-2500iu/ml，优选600-2400iu/ml，更优选600-2300iu/ml，或600-2200iu/ml，例如可以是600iu/ml、800iu/ml、1000iu/ml、1200iu/ml、1400iu/ml、1600iu/ml、1800iu/ml、2000iu/ml、2200iu/ml。在一个具体的实施方案中，所述il-2的含量为600iu/ml或2200iu/ml。
5、在一个实施方案中，所述白蛋白是人血白蛋白。在一个实施方案中，所述白蛋白是注射级人血白蛋白。
6、在一个实施方案中，所述白蛋白的含量为50-200mg/ml。在一个实施方案中，所述白蛋白的含量为60-200mg/ml，优选70-200mg/ml，更优选80-200mg/ml。在一个实施方案中，所述白蛋白的含量为50-190mg/ml，优选50-180mg/ml，优选50-170mg/ml，更优选50-160mg/ml。在一个实施方案中，所述白蛋白的含量为60-190mg/ml，优选70-180mg/ml，更优选80-160mg/ml，例如可以是80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml、140mg/ml、160mg/ml等。在一个具体的实施方案中，所述白蛋白的含量为80mg/ml或160mg/ml。
7、在一个实施方案中，所述dmso的体积百分比为1％-5％。在一个实施方案中，所述dmso的体积百分比为2％-5％。在一个实施方案中，所述dmso的体积百分比为2.5％-5％，例如可以是2.5％、2.75％、3％、3.25％、3.5％、3.75％、4％、4.25％、4.5％、4.75％、5％等。在一个具体的实施方案中，所述dmso的体积百分比为5％。
8、在一个实施方案中，所述细胞冻存液还包含inf-γ、il-7和il-15中的一种或多种。
9、在一个实施方案中，所述inf-γ的含量为200-1500iu/ml，优选200-1400iu/ml，200-1300iu/ml，200-1200iu/ml或200-1100iu/ml。在一个实施方案中，所述inf-γ的含量为250-1500iu/ml或300-1500iu/ml。在一个实施方案中，所述inf-γ的含量为200-1100iu/ml，更优选300-1100iu/ml，例如可以是300iu/ml、400iu/ml、500iu/ml、600iu/ml、70iu/ml、800iu/ml、900iu/ml、1000iu/ml、1100iu/ml等。在一个具体的实施方案中，所述inf-γ的含量为300iu/ml或1100iu/ml。
10、在一个实施方案中，所述il-7的含量为2-20ng/ml。在一个实施方案中，所述il-7的含量为3-20ng/ml，优选4-20ng/ml，更优选4.5-20ng/ml。在一个实施方案中，所述il-7的含量为2-19ng/ml，2-18ng/ml，2-17ng/ml或2-16.5ng/ml。在一个实施方案中，所述il-7的含量为4.5-16.5ng/ml，例如可以是4.5ng/ml、5.5ng/ml、6.5ng/ml、7.5ng/ml、8.5ng/ml、9.5ng/ml、10.5ng/ml、11.5ng/ml、12.5ng/ml、13.5ng/ml、14.5ng/ml、15.5ng/ml、16.5ng/ml等。在一个具体的实施方案中，所述il-7的含量为4.5ng/ml或16.5ng/ml。
11、在一个实施方案中，所述il-15的含量为2-20ng/ml。在一个实施方案中，所述il-15的含量为3-20ng/ml，优选4-20ng/ml，更优选4.5-20ng/ml。在一个实施方案中，所述il-15的含量为2-19ng/ml，2-18ng/ml，2-17ng/ml或2-16.5ng/ml。在一个实施方案中，所述il-15的含量为4.5-16.5ng/ml，例如可以是4.5ng/ml、5.5ng/ml、6.5ng/ml、7.5ng/ml、8.5ng/ml、9.5ng/ml、10.5ng/ml、11.5ng/ml、12.5ng/ml、13.5ng/ml、14.5ng/ml、15.5ng/ml、16.5ng/ml等。在一个具体的实施方案中，所述il-15的含量为4.5ng/ml或16.5ng/ml。
12、在一个实施方案中，所述冻存液由以下成分组成：
13、(i)500-2500iu/ml的il-2、50-200mg/ml的白蛋白、1％-5％体积百分比的dmso以及不含动物血清的基础培养基；
14、(ii)500-2500iu/ml的il-2、50-200mg/ml的白蛋白、1％-5％体积百分比的dmso、200-1500iu/ml的inf-γ以及不含动物血清的基础培养基；
15、(iii)500-2500iu/ml的il-2、50-200mg/ml的白蛋白、1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞冻存液，其包含IL-2、白蛋白、DMSO及不含动物血清的基础培养基。
2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其中所述IL-2的含量为500-2500IU/mL。
3.根据权利要求1或2所述的细胞冻存液，其中所述白蛋白的含量为50-200mg/mL。
4.根据权利要求1-3任一项所述的，其中所述DMSO的体积百分比为1％-5％。
5.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其还包含INF-γ、IL-7、IL-15中的一种或多种。
6.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其还包含：200-1500IU/mL的INF-γ、2-20ng/mL的IL-7、2-20ng/mL的IL-15中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其由以下成分组成：
8.根据权利要求1-7任一项所述的细胞冻存液，其中所述不含动物血清的基础培养基选自RPMI-1640、GT-T551、GT-T561、91141-PRIME-XV T Cell Expansion XSFM、α-MEM、IMDM、DME
9.根据权利要求7所述的细胞冻存液，其由以下成分组成：
10.根据权利要求1-9任一项所述的细胞冻存液，其中所述细胞为自体免疫细胞或异体免疫细胞。
11.根据权利要求10所述的细胞冻存液，其中所述免疫细胞选自T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞、NKT细胞或其任意组合。
12.根据权利要求11所述的细胞冻存液，其中所述T细胞选自CD4+CD8+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、记忆T细胞、CD4-CD8-T细胞、肿瘤浸润细胞、幼稚T细胞、γδ-T细胞、αβ-T细胞或其任意组合。
13.根据权利要求11所述的细胞冻存液，其中所述NK细胞选自原代NK细胞、NK-92、NK92.26.5、NK92.MI、NK-92Ci、NK-92Fc、NK3.3、NKL、NKG、NK-YT、NK-YS、NK-YTS、HANK-1、KHYG-1、CD56dim NK细胞、CD56bright NK细胞、HATAK细胞或其任意组合。
14.根据权利要求1-13任一项所述的细胞冻存液，其中所述免疫细胞表达嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白、T细胞抗原耦合器中的一种或多种。
15.根据权利要求1-14任一项所述的细胞冻存液，其中所述免疫细胞的冻存密度为1×106-1×108个细胞/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其包含il-2、白蛋白、dmso及不含动物血清的基础培养基。
2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其中所述il-2的含量为500-2500iu/ml。
3.根据权利要求1或2所述的细胞冻存液，其中所述白蛋白的含量为50-200mg/ml。
4.根据权利要求1-3任一项所述的，其中所述dmso的体积百分比为1％-5％。
5.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其还包含inf-γ、il-7、il-15中的一种或多种。
6.根据权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液，其还包含：200-1500iu/ml的inf-γ、2-20ng/ml的il-7、2-20ng/ml的il-15中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其由以下成分组成：
8.根据权利要求1-7任一项所述的细胞冻存液，其中所述不含动物血清的基础培养基选自rpmi-1640、gt-t551、gt-t561、91141-prime-xv t cell expansion xsfm、α-mem、imdm、dmem/f-12、f-12k、lymgro或x-vivo无血清培养基。
9.根据权利要求7所述的细胞冻存液，其由以下成分组成...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵恩峰，苏腾，王延宾，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。