有机膦酸酯酶检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术是一套适用于医院检验科或临床生化实验室进行有机膦酸酯酶定量研究的有机膦酸酯酶活性检测试剂盒。本检测试剂盒是由一瓶装有“苯基膦酸（对硝基）苯酚酯”的试剂瓶（１），一瓶装有缓冲液的试剂瓶（２）和一瓶装有终止剂的试剂瓶（３）以及数块微孔反应板（４），由一个塑料或硬纸等材料做成的盒子（５）包装在一起组成。由试剂盒内的试剂（１）、（２）、（３）和微孔反应板（４）配套使用，可以定量测定血清或其它样品中的有机膦酸酯酶活性。（*该技术在2004年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及整体包装在一个盒子里的由酶底物、缓冲液和终止剂等配套组成的有机膦酸酯酶检测试剂盒。人血清有机膦酸酯酶是正常健康成年人血清中存在的一种水解酶。目前的研究已经发现在人发生肝脏纤维化或肝硬化时血清中有机膦酸酯酶活性升高。利用检测人血清中有机膦酸酯酶活性有助临床诊断肝硬化。现在已报道的血清有机膦酸酯酶的活性测定都是采用自配试剂进行检测。因随时需要称量和配制试剂而使用不方便。同时，因试剂配制人员的熟练程度、仪器的准确性等原因产生的系统误差较大。本技术的任务是提供一套预先已由生产厂商称量配制和分装好，临用时只需简便操作即能使用的检测试剂盒。它应该具有制做容易，装配合理、使用方便的特点，并能同时满足测定多个样品的需要。本技术的任务是以如下方式完成的将检测试剂“苯基膦酸(对硝基)苯酚酯”称量后装入一个有色玻璃瓶内，将玻璃瓶用胶塞密封盖好，此作为“试剂瓶(1)”。将三羟甲基氨基甲烷配制成0.03－0.2mol／L浓度，并用浓盐酸调节成PH＝8.5－9.2的缓冲液，吸取一定量装入另一个有色玻璃瓶内，将玻璃瓶用胶塞密封盖好，此为“试剂瓶(2)”。将总量为1克分子(84.01克)无水碳酸氢钠，10毫克分子(3.8克)磷酸三钠和10毫克分子(3.72克)乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)共溶于0.9升蒸馏水中，溶完后补加蒸馏水到总体积1.0升。吸取一定量分装于小试剂瓶内，此作为“试剂瓶(3)”。将上述三瓶试剂和1－6块各具有多个微孔(每个微孔容积为250ul)的塑料反应板(4)，共同装配在一个适当大小的盒子(5)内，就构成配套的检测试剂盒。通过上述三种试剂与微孔反应板配合使用，就能一次测定多个血清样品中的有机膦酸酯酶活性。本技术简化了实验操作步骤，方便临床检测人员的使用，能较好地满足实验操作标准化、规范化的需求。以下将结合检测试剂盒的构成与附图及使用方法，对本技术作进一步的详细描述。检测试剂盒的构成试剂瓶(1)内装已按固定重量准确称量并闭封包装的“苯基膦酸(对硝基)苯酚酯铵盐”试剂1瓶，试剂瓶总容量12－27毫升，试剂净重量为10－100毫克。试剂瓶(2)内装已准确配制并闭封包装的三羟甲基氨基甲烷(Tris)与盐酸的混合溶液，试剂的酸碱度在PH8.5－9.2之间，三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度为0.03－0.2mol／L。试剂瓶(3)也称终止剂，内装无水碳酸氢钠、磷酸三钠和乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)的混合溶液，混合后各物质的最终浓度为0.5－1mol／L NaHCO3，5－50mmol／LNa3PO4和5－50mmol／LEDTA。微孔反应板(4)每个检测盒配装有1－6块微孔反应板，每块板的微孔数为5－80个，每个微孔的总容积为200－400ul。上述试剂和反应板一起装在一个由塑料或硬纸等材料制成的适当大小的方形盒子(5)中。组装好的检测盒可以放置在4－20℃保存。检测试剂盒的使用方法临使用前打开各号试剂瓶的密封瓶塞，将试剂瓶(2)内的试剂全部倒入试剂瓶(1)内。摇动溶解成“底物溶液”。将检测盒装备的微孔反应板(4)取出，在每个微孔中分别加入5－50ul待测血清标本，每块反应板留出2个孔不加标本。再向各孔内加入50－100ul“底物溶液”，立刻用微量振荡器混匀后，放入37－50℃环境温育0.5－2小时。待温育时间到达，立即向每孔中加入100ul终止剂(瓶内试剂)(3)。混匀后放置10分钟，即可采用酶联免疫检测仪比色测定各孔400－410nm波长处的光吸收值。两个没加血清标本的对照孔中，除不加血清外，其它试剂加量与测定孔相同。各孔光吸收值按加样量和稀释倍数进行适当换算即可得到各血清样品中所含有机膦酸酯酶活性单位。采用这套检测试剂盒测定血清或其它样品中有机膦酸酯酶活性定量准确、操作方便，适用于医院检验室或临床生化实验室常规定量测定血清或其它样品中的有机膦酸酯酶活性。权利要求1.一套由三瓶试剂和数块微孔反应板配套组成的有机膦酸酯酶检测试剂盒，其特征是三瓶试剂中有一瓶装有定量的“苯基膦酸(对硝基)苯酚酯铵盐”作为酶的检测底物，另外二瓶分别装有缓冲液和终止剂。2.按权利要求1规定的有机膦酸酯酶检测试剂盒，其特征是在装有终止剂的试剂瓶内，终止剂是由0.5－1mol／L NaHCO3，5－50mmol／L Na3PO4和5－50mmol／L EDTA混合组成。3.按权利要求1规定的有机膦酸酯酶检测试剂盒，其特征是外层包装盒可以采用塑料、硬纸等材料制作。专利摘要本技术是一套适用于医院检验科或临床生化实验室进行有机膦酸酯酶定量研究的有机膦酸酯酶活性检测试剂盒。本检测试剂盒是由一瓶装有“苯基膦酸(对硝基)苯酚酯”的试剂瓶(1)，一瓶装有缓冲液的试剂瓶(2)和一瓶装有终止剂的试剂瓶(3)以及数块微孔反应板(4)，由一个塑料或硬纸等材料做成的盒子(5)包装在一起组成。由试剂盒内的试剂(1)、(2)、(3)和微孔反应板(4)配套使用，可以定量测定血清或其它样品中的有机膦酸酯酶活性。文档编号G01N33/50GK2194003SQ9422579公开日1995年4月5日 申请日期1994年2月19日 优先权日1994年2月19日专利技术者韩刚毅, 靳晓红, 阎祥华, 王实 申请人:中国人民解放军济南军区后勤部军事医学研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一套由三瓶试剂和数块微孔反应板配套组成的有机膦酸酯酶检测试剂盒，其特征是三瓶试剂中有一瓶装有定量的“苯基膦酸（对硝基）苯酚酯铵盐”作为酶的检测底物，另外二瓶分别装有缓冲液和终止剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩刚毅，靳晓红，阎祥华，王实，
申请(专利权)人：中国人民解放军济南军区后勤部军事医学研究所，
类型：实用新型
国别省市：37[中国|山东]