ＳＰＥ－Ｃ系统，包含适用于ＳＰＥ－Ｃ磁珠的平衡缓冲液、结合缓冲液、清洗缓冲液、洗脱液，其中洗脱液为０．１％－３％的ＴＦＡ，而平衡缓冲液、结合缓冲液和清洗缓冲液组选自： ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ缓冲溶液； 或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为９．０－１１．０的碳酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－６．０的醋酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－６．０的甘氨酸缓冲液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－ ６．０的邻苯二甲酸缓冲液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－７．０的柠檬酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＴＢＳ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－７．０的ＴＥ缓冲溶液；或 ０．０ ０１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＴＥ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－８．０的ＰＢＳ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＳＣ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＳＰＥ 缓冲溶液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种适于分离血清中蛋白多肽的SPE-C 系统及其制备的SPE-C试剂盒，更具体地说涉及SPE-C系统或SPE-C试剂 盒用于分离血清中蛋白多肽的用途。
技术介绍
蛋白质是生物细胞赖以生存的各种代谢和调控途径的主要执行者，并 且疾病的发生可能与蛋白修饰状态的改变有关，蛋白质组学的研究直接定 位于蛋白质水平，但与以往蛋白质化学的研究不同，蛋白质组的研究对象 不是单一或者少数的蛋白，它着重的是从全面、整体、动态、定量的角度 去研究基因的功能，利用蛋白质组的研究方法从细胞蛋白质表达的整体水 平上全景式的透见细胞蛋白质表达变化，将更有助于了解细胞的生物学特 性，故利用蛋白质组学的技术研究疾病的本质要比在基因组水平上的研究 更能说明问题。蛋白质组学技术再研究细胞的增殖、分化、异常转化、肿 瘤形式等方面进行了有力的探索，为疾病的早期诊断、药靶的发现、疗效 和预后的判断提供了重要的依据。许多药物发挥作用靶标分子为蛋白质， 药物开发一般基于疾病发生过程中特异性上调活下调的蛋白质的表达为候 选靶标。利用蛋白质组学方法研究疾病的发生、发展机制、鉴定新的药靶， 以及新的生物标志物，并用于指导临床试验。这不但为治疗各种疾病带来 新的思路、策略，而且蕴藏着巨大的市场前景。蛋白质组学的发展也为新药研究、临床诊断提供了新的思路方法，由 此产生了"临床蛋白质组学"的概念。"临床蛋白质组学"的主要目标就是利用蛋白质组学中的质谱技术高灵敏、高分辨、快速、准确的优点来寻找能够 用于疾病预测、诊断及治疗检测等的一组多肽的蛋白质。"临床蛋白质组学" 是目前蛋白质组学的重要组成部分，是蛋白质组学中新兴的最有应用前景 的学科。临床蛋白质组学的目的就是建立新的具有高灵敏度、高专一性的 可靠的疾病早期检测方法。与广义蛋白质组学一样，临床蛋白质组研究的主要技术也包括3个方面(1)血清样本分离和规模化的制备技术；(2)高通量、高灵敏和高 分辨蛋白质分析和鉴定技术；(3)生物信息学及统计学分析技术。临床蛋白质组的样品制备技术，是目前临床蛋白质组研究达到高灵敏 度、高专一性盒规模化的主要限制因素。由于血清样品十分复杂，样品中 含有有机小分子化合物和规模化及盐等各种干扰物及成千上万的蛋白质和 多肽，蛋白质和多肽量的差异也非常显著，怎样能够通过简单的处理就可 以检测到血清中代表性蛋白和多肽就成为十分关键的问题。磁珠是近年发展起来的并已经广泛应用于生物医学领域的一种新型多 功能试剂。磁珠的结构通常由具有磁性内核及核外包裹的高分子外壳两部 分组成。由于磁核对外磁场的响应，磁珠可在磁场中定向移动。利用这一 性质可以对磁珠进行定位，或将磁珠从周围介质中迅速分离出来。高分子 外壳的表面多样性决定了磁珠可与各种生物活性物质(如抗体、抗原、受 体、酶、核酸等)偶联，这些生物活性物质被固定于磁珠上后则可在反应 介质中进一步识别相应的抗原或抗体、配体。底物、核酸，从而达到分离 或者检测的目的。因此，磁珠集载体功能和分离功能于一身，利用物理学、 化学和生物医学原理，将许多烦琐复杂的操作简单化。使传统测试的周期 大大縮短，在细胞学、免疫学、微生物学、分子生物学及临床诊断与治疗 等许多领域得到了广泛的应用。以磁性微球为固相介质对蛋白质进行提纯已经成功地对溶胞产物、血浆、原生质和腹水中的各种蛋白质进行分离纯化。SPE-C磁珠是基于弱阳 性离子交换吸附原理，在特定的缓冲体系以及pH条件下实现磁珠对特异蛋 白多肽的吸附与解析附。SPE-C属于弱阳性例子交换原理的磁珠，此过程 为可逆过程。蛋白质的SPE-C磁珠离子交换过程分为两个阶段吸附与解 吸附。其中吸附过程蛋白的等电点大于介质条件(AS)至少lpH时，SPE-C 磁珠才能更有效的结合蛋白，并且蛋白的等电点与介质条件(pH)相差越 大，蛋白正电荷电荷量越多，与SPE-C磁珠结合量越大；其中的解吸附过 程介质条件(pH)大于蛋白的等电点时至少lpH时，SPE-C磁珠吸附的 蛋白才能失去电荷，变为负电荷，蛋白才能与SPE-C磁珠解离，并且蛋白 的等电点与介质条件(pH)相差越大，蛋白负电荷量越多，与SPE-C磁珠 解离的越充分。所以缓冲介质的条件(pH)对于磁珠结合特定的蛋白多肽 的种类以及量的多少影响很大。尽管所述的系统能够实现磁珠对特异蛋白多肽的吸附与解析附，但仍 然不能满足磁珠同时对血清中蛋白多肽的广谱吸附和特异吸附的要求。因 此，如果选择适于磁珠对特异蛋白多肽的吸附与解析附的缓冲液系统，成 为目前需要解决的问题。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点，基于目前的质谱分析和临床蛋白质组学的 迫切要求，专利技术人通过选择一些列的介质条件(pH)，从中选出目前文献 调查最多并且结合蛋白种类、结合蛋白含量最高的介质条件，从而提供 SPE-C用于分离血清中蛋白多肽系统及其试剂盒。其中，SPE-C试剂盒利用 弱阳性离子交换吸附的原理，配合一套适合于质谱分析的缓冲溶液尽量多 的从血清中获得多肽和蛋白质信息，禾偶SPE-C磁珠的磁性进行分离，并之际通过质谱进行分析，从而寻找差异蛋白。因此，本专利技术第一个目的是提供一种适于分离血清中蛋白多肽的SPE-C 系统，包含适用于SPE-C磁珠的平衡缓冲液、结合缓冲液、清洗缓冲液、 洗脱液，其中洗脱液为0.1%-3%的TFA，而平衡缓冲液、结合缓冲液和清 洗缓冲液组选自0.001-2M， pH为7.0-9.0的Tris-HCL缓冲溶液；或0.001-2M, pH为9.0-11.0的碳酸盐缓冲溶液；或0.001-2 M， pH为2.0-6.0的醋酸盐缓冲溶液；或0.001-2 M， pH为2.0-6.0的甘氨酸缓冲液;或0.001-2M， pH为2.0-6.0的邻苯二甲酸缓冲液；或0.001-2 M， pH为2.0-7.0的柠檬酸盐缓冲溶液；或0.001-2M, pH为7.0-9.0的TBS缓冲溶液；或0細隱2M， pH为2.0-7.0的TE缓冲溶液;或0.001-2M， pH为7.0-9.0的STE缓冲溶液；或0.001-2M， pH为2.0-8.0的PBS缓冲溶液；或0.001-2M， pH为7.0-9.0的SSC缓冲溶液；或0.001-2M， pH为7.0-9.0的SSPE缓冲溶液。在一个具体实施方案中，平衡缓冲液选自0.25M， pH2-6的柠檬酸盐、 PBS、醋酸盐、甘氨酸、邻苯二甲酸或者TE缓冲溶液；结合缓冲液选自0.15M， pH2-6的柠檬酸盐、PBS、醋酸盐、甘氨酸、 邻苯二甲酸或者TE缓冲溶液；清洗缓冲液选自0.35M， pH2-6的柠檬酸盐、PBS、醋酸盐、甘氨酸、 邻苯二甲酸或者TE缓冲溶液。本专利技术第二个目的是提供上述SPE-C系统所制备的用于分离血清中蛋白多肽的SPE-C试剂盒。在一个具体实施方案中，所述的SPE-C试剂盒包含用于结合分离血清 中蛋白多肽的磁珠，其中磁珠优选是SPE-C磁珠。本专利技术第三个目的是提供SPE-C系统或试剂盒，用于分离血清中蛋白 多肽的用途。在一个具体实施方案中，所述的用途包括步骤如下(1) 将试剂盒中的SPE-C磁珠平衡处理，磁性分离，弃上清；(2) SPE-C磁珠在结合缓冲液中与血清中蛋白、多肽发生特异性结合，磁 本文档来自技高网...
【技术保护点】
ＳＰＥ－Ｃ系统，包含适用于ＳＰＥ－Ｃ磁珠的平衡缓冲液、结合缓冲液、清洗缓冲液、洗脱液，其中洗脱液为０．１％－３％的ＴＦＡ，而平衡缓冲液、结合缓冲液和清洗缓冲液组选自： ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为９．０－１１．０的碳酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－６．０的醋酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－６．０的甘氨酸缓冲液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－６．０的邻苯二甲酸缓冲液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－７．０的柠檬酸盐缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＴＢＳ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－７．０的ＴＥ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＴＥ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为２．０－８．０的ＰＢＳ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＳＣ缓冲溶液；或 ０．００１－２Ｍ，ｐＨ为７．０－９．０的ＳＳＰＥ缓冲溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，冷雪娟，马庆伟，于中连，胡晓慧，张永婵，王岚，吕萍萍，
申请(专利权)人：毅新兴业北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：43
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