高密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂技术

本发明专利技术公开了一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂，它是用聚乙烯硫酸盐和表面活性剂与极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ）结合掩蔽，高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）不受掩蔽，并受胆固醇脂酶（ＣＥＨ）、胆固醇氧化酶（ＣＯＤ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）作用，在一定的波长处测得吸光度与高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）含量成正比，而求得高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）含量。按该方法及试剂，能够直接测定、无须标本前处理、不须沉淀和离心、不堵塞管道、稳定性强，在２至８度温度下贮存，能稳定一年以上，并且，特别适合进行批量自动分析，测定结果受外界干扰小，它对满足医院快捷、准确的要求具有十分积极的现实意义。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种高密度脂蛋白胆固醇的测定方法及试剂。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是动脉粥样性质病的保护因子，是心血管疾病的预防和危险评估的一个重要指标。HDL-C的测定，国内普遍采用磷钨酸-镁沉淀法，此法需预先处理、沉淀分离非HDL脂蛋白组份，再吸取高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)组份，整个分离过程采用吸管吸取样品，操作误差大(对不同的操作人误差更大)，血清标本预处理时间长达30分钟，不适合进行批量自动分析，无法满足医院快捷、准确的要求，近年来，国外也开发了一些在自动生化分析仪上使用的HDL-C直接测定试剂，他们常用硫酸葡聚糖、肝素、磷钨酸、聚乙二醇、环湖精、低聚糖等二价金属离子来掩蔽HDL脂蛋白外的脂蛋白组份，再进行DHL-C检测。在这些方法中，常用高浓度的镁离子和上述聚阴离子、糖化合物、非HDL脂蛋白形成的书絮状混合物，当检测完毕，检测废液被排出，其过程中易与排液管道中的其他碱性废液形成氢氧化镁而发生沉淀，引起管道堵塞，容易对自动分析仪造成不良影响(如总蛋白试剂废液含高浓度的氢氧化纳)。本专利技术的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种使试剂能够直接测定、无须标本前处理、不须沉淀和离心、不堵塞管道、稳定性强，测定结果受外界干扰小的高密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂。为了达到上述目的，本专利技术所设计的高密度脂蛋白胆固醇测定方法，是用聚乙烯硫酸盐和表面活性剂与极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)结合掩蔽，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)不受掩蔽，并受胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)作用，根据不同敏感的显色剂，在波长546nm至700nm内选择确定的波长处测得吸光度与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量成正比，而求得高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。为了提高测定的精确度，该方法所采用的测定试剂包括胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)、过氧化物酶(POD)、缓冲液和表面活性剂，在测定试剂中还可含有聚乙烯硫酸盐。为了得到最为理想的检测效果，本专利技术提供的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂，特别可以分为两个组份A、B，胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)可以全部设在A组份中，也可以全部设在B组份中或A、B组份中分别设置；A、B组份的其它成份组成是A组份缓冲液5-500mmol/L聚乙烯硫酸盐 0.5mg/L-5000mg/L中性多聚物0.1mg/L-500mg/L显色剂0.1mmol/L-10mmol/L防腐剂0.01g/L-5g/L稳定剂0.01mmol/L-200mmol/L表面活性剂0.05-50g/L去干扰剂 0.005-20mmol/LB组份缓冲液5-500mmol/L4-氨基安替比林0.05-1g/L表面活性剂0.01-20ml/L稳定剂0.005-50g/L防腐剂0.01-5g/L为了提高其稳定性，消除测定结果在测定过程中受外界的多种干扰，所述的表面活性剂可以是非离子表面活性剂聚氧乙烯类表面活性剂Brij聚氧乙烯月桂基醚系列、Tween失水山梨醇聚氧乙烯系列、TritonX-100、乳化剂OP、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚等，也可以是两性离子表面活性剂EMPIGEN BB，另外，也可以用胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、SDS、聚乙二醇，在此，特别选用聚氧乙烯类表面活性剂。表面活性剂的用量因具体不同成份而定，不须特别限制。去干扰剂可以是EDTA.Fe3+、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾；稳定剂可以是BSA、聚乙二醇、多元醇、EDTA。2Na、二价金属离子、抗生素；防腐剂可以是NaN3、PC-300；显色剂可以是酚或酚的衍生物TOOS、TOPS、TODB、MADB；缓冲液可以是GOOd‘S系列缓冲液、Tris、磷酸盐；再者，为了更好提高选择性作用，在所述的测定试剂中还可设有0.01-5g/L硫酸葡聚糖，这样，无须高浓度的金属离子，就不易堵塞管道。另外，为了对HDL选择作用更好，在测定试剂中还可设有0.05-5g/L的硫酸葡聚糖。本专利技术所得到的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂，使试剂能够直接测定、无须标本前处理、不须沉淀和离心、不堵塞管道、稳定性强，在2至8度温度下贮存，能稳定一年以上，并且，特别适合进行批量自动分析，测定结果受外界干扰小，这种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂对满足医院快捷、准确的要求具有十分积极的现实意义。下面通过实施例对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术绝不限于以下的实施例或被这些实施例所限。A组份PH6.5缓冲液MES 100mM聚乙烯硫酸钾盐 5ml/L中性多聚物PEGME 1.2mg/l防腐剂NaN3 0.9g/L4-氨基安替比林 0.3g/L稳定剂EDTA-2Na 0.1mmol/LBSA1g/L表面活性剂PEG600020g/LBrij35 0.3g/L去干扰剂亚铁氰化钾 0.05mmol/L抗坏血酸氧化酶 5000U/LB组份PH7.0缓冲液MES 50mM显色剂TOOS 1.5mmol/LCEH 2000U/LCOD 5000U/LPOD 20KU/L表面活性剂胆酸钠 3mmol/LTriton X-100 0.3ml/L稳定剂MgCl2 5mmol/LEDTA.2Na 0.5mmol/LBSA2g/L防腐剂NaN3 0.6g/L本实施例描述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的自动生化分析仪，如日立7060自动分析仪，操作如下 计算HDL-C(mmol/L)＝C标准*(ΔA测定/ΔA标准)A组份PH7.0缓冲液PIPES50mM聚乙烯硫酸钾盐 5ml/L中性多聚物PEGME 1.2mg/l显色剂TOOS 1.5mmol/L防腐剂NaN3 0.9g/L稳定剂EDTA-Fe3+ 0.5mmol/LBSA 1g/L表面活性剂PEG6000 20g/LBrij350.3g/L去干扰剂亚铁氰化钾 0.05mmol/LB组份PH7.0缓冲液PIPES200mM4-氨基安替比林 0.3g/LCEH 2000U/LCOD 5000U/LPOD 20KU/L表面活性剂胆酸钠3mmol/LTriton X-100 0.3ml/L稳定剂MgCl2 5mmol/LEDTA.2Na 0.5mmol/LBSA 2g/L防腐剂NaN3 0.6g/L稳定剂EDTA-Fe3+ 0.5mmol/LBSA 1g/L表面活性剂PEG6000 20g/L去干扰剂亚铁氰化钾 0.05mmol/LEMPIGEN BB 0.3g/LCEH 850U/LCOD 2000U/LPOD 1KU/L稳定剂MgCl2 10mmol/LB组份PH7.0缓冲液PIPES100mM4-氨基安替比林 0.3g/L表面活性剂胆酸钠3mmol/LTriton X-100 0.3ml/LBrij350.3g/L稳定剂EDTA.2Na 0.5mmol/L防腐剂NaN3 0.6g/L4-氨基安替比林 0.3g/L防腐剂NaN3 0.6g/LCEH 2000U/L稳定剂MgCl2 5mmol本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高密度脂蛋白胆固醇测定方法，其特征是用聚乙烯硫酸盐和表面活性剂与极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ）结合掩蔽，高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）不受掩蔽，并受胆固醇脂酶（ＣＥＨ）、胆固醇氧化酶（ＣＯＤ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）作用，根据不同敏感的显色剂，在波长５４６ｎｍ至７００ｎｍ内选择确定的波长处测得吸光度与高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）含量成正比，而求得高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）含量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖洪武，
申请(专利权)人：肖洪武，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]