高密度脂蛋白(HDL)胆固醇测定用试件制造技术

本发明专利技术涉及结构简单，用少量的被测体量就可以简单测定ＨＤＬ胆固醇的试件。在支撑体（１）上形成试剂层（２），在该试剂层（２）上含有胆固醇测定用酶试剂、与高密度脂蛋白（ＨＤＬ）以外的脂蛋白相比对ＨＤＬ的可溶化性能高的第１表面活性剂和阻碍ＨＤＬ以外的脂蛋白溶解的第２表面活性剂。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定高密度脂蛋白(HDL)胆固醇的试件。
技术介绍
HDL胆固醇从所谓的和冠状动脉疾病的发病频率反相关的流行病学观点看，在健康诊断和临床医疗的检查等中，是重要的测定项目之一。另一方面，在临床检查等中，由于需要处理大量的被测体，因而广泛使用将试剂浸渍到滤纸等中并将其干燥的试件。作为HDL胆固醇的测定方法，例如有下述方法，即通过超离心分离，将HDL和其它的脂蛋白(例如LDL、VLDL等)分离后，用酶只测定HDL胆固醇的方法。另外，也有通过电泳从其它脂蛋白分离HDL后，进行脂质的染色，测定其显色强度的方法。这些是一般的方法，操作烦杂，处理大量被测体困难，因而在临床检查等中没能实施。因此，提出了各种可以处理大量被测体的HDL胆固醇的测定方法，一部分已经实施。这些方法如下所示。例如，将胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶进行化学修饰，在环糊精等包合化合物存在下，特异性捕捉HDL中的胆固醇的方法(特开平7-301636号公报)。另外，还有在被测体中添加凝集剂，使除HDL之外的脂蛋白凝集沉淀，测定存在于上清液中的HDL胆固醇的方法(例如，特开平8-131197号公报，专利第2600065号公报，特开平8-201393号公报，专利第2799835号公报)。另外，还有使用表面活性剂，制作HDL胆固醇和酶特异性反应的时间，在该时间带中，测定HDL胆固醇的方法(特开平11-56395号公报)。但是，这些是液体体系的测定方法，不能直接应用于作为干燥体系的测定方法的试件中。作为采用试件的测定方法，有利用前述凝集反应的测定方法(特开平2-210265号公报，特开平3-99268号公报等)。但是，用这些方法，需要过滤分离等机构，试件的结构变得复杂，另外，还存在需要大量被测体的问题。专利技术公开本专利技术是鉴于这样的事实而作出的，其目的在于提供一种结构简单，用少量的被测体就可以简单测定HDL胆固醇的试件。为了达到前述目的，本专利技术的HDL胆固醇测定用试件是具有胆固醇测定用酶试剂、与高密度脂蛋白(HDL)以外的脂蛋白相比对HDL的可溶化性能高的第1表面活性剂和阻碍HDL以外的脂蛋白溶解的第2表面活性剂的试件。这样，本专利技术的试件通过具有前述2种表面活性剂，从而可以用胆固醇测定用酶试剂简单地、特异性地测定HDL胆固醇。另外，该试件由于不利用凝集反应等特殊的反应，所以无需采取特别的结构，可以是简单的结构，也可以采用少量被测体。本专利技术的试件例如可以采取下述结构，即在支撑体上形成试剂层，该试剂层具有前述酶试剂、前述第1表面活性剂和前述第2表面活性剂这样的结构。此时，也可以是前述试剂层具有试样供给层和检测层，前述试样供给层具有前述第1表面活性剂和第2表面活性剂，前述检测层具有前述酶试剂这样的结构。进一步，优选在前述试样供给层内部，在其上部(上层)具有前述第2表面活性剂，在其下部(下层)具有前述第1表面活性剂的结构。另外，也优选前述试样供给层具有前述酶试剂的一部分、前述第1表面活性剂和前述第2表面活性剂，前述检测层具有前述酶试剂残余部分的结构。前述第1表面活性剂优选聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚，它们可单独使用，也可以合并使用。其中，更优选的是聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚。前述第2表面活性剂优选聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐和烷基苯磺酸盐，它们可以单独使用，也可以2种以上合并使用。其中，更优选的是聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物。前述酶试剂优选胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的组合，或者胆固醇酯酶和胆固醇脱氢酶的组合。更优选的是前者的组合。添加试样，和试剂混合时的胆固醇酯酶的比例，例如是5～1000U/mL的范围，优选10～100U/mL的范围，更优选30～70U/mL的范围。酶反应时的全部成分中的胆固醇氧化酶的比例，例如是5～1000U/mL的范围，优选10～100U/mL的范围，更优选20～50U/mL的范围。酶反应时的全部成分中的胆固醇脱氢酶的比例，例如是5～1000U/mL的范围，优选10～100U/mL的范围，更优选30～70U/mL的范围。另外，作为使用的酶，可以使用市售的酶，其中，鉴于本专利技术的反应原理，优选使用例如不含有阻碍一系列反应的杂质(例如，损害第1表面活性剂或第2表面活性剂特性的物质)等的纯正品或者基因重组制品等。另外，在本专利技术中，所谓酶反应时的全部成分中的比例是指添加被测体(试样)时全部成分中的比例，所谓全部成分是指前述试样、前述酶试剂、前述第1表面活性剂和前述第2表面活性剂等酶反应时存在的全部成分。通常，一被测体的量可以根据其种类来预测或者决定。酶反应时的全部成分中的前述第1表面活性剂的比例优选1～10质量％的范围，更优选3～7质量％的范围。另外，酶反应时的全部成分中的前述第2表面活性剂的比例优选1～20质量％的范围，更优选7～13质量％的范围。另外，这些比例和液体体系的情况相比较，浓度相当高。前述第1表面活性剂(A)和前述第2表面活性剂(B)的质量比(A/B)优选1/10～1/1的范围，更优选1/3～2/3的范围。另外，优选调整本专利技术的试件，使酶反应时的pH达到pH6～9的范围。前述pH更优选的范围是pH7～8的范围，最佳是pH7.7。对成为本专利技术试件的测定对象的被测体没有特别的限制，例如全血、血浆、血清等可能含有HDL胆固醇的被测体(特别是生物学液体)。附图说明图1(A)是表示本专利技术试件的一个例子的结构的剖面图，图1(B)是表示本专利技术试件的另外一个例子的结构的剖面图，图1(C)是表示本专利技术试件的再一个例子的结构的剖面图。图2是表示本专利技术试件的再一个例子的反射率的时间经过的图。图3是表示本专利技术试件的再一个例子的HDL胆固醇测定值和凝集法测定值的相关关系的图。图4是表示本专利技术试件的再一个例子的HDL胆固醇测定值和直接法测定值的相关关系的图。实施专利技术的最佳方式下面，对于本专利技术的试件，举例进行说明。首先，本专利技术中使用的胆固醇测定用酶试剂可以列举例如前述的2个组合，优选胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的组合。即，对于HDL胆固醇，由于通常在生物体内分类为游离型状态以及和脂肪酸进行酯结合的状态二种，所以通过胆固醇酯酶将后者水解为胆固醇和脂肪酸。然后，用胆固醇氧化酶处理生成的胆固醇，则生成胆甾烯酮和过氧化氢。然后，测定该过氧化氢，则可以求出HDL胆固醇量。过氧化氢的测定有电化学测定或者化学测定，但优选采用过氧化酶(POD)以及若氧化则显色的基质(下面称为“氧化显色性基质”)的化学测定。此时，可以用光学手段测定前述氧化显色性基质的显色。因而，此时在前述酶试剂中就会包含POD和氧化显色性基质。酶反应时的全部成分中的POD的比例例如是50～5000U/mL的范围，优选100～1500U/mL的范围，更优选700～800U/mL的范围。酶反应时的全部成分中的前述氧化显色性基质的比例可以根据其种类等适当确定，例如是10～1000mmol/L的范围，优选20～200mmol/L的范围，更优选30～70mmol/L的范围。作为前述氧化显色性基质，例如ALPS、DAOS、MAOS、TOOS、苯酚等，可以从其中适当选择呈现和测定仪器使用的波长一致的显色的基质。前述第1表面活性剂只要是和HDL以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＨＤＬ胆固醇测定用试件，具有胆固醇测定用酶试剂、与高密度脂蛋白（ＨＤＬ）以外的脂蛋白相比对ＨＤＬ的可溶化性能高的第１表面活性剂和阻碍ＨＤＬ以外的脂蛋白溶解的第２表面活性剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：田村浩，西野进，山口武广，日野浩一，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，第一化学药品株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]