一种唾液酸酶测定试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种用于体外测定阴道分泌物中唾液酸酶活性的唾液酸酶测定试剂，它包括分散在载体中的底物，所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。所述的乙酰基神经氨酸类及其盐可以是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物，也可以是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐、５－溴－４－氯－３－吲哚基－α－Ｄ－Ｎ－乙酰神经氨酸及其盐。这种唾液酸酶测定试剂，可以灵敏、快速、简易的通过对阴道分泌物中唾液酸酶的检测来诊断细菌性阴道病，可作为独立诊断指标，试剂稳定性强，准确性极高，检测重现性好，操作简单（一步法检测），适宜普及，在ＢＶ诊断中具有广阔的应用前景，对于保护广大妇女身体健康、提高生育水平具有极大的实用价值。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于体外测定阴道分泌物中唾液酸酶活性的测定试剂，也即一种唾液酸酶测定试剂。鉴于BV对妇女及其妊娠的危害性，在妇科、产科以及施行外科流产术前进行BV检查具有十分重要的意义。同时在临床上对BV也有了更为严格的定义，即符合以下4项指标中的3项可诊断为BV(1)阴道pH＞4.5；(2)阴道分泌物增多，变稀如奶状，有异味；(3)胺试验(Whiff)阳性，即在阴道分泌物中加入10％KOH产生鱼腥味；(4)阴道涂片中可见线索细胞。以上即为传统的Amsel诊断方法，称为“金标准”。80年代后期，人们发现了BV与阴道中特有的微生物的代谢产物有关，并依此研究出一系列新的BV诊断技术和方法。在BV的诊断方面，临床上最为普遍采用的方法有传统的Amsel方法，然而要在实际中准确实施并非易事。首先，一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道pH值升高，或使分泌产生异味；胺试验中对气味的鉴别因人而异；而对于作BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响，主观性强，因而很难对判定结果进行统计和比较。阴道分泌物培养由于BV是阴道中乳酸杆菌与其他多种菌群间的平衡失调所致，BV发病是混合感染，因此对单一种类细菌的分离培养在BV的诊断中意义不大，必须同时结合临床表现方能作出判断。在一些与BV密切相关的细菌的培养试验中，不是特异性差就是敏感性不好。革兰染色方法其敏感性为62％～100％，阳性准确率为76％～100％，脱落细胞巴氏染色法与革兰染色方法具有极好的一致性，但特异性不如后者，结果判断标准尚未被正规应用。以上两种染色方法在应用中的准确性均依赖于操作者的经验以及熟练程度。寡核苷酸探针法这是一种检测高浓度gardnerella vaginalis的快速试验方法。其优点在于良好的特异性，并且可以针对菌落浓度的高低不同来调整其敏感性。它为一些显微技术和设备不完善的实验室提供了选择。为了达到上述目的，本专利技术所提供的一种唾液酸酶测定试剂，包括分散在载体中的底物，所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。所述的乙酰基神经氨酸类及其盐可以是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物，也可以是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰神经氨酸及其盐。所述载体可以是蒸馏水，即可将所述的底物溶解于蒸馏水中成为唾液酸酶测定试剂，也可以是PH范围在3-10(优选范围为5-7)、离子强度在5-100mM(优选范围在10-45mM)的缓冲液。即可将所述的底物溶解于PH范围在3-10(优选范围为5-7)、离子强度在5-100mM(优选范围在10-45mM)的缓冲液中成为唾液酸酶测定试剂。所述的载体也可以是固体物，将所述的乙酰神经氨酸类及其盐的底物充分溶解，溶解后的乙酰神经氨酸类及其盐溶液涂于固体载体上固定，如涂于纸上，干燥之后成为唾液酸酶测定试剂。这种唾液酸酶测定试剂的测试方法，可以是在检测时取样品与含乙酰神经氨酸类及其盐的载体的唾液酸酶测定试剂接触，充分混合摇匀，于37℃温浴20分钟之后，观察棉拭子的颜色变化，拭子由兰灰色至紫褐色，且在1小时内不褪色判定为阳性，20分钟不变色则判定为阴性。研究表明，阴道分泌物中唾液酸酶活性与BV之间存在一定的量的关系，患BV的妇女，其阴道分泌物中含有产生唾液酸酶的细菌，无BV的妇女阴道分泌物中不显示异常的唾液酸酶活性。细菌性唾液酸酶可以作用于各种天然和合成的唾液酸糖接合底物，通过底物的分解显色或颜色的改变来指示唾液酸酶的活性高低。本专利技术即根据此原理研制而成，选以百里酚酞乙酰基神经氨酸或其盐类为底物，检测时取样品与含该底物试剂接触，充分混合摇匀，于37℃温浴20分钟之后，观察棉拭子的颜色变化，拭子由兰灰色至紫褐色，且在1小时内不褪色判定为阳性，20分钟不变色则判定为阴性，此过程无须特殊仪器设备和另外的试剂，劳动强度小，结果判定清晰明了(色差明显)，与其它方法及类似产品相比，本专利技术由于采用的是唾液酸酶而不是多胺等其它生化标志物，能检测5种BV中的4种，可作为独立诊断指标，试剂稳定性强，准确性极高，检测重现性好，操作简单(一步法检测)，适宜普及，在BV诊断中具有广阔的应用前景。对于保护广大妇女身体健康、提高生育水平具有极大的实用价值。细菌性阴道病(BV)感染与阴道分泌物中唾液酸酶的活性和阴道中存在的厌氧菌的代谢产物组织多胺有密切关系。唾液酸酶活性与组织多胺量的变化都表示着BV患者不同程度的感染，这两项指标是目前检测BV最有效和最准确的。临床“金标准”诊断方法(即Amsel法)为1.阴道分泌物均匀、变稀；2.PH＞4.5；3.胺试验阳性；4.细胞涂片有线索细胞。以上四现特征中的三项出现阳性就可诊断BV。为更好的说明试剂的性能，供下列实施数据作参考选取300例患者样品，做验证试剂盒(本试剂盒)和临床“金标准”诊断方法的检测。另取一支棉拭子测白带PH值试纸检测范围为3.8-4.5(北京化工厂生产)。白带涂于试纸上半秒钟后，立即检查结果。胺试验在同一上述棉拭子上滴两滴10％KOH(北京化工厂生产)后立即检查。通过上述两方法比较用Amsel方法诊断出BV阳性的103例样本中，本专利技术也检测出阳性103例，二者的阳性符合率为100％(103/103)；用Amsel方法诊断出BV阴性的197例样本中，本专利技术也检测出阴性197例，阴性符合率为100％(197/197)，总符合率为100％(300/300)。见表一 表一本专利技术与Amsel方法比较临床验证结果表(单位例)结论本专利技术与Amsel法比较，以Amsel法为标准。本专利技术的灵敏度(真阳性率)为100％(103/103)。特异度(真阴性率)为100％(197/197)。假阳性率为0％(0/197)。假阴性率为0％(0/103)。从以上对300例临床标本的比较结果看，本专利技术的灵敏度、特异性与临床“金标准”一致。且具有操作简单，检测时间短、直观等特点。为了进一步说明乙酰神经氨酸类及其盐的使用，本专利技术的唾液酸酶测定试剂举例如下，但该实施例不局限本专利技术的内容。权利要求1.一种唾液酸酶测定试剂，包括分散在载体中的底物，其特征是所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。2.根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物。3.根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐。4.根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰神经氨酸及其盐。5.根据权利要求1或2或3或4所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述载体是蒸馏水，可将所述的底物溶解于蒸馏水中。6.根据权利要求1或2或3或4所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述载体是PH范围在3-10、离子强度在5-100mM的缓冲液。可将所述的底物溶解于PH范围在3-10、离子强度在5-100mM的缓冲液中。7.根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的载体是固体物，将所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种唾液酸酶测定试剂，包括分散在载体中的底物，其特征是所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖洪武，
申请(专利权)人：肖洪武，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]