本发明专利技术公开了一种联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，由显色剂和参比品液组成，其中，显色剂是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2，4-二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸、苯甲酸和水组成的，各组分的浓度如下：邻苯二甲酸二乙酯0.35mol/L；乙酸乙酯0.46mol/L；2，4-二硝基苯肼0.07mol/L；过氧化氢0.006mol/L；盐酸0.62mol/L；苯甲酸0.2％；参比品液是由唾液酸、L-羟脯氨酸、对羟基苯甲酸甲酯和水组成的。本发明专利技术通过一次反应使多种肿瘤标志物(唾液酸、羟脯氨酸)反应显色，由于显色迭加，因而提高了检测的灵敏度，顺应了肿瘤标志物联合检测的潮流，并且操作简便，无须贵重仪器。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于医学检验
技术介绍
唾液酸，又称N-乙酰神经氨酸，是一种天然神经氨酸衍生物，其母体结构是由九 个碳原子组成的内环氨基酸，是一族化合物的总称。唾液酸广泛分布于动物体内，人体血清 中唾液酸，包括游离唾液酸和结合唾液酸，其中前者含量较低，与脂蛋白和糖蛋白结合的结 合唾液酸为血清中唾液酸的主要存在形式。羟脯氨酸，是一种亚氨基酸，为脯氨酸羟化后的 产物，通常在第4位上带有羟基，但有时也在第3位上。由于有两个不对称的碳原子，所以 有4种立体异构体。在自然界中天然存在的为L-羟脯氨酸，不存在D-羟脯酸。L-羟脯氨 酸是胶原蛋白所特有的氨基酸，其它蛋白含量甚微，人体血清中的羟脯氨酸主要为胶原蛋 白降解时释放出的游离羟脯氨酸。 正常代谢时，人体血清中唾液酸、羟脯氨酸含量稳定。当组织细胞发生恶变时，细 胞表面糖蛋白在结构和功能上均发生明显改变，结合在糖蛋白上的唾液酸随异常表达的糖 蛋白脱落入血，是血液中唾液酸含量升高的原因之一。而血清羟脯氨酸升高是因为在肿瘤 发生、发展过程中，肿瘤细胞发生浸润、转移，破坏胶原组织、弹性蛋白甚至于骨组织，导致 羟脯氨酸释放增加所致。目前多项研宄发现，肿瘤患者血清中唾液酸、羟脯氨酸含量增加， 因此在临床检验中常把唾液酸、羟脯氨酸作为检测指标，用于恶性肿瘤的诊断当中。 目前唾液酸的检测方法主要有酶法、化学比色法和高效液相色谱法。但酶法测定 敏感性较低，而化学比色法特异性差，高效液相色谱方法虽具有灵敏度高、特异性好的优 点，但是仪器昂贵且不适合临床批量检测。羟脯氨酸的检测方法主要有化学比色法、高效液 相色谱法、氨基酸自动分析仪法。氯胺T比色法是羟脯氨酸传统的测定方法，但该方法特异 性差、灵敏度低，目前已应用不多。高效液相色谱法、氨基酸自动分析仪法检测羟脯氨酸则 同杆存在仪器昂贵，检测不方便等问题，限制了临床批量应用。 由此可见，虽然目前唾液酸、羟脯氨酸各自的检测方法较多，但均存在各种问题， 无法常规应用于临床，更是缺乏两者联合检测的方法，因而探寻一种快速、准确、成本低廉、 方便适用的唾液酸、羟脯氨酸联合检测的方法，对于提高肿瘤诊断的敏感性、特异性具有重 要意义。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术所要解决的问题是提供一种快速、准确、成本低廉、方 便适用的联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，及其检测方法。 本专利技术是通过以下技术方案实现的： 一种联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，由显色剂和参比品液组成，其中，显色剂 是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2,4-二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸、苯甲酸和水组成的， 其中，各组分的浓度如下：【主权项】1. 一种联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，其特征在于：由显色剂和参比品液组成， 其中，显色剂是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2,4-二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸、苯甲酸 和水组成的，各组分的浓度如下： 邻苯二甲酸二乙酯 0.35mol/L 乙酸乙酯 0. 46 mol/L 2, 4-二硝基苯肼 0. 07 mol/L 过氧化氢 0. 006 mol/L 盐酸（氯化氢） 0.62 mol/L 苯甲酸 0.2% (质量百分数） 参比品液是由唾液酸、羟脯氨酸、对羟基苯甲酸甲酯和水组成的，各组分的浓度如下： 唾液酸 〇. 3g/L 羟脯氨酸 0. 25g/L 对羟基苯甲酸甲酯0.2% (质量百分数）。2. 利用权利要求1所述的联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂检测唾液酸、羟脯氨酸的 方法，其特征在于：取样品，加入显色剂，充分混匀，置沸水浴（能够保持持续沸腾）中准确 反应15分钟，迅速取出置于室温水（< 25°C )中冷却5分钟，终止反应；以3000转/分离 心10分钟，取上清液，测量在波长450nm、光径0. 5cm处的吸光度值，以蒸馏水调零；同时， 对参比品液进行同样的操作，参比品液理论值为lOOU/ml ;根据以下公式计算检测值：【专利摘要】本专利技术公开了一种联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，由显色剂和参比品液组成，其中，显色剂是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2，4-二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸、苯甲酸和水组成的，各组分的浓度如下：邻苯二甲酸二乙酯0.35mol/L；乙酸乙酯0.46mol/L；2，4-二硝基苯肼0.07mol/L；过氧化氢0.006mol/L；盐酸0.62mol/L；苯甲酸0.2％；参比品液是由唾液酸、L-羟脯氨酸、对羟基苯甲酸甲酯和水组成的。本专利技术通过一次反应使多种肿瘤标志物(唾液酸、羟脯氨酸)反应显色，由于显色迭加，因而提高了检测的灵敏度，顺应了肿瘤标志物联合检测的潮流，并且操作简便，无须贵重仪器。【IPC分类】G01N21-78【公开号】CN104730070【申请号】CN201510120981【专利技术人】邢海霞, 曲晓燕 【申请人】邢海霞【公开日】2015年6月24日【申请日】2015年3月19日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种联合检测唾液酸和羟脯氨酸的试剂，其特征在于：由显色剂和参比品液组成，其中，显色剂是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2，4‑二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸、苯甲酸和水组成的，各组分的浓度如下：参比品液是由唾液酸、羟脯氨酸、对羟基苯甲酸甲酯和水组成的，各组分的浓度如下：唾液酸 0.3g/L羟脯氨酸 0.25g/L对羟基苯甲酸甲酯 0.2％(质量百分数)。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邢海霞，曲晓燕，
申请(专利权)人：邢海霞，
类型：发明
国别省市：山东;37
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