一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法。将考马斯亮蓝法应用到纤维中蛋白质的定性检测中，利用蛋白质与考马斯亮蓝G-250间的快速显色反应及蛋白质-色素结合物在595nm具有最大吸收波长的特点，对纤维进行是否含有蛋白质进行定性鉴别。检测步骤包括制备考马斯亮蓝溶液，制备纤维样品溶液，样品中蛋白质的定性鉴别。检测过程简单快速，2min即可产生显色反应，继而进行分光光度测试，30min完成测试。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于纺织材料检验

技术介绍
目前纤维定性使用的国内标准很多，标准FZ/T01057. 1-2007规定纺织纤维 鉴别试验方法的一些共同性的技术要求，给出了纤维鉴别试验的一般性程序。FZ/ T01057. 2-2007是根据纤维燃烧时的气味、残留物的状态来分辩的。FZ/T01057. 3-2007根 据纤维的外观形态包括纵向和横向形态来分辩的。FZ/T01057. 4-2007根据纤维在不同溶液 中的溶解性来分辩的。FZ/T01057. 5-2007根据纤维的染色性来分辩的。FZ/T01057. 6-2007 根据不同的纤维其熔点不同来分辩的。FZ/T01057. 7-2007根据不同的纤维的密度不同来分 辩的。GB/T16988-1997标准给出了各种毛纤维的纵向形态，通过在显微镜下观察其鳞片的 大小、厚度、密度、条干均匀度等加以区分。此外，还有SN/T相关标准中对新型纤维的定性 检测方法。除了以上的标准方法外，还有一种非常规的纤维定性方法，就是手感目测法。然 而随着纺织面料的纤维组分越来越多，由原来的单、双组分向多组分发展、由交织向混纺发 展。鉴别纤维成分的难度相应提高。因此，需要增加新的纤维鉴别手段、加强纤维检验技术 领域中新的检测方案的制定方能跟上纺织品发展的趋势。 采用生物化学与分子生物学中最新发展起来的一种测定蛋白质的方法一一考马 斯亮蓝法对蛋白质纤维中的蛋白质进行定性检测，考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结 合的原理设计的。考马斯亮蓝G-250是一种有机染料，在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中 与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合后变成蓝色，其最大吸收波长从465nm变 成595nm，蛋白质在1~1000 μ g范围内，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的吸光度与 蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定性与定量测定。该方法具有灵敏度高、测定快速、 简便，干扰物质少等突出优点，是鉴别纤维中是否含蛋白质或蛋白质纤维方法的新突破。
技术实现思路
本专利技术旨在提供。 本专利技术所采用的定性检测技术方案为： 步骤1 :考马斯亮蓝G-250溶液的制备。 精密称取考马斯亮蓝6-25〇1〇〇.〇〇11^，加入95%乙醇5〇1^，再加入1〇〇1^85%0￥/ V)磷酸，用蒸馏水稀释定容至lOOOmL。 步骤2 :纤维样品洛液的制备。 ①精密称取待测纤维样品X g于试管中，于20°C时用l.Omol/L次氯酸钠 y mL将 样品溶解。 ②将溶解样品包含未溶解纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/ min，时间为10min。待离心完毕后，用移液器移取z mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水 至刻度，混合均匀。 ③从容量瓶中分别取出1.0 mL的样品于另外4个试管中，分别加入5. OmL考马斯 亮蓝溶液，混匀。 步骤3 :样品中蛋白质的定性鉴别。 ①任取其中2个试管于2~30min内观察溶液颜色变化，如果考马斯亮蓝溶液由 红色转变为蓝色，说明纤维中可能含有蛋白质，如果颜色转化不明显，也不能说明纤维中不 含蛋白质，均需进行进一步分光光度测试。 ②将剩余2个试管中的溶液以空白试剂为参照，分别测定其最大吸收波长Xmax。 如果最大吸收波长是595nm或在其附近，那么结合考马斯亮蓝溶液由红色转变为蓝色的显 色现象，在排除干扰物的前提下说明该纤维中含有蛋白质。还可以根据最大吸收波长下的 吸光度值以及待测溶液的稀释倍数推断蛋白质含量的高低。 测试完毕，对结果进行记录、分析。 专利技术中分光光度测试所用的比色皿应该是塑料或玻璃的，用前应保证清洗干净， 禁止使用石英比色皿。 专利技术中考马斯亮蓝法鉴别纤维中是否含有蛋白质，比其他方法灵敏度高，抗干扰 小，但检测仍有一些物质干扰此法的测定、如Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS)等，因 此，被测纤维样品应先充分皂洗、水洗后再进行溶解测试。 专利技术中利用蛋白质与考马斯亮蓝G-250间的快速显色反应及蛋白质-色素结合物 在595nm具有最大吸收波长的特点，建立了蛋白质的光学分析技术，对纤维进行是否含有 蛋白质的定性鉴别。测定过程简单快速，2min即可产生显色反应，30min完成测试。【具体实施方式】 以下结合具体实施例对本专利技术进一步描述，这些实施例只为清楚公开本专利技术，但 本专利技术的保护范围并不仅限于此。 实施例1 :对已知蛋白质纤维一一羊毛进行测试。 按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品 〇. Ig于试管中，于20°c时用1.0 mol/L次氯酸钠 IOmL将样品溶解；将溶解样品包含未溶解 纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为lOmin，待离心完毕后，用 移液器移取1.0 mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀；从容量瓶中分别取 出ImL的样品于另外4个试管中，分别加入5mL考马斯亮蓝溶液，混匀；其中2个试管，2min 后颜色发生显著变化，由红色转变为蓝色；另外2个试管中的溶液经分光光度仪测试，最大 吸收波长都是595nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最 大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量高，这与羊毛纤维 含有蛋白质的性质相吻合。 实施例2 :对已知蛋白质纤维一一蚕丝进行测试。 采用实施例1中的测试过程，对蚕丝进行测试。2min后显色反应非常明显，最大吸 收波长都是594nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最大 吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量高，这与蚕丝纤维含 有蛋白质的性质相吻合。 实施例3 :对已知再生蛋白质纤维一一牛奶蛋白纤维进行测试。 按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品 0. 2g于试管中，于20°C时用1.0 mol/L次氯酸钠 IOmL将样品溶解；将溶解样品包含未溶解 纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为lOmin，待离心完毕后，用 移液器移取2. OmL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀；从容量瓶中分别取 出ImL的样品于另外4个试管中，分别加入5mL考马斯亮蓝溶液，混匀；其中2个试管，2min 后颜色发生显著变化，由红色转变为蓝色；另外2个试管中的溶液经分光光度仪进行测试， 最大吸收波长都是594nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通 过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量较高，这与牛 奶蛋白纤维含有蛋白质的性质相吻合。 实施例4 :对已知再生蛋白质纤维一一大豆蛋白纤维进行测试。 采用实施例3中的测试过程，对大豆蛋白纤维进行测试。2min后显色反应非常明 显，最大吸收波长都是593nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白 质，通过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量较高， 这与大豆蛋白纤维含有蛋白质的性质相吻合。 实施例5 :对已知纤维素纤维--棉进行测试。 按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品 〇本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，其特征在于将考马斯亮蓝法应用到纤维中蛋白质的定性检测中，检测过程包括：步骤1：考马斯亮蓝G‑250溶液的制备；步骤2：纤维样品溶液的制备；步骤3：样品中蛋白质的定性鉴别。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴焕岭，朱驯，王岚，金绍娣，
申请(专利权)人：盐城工业职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32