唾液预处理试剂盒及唾液预处理方法技术

一种唾液预处理试剂盒，含有　　　　（Ａ）氢氧化钠水溶液，浓度为０．０１－１０ｍｏｌ／Ｌ，　　　　（Ｂ）酒石酸和／或柠檬酸的水溶液，浓度为０．０１－３ｍｏｌ／Ｌ，和　　　　（Ｃ）非离子表面活性剂和／或两性表面活性剂，　　　　成分（Ｃ）与成分（Ａ）和（Ｂ）的至少一个混合，或可以与成分（Ａ）和（Ｂ）分别提供，以及　　　　在成分（Ａ）、（Ｂ）和（Ｃ）的至少一个中含有选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质，含量为５－２５重量％。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过利用抗原抗体反应的免疫层析法，用于鉴定和定量测定作为人唾液中存在的致龋细菌之一的变异链球菌(Streptococcimutans)的唾液预处理试剂盒，以及使用该唾液预处理试剂盒的唾液预处理方法。
技术介绍
已知人口腔内的变异链球菌的存在与龋齿的产生间有密切的关系，因此，如果可以简便地检查人口腔内变异链球菌的有无以及量，则可以了解患病风险和目前的患病状况，为相当多的人带来益处。以住是实施在检查中利用抗原抗体反应的检查技术。例如，免疫酶技术，这是使用酶以发色浓度进行鉴定和定量测定的方法，为处理抗体和试样需要特殊的洗涤器和复杂精确的操作，并且为进行酶反应还需要温育器。另外，荧光抗体技术作为一种对与用荧光染料标记的抗体反应的抗原特异染色的方法不常使用，原因是需要荧光显微镜作为测定器。因此，提出了多种简便地利用抗原抗体反应的技术。例如，利用层析法的测定技术(例如参照美国专利5,591,645号、4,855,240号、4,435,504号和4,980,298号，和日本专利申请JP-A-61-145459和JP-A-6-160388号公报)。该技术简便性优异，因为抗原的有无及量仅通过在含有要鉴定和定量测定的抗原的试验溶液中混入这样采集的体液，然后渗入检查器具中即可测定。该技术一般称为免疫层析技术，鉴定和定量测定的原理已有详细揭示(例如参照，Se-Hwan Peak，Seung-Hwa Lee，Joung-Hawan Cho和Young-Sang Kim，“Development ofrapid One-Step immunochromatographic assay，Methods”，22卷，53-60页(2000))。看起来人口腔内的变异链球菌的鉴定和定量测定可以通过应用该技术实施，但由于存在下列问题该技术还没有投入实际应用。即，免疫层析技术使用的试样需要通过毛细管现象通过多孔膜。但是，由于变异链球菌这样的口腔细菌检查应用的主要试样是唾液，因此唾液中存在的称为粘蛋白的高粘性物质会阻塞多孔膜的孔。另外，由于粘蛋白具有将从口腔粘膜剥落的上皮附着细胞聚集的功能，所以多孔膜的孔被这些物质阻塞，从而阻碍了变异链球菌的通过。除粘蛋白外，存在的另外一个问题是免疫层析技术把变异链球菌的鉴定和定量测定变得复杂。即，要测定的变异链球菌是自体直径约1μm的细菌，但由于链球菌的性质，经常形成由10-20个或更多个细菌构成的链，这可能是妨碍在多孔膜中移动的因素之一。另外，变异链球菌从食物中的蔗糖形成具有粘着性的葡聚糖，并且经常严重聚集。变异链球菌的链形成和聚集造成多孔膜中的阻塞，另外减少了链球菌的表面积，对变异链球菌表面存在的抗原数的定量测定产生影响，这降低了测定的准确性。在免疫层析技术中，一般通过使用两个抗体进行分析对象的检测。第一抗体保持在由试样滴下那一侧的玻璃纤维等形成的多孔膜中，并且抗体一般用乳胶颗粒、金胶体颗粒等进行标记(以下有时称为标记抗体)。试样中存在要测定的对象时，当试样通过多孔膜时标记抗体识别要测定的分析对象并与其结合。分析对象与标记抗体的复合体通过毛细管现象向以例如带状固定有第二抗体(以下有时称为捕捉抗体)的另一多孔膜流动，并且识别、捕捉分析对象与标记抗体的复合体，并作为可见信号(此时呈带状)被检测出来。但是，免疫层析技术应用于作为试样的唾液时，标记抗体与变异链球菌的复合体被捕捉在保持标记抗体的膜中，但不能通过毛细管现象向固定有捕捉抗体的多孔膜有效流动，引起测定的准确性下降的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过利用抗原抗体反应的免疫层析法解决与鉴定和定量测定作为人唾液中的致龋细菌之一的变异链球菌的常规技术相关的问题，以及提供，其中可以以简便的操作消除由粘蛋白及变异链球菌的链形成引起的聚集，并且标记抗体与变异链球菌的复合体可以有效地从保持标记抗体的膜中流出。本专利技术人为解决上述课题进行了认真的研究，结果发现，通过用特定的酸和碱溶液进行处理可以得到下面的效果，从而完成了本专利技术。(1)唾液中的粘蛋白和葡聚糖溶解，作用于变异链球菌的外膜，从而抑制聚集。(2)而且，通过使用特定的表面活性剂，变异链球菌中的蛋白质被增溶，从而变异链球菌可有效地流过多孔膜。(3)此外，通过使用特定的金属盐，即氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁或硫酸锰，标记抗体与变异链球菌的复合体可以有效地从保持标记抗体的膜中流出。一方面，本专利技术涉及唾液预处理试剂盒，含有(A)氢氧化钠水溶液，浓度为0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或柠檬酸的水溶液，浓度为0.01-3mol/L，和(C)非离子表面活性剂和/或两性表面活性剂，成分(C)与成分(A)和(B)的至少一个混合，或与成分(A)和(B)分别提供，并且选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质以5-25重量％的量包含在成分(A)、(B)和(C)的至少一个中。该方面中优选(D)三(羟甲基)氨基甲烷与成分(A)、(B)和(C)的至少一个混合。另一方面，本专利技术还涉及唾液预处理试剂盒，含有(A)氢氧化钠水溶液，浓度为0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或柠檬酸的水溶液，浓度为0.01-3mol/L，(C)非离子表面活性剂和/或两性表面活性剂，和(D)含有三(羟甲基)氨基甲烷的水溶液，成分(C)与成分(A)、(B)和(D)的至少一个混合，或与成分(A)、(B)和(D)分别提供，并且选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质以5-25重量％的量包含在成分(A)、(B)、(C)和(D)的至少一个中。具体实施例方式在本专利技术的唾液预处理试剂盒中，优选作为成分(C)的非离子表面活性剂是选自聚乙二醇单辛基苯基醚、正辛基-β-D-葡糖苷、正庚基-β-D-硫葡糖苷、正辛基-β-D-硫葡糖苷、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(nonylphenoxypolyethoxyethanol)和聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯的一种、或两种以上的混合物，以及作为成分(C)的两性表面活性剂为选自CHAPS(3-((3-胆酰胺丙基)-二甲基铵基)-1-丙烷磺酸盐)和CHAPSO(3-((3-胆酰胺丙基)-二甲基铵基)-1-羟基丙烷磺酸盐)的一种、或两种以上的混合物。一方面，通过利用本专利技术的唾液预处理试剂盒的免疫层析法鉴定和定量测定变异链球菌的唾液预处理方法包括下面的步骤将选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质以5-25重量％的量与选自下述(A)、(B)和(C)的至少一个混合(A)氢氧化钠水溶液，浓度为0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或柠檬酸的水溶液，浓度为0.01-3mol/L，和(C)非离子表面活性剂和/或两性表面活性剂；和通过以任意顺序滴下成分(A)、(B)和(C)将它们混合(以下称为第一方法)。另一方面，通过免疫层析法鉴定和定量测定变异链球菌的唾液预处理方法也包括下面的步骤将选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质以5-25重量％的量与选自下述(A)和(B)的至少一个混合(A)氢氧化钠水溶液，浓度为0.01-10mol/L和(B)酒石酸和/或柠檬酸的水溶液，浓度为0.01-3mol/L；将(C)非离子表面活性剂和/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：立野敦史，
申请(专利权)人：株式会社GC，
类型：发明
国别省市：