一种用于保存唾液中DNA的组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种用于保存唾液中DNA的组合物，包括变性剂、缓冲液、螯合剂、氯化钠和聚乙二醇。本发明专利技术组合物能够在室温条件下长时间、有效的保存唾液中的DNA，并能够有效降低离体唾液中DNA的降解，保证DNA的完整性，易于后续的核酸检测研究，且使用简单，操作方便，大大节省了唾液样品的处理时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学领域，特别涉及一种用于保存唾液中DNA的组合物。
技术介绍
目前，基因检测已广泛应用于生物学、医学、法学、医药领域，其通过对受检者血液、血清、血浆、唾液、尿液、其它体液、组织或细胞等中的DNA的基因编码序列进行测定和定位分析，从而获知受检者基因信息。基因检测对于遗传疾病的控制与预防、个体化用药方案的制定、个人身份信息确认、亲子关系鉴定等具有重要意义，例如可通过筛查药物性耳聋易感基因型，预防氨基糖甙类抗生素中毒性耳聋；通过检测CYP2C19基因多态性，从而预测药物给药条件、毒副作用的强弱和药物疗效；通过对个体MTHFR基因C677T位点基因型进行检测可以提示个体发生脑卒中等心脑血管疾病及新生儿缺陷的风险，并预测甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶等化疗药物的治疗疗效和毒副作用；通过提取检测家属的DNA对死者身份进行辨认等。用于提取DNA的体液通常为静脉血液中的白细胞，然而，采集静脉血需专业人员操作，并且采用侵入式方式，会对人体造成一定程度的创伤和不适，血液采集还可能存在交叉感染的风险，此外，血液易于结块，不利于长时间保存，给提取带来许多不便。从唾液中提取DNA相对于传统血液DNA采集方式来说，采集过程简单方便，无需经专业训练的人员即可操作，且为非侵入式采集方式，可避免对受检者造成不必要的痛苦，容易被接受，能更大限度的扩大取样范围，尤其适合大规模人群调查。目前，从唾液中提取DNA，主要是采用棉签擦拭或口腔拭子获取口腔黏膜脱落细胞，该方法所采集的DNA量少，样品保存时间短，且需要低温保存，此外，唾液脱离人体后容易发生变质、降解。因此，如何有效完整的保存唾液样品，对于基于唾液中DNA的基因扩增和检测具有重要意义。现有技术CN102440234A公开了一种人体唾液保存固定液，包括蔗糖、Tris-HCl、MgCl2、异硫氰酸胍和水，能够灭杀唾液中含有的细菌、抑制核酶的活性。然而，该固定液组份中包含镁离子，属于核酸酶激活剂，不利于DNA的稳定性保存；异硫氰酸胍虽然能够抑制核酸酶的活性，但对细胞的破坏性较强，不利于DNA的完整性保存。现有技术CN102676501A6公开了一种唾液DNA保存剂，包括三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、糖、氯化钠和表面活性剂，其能够实现唾液中DNA的常温下长时间保存。然而，由于唾液样品中存在脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶，能够分解DNA或RNA，较低浓度的表面活性剂，难以充分抑制核酸酶的活性，可能影响DNA的稳定性。目前，存在开发出一种高效、稳定、常温下长时间用于保存唾液中DNA的组合物的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的技术缺陷，提供一种高效、稳定、常温下长时间用于保存唾液中DNA的组合物。为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于保存唾液中DNA的组合物，包括变性剂、缓冲液、螯合剂、氯化钠和聚乙二醇。在本专利技术一具体实施方式中，所述变性剂为盐酸胍、苯酚和表面活性剂中的一种或几种。其中，所述表面活性剂包括但不限于：十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate，SDS)、十二烷基肌氨酸钠(SodiumN-lauroylsarcosine，NLS)、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、吐温20(聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯)、吐温40(聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯)、吐温60(聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯)、吐温65(聚氧乙烯失水山梨醇三硬脂酸酯)、吐温80(聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)中的一种或几种。在本专利技术一具体实施方式中，所述变性剂在组合物中的浓度按质量体积百分比计大于30％，优选为30～60％，更优选为40～60％。本专利技术实施方式中，通过变性剂抑制脱氧核糖核酸酶(DNA酶)以及核糖核酸酶(RNA酶)的活性，并且不会导致DNA链的断裂，保证唾液中DNA的完整性。在本专利技术一具体实施方式中，所述变性剂包括盐酸胍。本专利技术实施方式中，盐酸胍可较好的抑制DNA酶和RNA酶的活性，防止唾液中的DNA降解，使唾液中DNA保持长时间完整性和稳定性；此外，可通过盐酸胍溶解唾液中的蛋白质，将蛋白从核酸上解离下来，减少后续检测中唾液样品中DNA提取和纯化时间。在本专利技术其它实施方式中，所述变性剂为盐酸胍和表面活性剂的组合。在本专利技术一具体实施方式中，所述盐酸胍在组合物中的浓度按质量体积百分比计大于20％，优选为20～60％，更优选为30～60％，最优选为40～60％。在本专利技术一具体实施方式中，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液中的一种，优选为Tris-HCl缓冲液。本专利技术实施方式中，通过缓冲液为组合物提供合适的pH值和缓冲环境，防止核酸被破坏。在本专利技术一具体实施方式中，所述螯合剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸盐或其水合物(如乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钠二水、乙二胺四乙酸四钠二水等)、柠檬酸、柠檬酸盐或其水合物(如柠檬酸钠、柠檬酸钠二水、柠檬酸钠三水、柠檬酸钾、柠檬酸钾一水、柠檬酸钾三水等)、环己二胺四乙酸中的一种或几种。本专利技术实施方式中，通过螯合剂螯合唾液中的Mg2+、Ca2+或Mn2+离子，防止金属离子与DNA的磷酸骨架相结合，此外，还可抑制DNA酶的活性。在本专利技术一具体实施方式中，所述聚乙二醇平均分子量为4000-8000，例如PEG4000、PEG6000、PEG8000等，优选为PEG6000。本专利技术中PEG6000是指平均分子量约为6000的聚乙二醇。在本专利技术一具体实施方式中，所述用于保存唾液中DNA的组合物包括如下浓度的组分：30～60％的变性剂、5～20mM的Tris-HCl缓冲液(pH6.8-8)、1.5～2.5％的EDTA、100～300mM的柠檬酸钠或其水合物、600～900mM的氯化钠、0.2～1％的PEG6000，溶剂为水；其中，所述变性剂、EDTA、PEG6000的浓度按质量体积百分比计；所述EDTA为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钠二水、乙二胺四乙酸四钠二水中的一种或多种；所述柠檬酸钠或其水合物包括柠檬酸钠、柠檬酸钠二水、柠檬酸钠三水中的一种或多种。在本专利技术一具体实施方式中，所述用于保存唾液中DNA的组合物包括如下浓度的组分：30～60％的变性剂、5～20mM的Tris-HCl缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于保存唾液中DNA的组合物，包括变性剂、缓冲液、螯合剂、氯化钠和聚乙二醇。

【技术特征摘要】
1.一种用于保存唾液中DNA的组合物，包括变性剂、缓冲液、
螯合剂、氯化钠和聚乙二醇。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述变性剂为盐酸
胍、苯酚和表面活性剂中的一种或几种；所述表面活性剂选自：十二
烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯失
水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失
水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯失
水山梨醇单油酸酯中的一种或几种。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述变性剂包括盐
酸胍；优选的，所述变性剂为盐酸胍和表面活性剂的组合。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述盐酸胍在组合
物中的浓度按质量体积百分比计大于20％；优选为20～60％；更优选
为30～60％；最优选为40～60％。
5.如权利要求1-4任一项所述的组合物，其特征在于：所述缓冲
液为三羟甲基氨基甲烷、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、巴比妥缓
冲液中的一种；优选为Tris-HCl缓冲液。
6.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于：所述螯
合剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸盐或其水合物、柠檬酸、柠檬酸
盐或其水合物、环己二胺四乙酸中的一种或几种。
7.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于：所述聚
乙二醇平均分子量为4000-8000。
8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物包括如
下浓度的组分：30～60％的变性剂、5～20mM的Tris-HCl缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯东，杨海艳，沈东艳，
申请(专利权)人：智海生物工程北京股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11