一种用于干木材的DNA提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于干木材的DNA提取方法，通过低温研磨、加热、离心、沉淀吸附、溶解和PCR扩增等处理步骤，从干木材尤其是其心材组织中高效提取DNA。本发明专利技术不仅增加了从干木材尤其是其心材组织中提取的DNA数量，而且提高了所提取的DNA纯度，可直接应用于分子生物学研究，为木材物种的鉴定提供了新的方法。

【技术实现步骤摘要】
201610230240

【技术保护点】
一种用于干木材的DNA提取方法，其特征在于：利用DNA裂解液处理研磨的木粉，并通过加热、离心、沉淀吸附、溶解和PCR扩增有效提取DNA。

【技术特征摘要】
1.一种用于干木材的DNA提取方法，其特征在于：利用DNA裂解
液处理研磨的木粉，并通过加热、离心、沉淀吸附、溶解和PCR
扩增有效提取DNA。
2.如权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干木材样品研磨处理成木粉，将研磨好的木粉装入离心
管中；
(2)向步骤(1)得到的装有木粉的离心管中加入DNA裂解液，
涡旋振荡混匀后水浴加热，将离心管冷却，再加入除杂缓冲液，
混匀后离心；
(3)将步骤(2)得到的上清液转移至新离心管中，向新离心管
中加入DNA沉淀缓冲液，用移液器混匀后离心；
(4)将步骤(3)中得到的上清液弃掉，向离心管中加入清洗缓
冲液，离心清洗；
(5)向步骤(4)得到的沉淀有DNA的离心管中加入双蒸水，
静置溶解，即可得到DNA提取液；
(6)将步骤(5)得到的DNA作为模板，加入到反应体系中进
行PCR扩增反应，得到DNA目的片段。
3.如权利要求2所述的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干木材样品外表面去除，将剩余样品研磨处理成木粉，
研磨好后装入离心管中；
(2)向步骤(1)得到的装有木粉的离心管中加入DNA裂解液，
涡旋振荡混匀后水浴加热，将离心管冷却，再按照体积比加入
0.5-1.0倍体积的除杂缓冲液，混匀后离心，离心速率为

\t5000-16000rpm，离心时间为5-15min；
(3)将步骤(2)得到的上清液转移至新离心管中，向新离心管
中按照体积比加入1.5倍的DNA沉淀缓冲液，混匀，低温静置后
离心，离心速率为5000-16000rpm，离心时间为1-15min；
(4)将步骤(3)中得到的上清液弃掉，向离心管中加入清洗缓
冲液，离心清洗，离心速率为5000-16000rpm，离心时间为1-15min；
(5)向步骤(4)得到的沉淀有DNA的离心管中加入ddH2O，4℃
环境下静置溶解，即可得到DNA提取液；
(6)将步骤(5)得到的DNA作为模板，加入到50μl反应体系中
进行PCR扩增反应，得到DNA目的片段。
4.根据权利要求1-3任一所述的提取方法，其特征在于：所述的干
木材包括但不限于气干木材、干燥窑处理木材、木材标本、考古
木材、长期存储木材的边材、心材；所述的DNA裂解液为：
3％(w/v)CTAB、0.1M的PTB(N-phenacylthiazoliumbromide)、6M
的Gu...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷亚方，焦立超，卢芸，姜笑梅，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院木材工业研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11